一次性卫生用品

一次性卫生用品 细菌菌落总数与初始污染菌检测法 (1)样品的处理 在100级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少3个包装，从每个包装中取样，准确称取10g?1g样品。剪碎后加入到200ml灭菌生理盐水(如产品中含有抑菌或杀菌成份，须加入相应的中和剂)中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。液体产品用原液直接作样液(如产品中含有抑菌或杀菌成份，须在样液中加入相应的中和剂)。 如被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释液量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。 • (2)活菌培养计数 待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液接种5个平皿，参照前面进行活菌培养计 数。 • (3) 结果报告 当总菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。如果样品 菌落总数超过标准值，按下述方法进行复检和结果报告。 (4) 复检方法 取留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定者，则判定被 检样品合格;如其中仍有1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。 大肠菌群检测方法 1) 操作步骤 取样液5ml接种50 ml乳糖胆盐发酵管，置35??2?培养24 h，若不产酸也不产气，则报告为大肠菌群阴性。 如产酸产气，则划线接种伊红亚甲蓝琼脂平板，置35??2?培养18h,24h，观察平板上菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。取疑似菌落1,2个作革兰染色镜检，同时接种乳糖发酵管，置35??2?培养24 h，观察产气情况。 (2) 结果报告 乳糖胆盐发酵管产酸产气，乳糖发酵管产酸产气，在伊红亚甲蓝平板上有典型大肠菌落，革兰染色为阴性无芽孢杆菌，可报告被检样品检出大肠杆菌。 铜绿假单胞菌检测方法 • (1) 操作步骤 取样液5 ml，加入到50 ml SCDLP培养液中，充分混匀，置35??2?培养18h, 24 h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面呈现一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或 蓝绿色。从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板， 置35??2?培养18h,24h，观察菌落特征。铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好， 菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不长。取可疑菌落涂片 作革兰染色，镜检为革兰阴性菌者应进行下列试验: 氧化酶试验:取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻棒挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，30s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性，不变色者为阴性。 绿脓菌素试验:取2个,3个可疑菌落，分别接种在绿脓菌素测定用培养基斜面，35??2?培养24 h，加入三氯甲烷3 ml,5ml，充分振荡使培养物中可能存在的绿脓菌素溶解，待三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1ml，振荡后静置片刻。如上层出现粉红色或紫红色即为阳性，表示有绿脓菌素存在。 • 硝酸盐还原产气试验:挑取被检菌纯培养物接种在硝酸盐胨水培养基中，置35?? 2?培养24 h，培养基小倒管中有气者即为阳性。 明胶液化试验:取可疑菌落纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置35??2?培 养24h，取出放于4?,10?，如仍呈液态为阳性，凝固者为阴性。 42?生长试验:取可疑培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置42?培养24h, 48h，有铜绿假单胞菌生长为阳性。 • (2) 结果报告 被检样品经增菌分离培养后，证实为革兰阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验均 为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。如绿脓菌素试验阴性而液化明 胶、硝酸盐还原产气和42?生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜 绿假单胞菌。 金黄色葡萄球菌检测方法 (1) 操作步骤 取样液5ml，加入到50ml SCDLP培养液中，充分混匀，置35??2?培养24 h。自上述增菌液中取1或2接种环，划线接种在血琼脂培养基上，置35??2?培养24h,48 h。在血琼脂平板上该菌菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革兰染色镜检，金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，排列成葡萄状，无芽孢与荚膜。镜检符合上列情况应进行下列试验: 甘露醇发酵试验:取上述菌落接种甘露醇培养液，置35??2?培养24h，发酵甘露醇产酸者为阳性。 血浆凝固酶试验:玻片法:取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5min如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固则为阳性，如两者均无凝固则为阴性。凡盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。试管法:吸取1:4新鲜血浆0.5ml，放灭菌小试管中，加入等量待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混匀，放35??2?温箱或水浴中，每半小时观察一次，24 h 之内呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物各0.5 ml作为阳性与阴性对照。 • (2) 结果报告 凡在琼脂平板上有可疑菌落生长，镜检为革兰阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇 产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。 溶血性链球菌检测方法 • (1) 操作步骤 取样液5ml加入到50ml葡萄糖肉汤，35??2?培养24 h。将培养物划线接种 血琼脂平板，35??2?培养24h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色， 半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。挑 取典型菌落作涂片革兰染色镜检，应为革兰阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上 述情况，应进行下列试验: • 链激酶试验:吸取草酸钾血浆0.2 ml(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉 淀，吸取上清液)，加入0.8 ml灭菌生理盐水，混匀后再加入待检菌24 h肉汤培养 物0.5 ml和0.25 % 氯化钙0.25 ml，混匀，放35??2?水浴中，2 min观察一次(一 般10 min内可凝固)，待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继 续放置24 h观察，如凝块全部溶化为阳性，24 h仍不溶化为阴性。 杆菌肽敏感试验:将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35??2?下放置18h,24h，有抑菌带 者为阳性。 (2) 结果报告 镜检革兰阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌 真菌菌落总数检测方法 (1) 操作步骤 待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作真菌计数。共接种5个平皿 ，每个平皿中加入1 ml样液，然后用冷却至45?左右的熔化的沙氏琼脂培养基15ml,25ml倒入每个平皿内混合均匀，琼脂凝固后翻转平皿置25??2?培养7d，分别于3d、5d、7d观察，计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。 (2) 结果报告 菌落呈片状生长的平板不宜采用;计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果: 式中:XF为样品真菌菌落总数，cfu/g 或 cfu/ml;Nt为 5块沙氏琼脂培养基平板上的真菌菌落总数;K为稀释度。 当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。 如果样品菌落总数超过本标准的规定，按下述方法进行复检和结果报告。 (3) 复检方法 将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准的规定，则判定被检样品合格;其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。 附录A 消毒试验用试剂和培养基配方 1.磷酸盐缓冲液 (PBS，0.03mol/L，pH7.2) 无水磷酸氢二钠 2.83g 磷酸二氢钾 1.36g 蒸馏水加至 1000ml 将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH 至 7.2,7.4，于 121? 压力蒸气灭菌 20min备用。 • 2.革兰染色液 第1液:结晶紫溶液 结晶紫乙醇饱和溶液 100ml 结晶紫 4g,8g 95%乙醇 100ml 1%草酸胺溶液 第2液:卢戈碘液 碘化钾 2g 碘 1g 蒸馏水 200ml 第3液:脱色剂 (1)95%乙醇 (2)丙酮乙醇溶液 100ml 95%乙醇 70ml 丙酮 30ml 第4液:稀释石炭酸复红液 碱性复红乙醇饱和溶液 10ml 碱性复红 5g,10g 5%石炭酸溶液 90ml 蒸馏水 900ml 3.标准硬水(硬度342mg/L) 氯化钙(CaCl2) 0.034g 氯化镁(MgCl2?6H2O) 0.139g 蒸馏水加至 1000ml。 • 4.有机干扰物 牛血清白蛋白 30g 蒸馏水 1000ml 溶解后用微孔滤膜(孔径为0.45μm)滤过除菌，冰葙保存备用。 5.稀释液:胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)。 胰蛋白胨 1.0g 氯化钠 8.5g 先用900ml以上蒸馏水溶解，并调节pH值在7.0?0.2，最终用蒸馏水加至1000ml，分装后，经121?压力蒸汽灭菌后使用。 • 6.胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB) 胰蛋白胨 1.5% 大豆蛋白胨 0.5% 氯化钠 0.5% 用蒸馏水配制而成，调节pH为7.2?0.2，经121?压力蒸汽灭菌后使用。 中和剂鉴定试验 • 目 的 确定所选中和剂是否适用于拟进行的细菌和真菌杀灭试验。 试验器材 • 1)试验菌菌悬液和菌片(见 2.1.1.2)。 (2)刻度吸管(1.0ml、5.0ml)。 (3)小平皿(4 cm,6cm 直径)。 (4)恒温水浴箱。 (5)稀释液:见附录A。 (6)胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA):见附录A。 第1组 消毒剂 + 菌悬液 ?培养 观察消毒剂对试验菌有无杀灭或抑制能力。 第2组 (消毒剂 + 菌悬液) + 中和剂 ? 培养 观察残留消毒剂被中和后受到清毒剂作用后的试验菌是否能恢复生长。 第3组 中和剂 + 菌悬液 ? 培养 观察中和剂是否抑菌。 第4组 (消毒剂 + 中和剂)+ 菌液 ? 培养 观察中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。 第5组 稀释液 + 菌悬液 ? 培养 作为菌数对照。 第6组 稀释液 + 中和剂 + 培养基 ? 培养 作为阴性对照。 • (7)电动混合器 中和剂悬液定量鉴定试验操作程序 根据试验分组，准备足量试管和平皿，依次进行编号。将消毒剂按所需浓度配制好后，置20??1?水浴中待用。 制备试验菌悬液。取2.0ml试验菌悬液于试管中，加入2.0ml有机干扰物质，制成含有机干扰物质的菌悬液，置20??1?水浴中备用。 1)第 1 组。吸取1.0ml含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置20??1? 水浴中 5min 后，再吸加4.0ml消毒剂于试管内，混匀。作用至预定时间，吸此样液 0.5ml 加于含有 4.5ml 稀释液的试管中，混匀。吸取该最终样液1.0ml，接种于平皿中，做活菌培养计数。 • (2)第2组。吸取1.0ml含有机干扰物质试验菌悬液于试管内，置 20??1? 水 浴中 5min 后，再吸加4.0ml消毒剂于试管内，混匀。作用至预定时间，吸此样液 0.5ml 加于含 4.5ml 中和剂溶液管中，混匀，作用10min。吸取该最终样液1.0ml， 接种于平皿中，做活菌培养计数。 如平板生长菌落数均超过 300 个，应以稀释液对上述最终样液作适宜稀释后，再次 进行活菌培养计数。 • (3)第 3 组。吸取0.1ml含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置 20??1? 水 浴中 5min 后，加入0.4ml硬水，混匀。加入4.5ml中和剂，作用10min。用中和剂 做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各吸取 1.0ml，分别接种于平皿中，做活菌 培养计数。 • (4)第 4 组。吸取0.1ml含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置 20??1? 水 浴中 5min 后，吸加4.9ml中和产物溶液(以0.4ml消毒剂加4.5ml中和剂，作用 10min 配制而成)于试管内，混匀。作用10min，吸取该最终样液 0.5ml，用中和 产物溶液做 10 倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各吸取 1.0ml，分别接种于平皿 中，做活菌培养计数。 • (5)第5组。吸取0.1ml含有机干扰物质的试验菌悬液于试管内，置20??1? 水 浴中5min 后，吸加0.4ml硬水于试管内，混匀。加入4.5ml稀释液，作用 10min ， 用稀释液做10倍系列稀释，选适宜稀释度悬液，各吸取 1.0ml，分别接种于平皿中， 做活菌培养计数。 • 6)第 6 组。分别吸取稀释液、中和剂和硬水各1.0ml于同一无菌平皿内，倒入上 述试验同批次的培养基25ml，培养观察。如出现细菌生长，可能提示试验材料或操 作过程中有污染。应重新进行试验 • 试验结果符合以下全部条件，所测中和剂可判为合格: (1) 第 1 组无试验菌，或仅有极少数试验菌菌落生长。 (2) 第 2 组有较第 1 组为多，但较第 3、4、5(组)为少的试验菌菌落生长， 并符合下表 要求者。 注:对抑菌作用不明显消毒剂(如乙醇)所用中和剂的鉴定试验中，当第 1 组与第 2 组菌落数相近，难以达到本表要求时，可根据具体情况另行作出判断和评价。 • 表 中和剂鉴定试验合格标准中对第 1 组与第 2 组菌落数的要求 第 1 组平板平均菌落数 第 2 组平板平均菌落数 0 >5 X(1,10) >(X + 5) Y(>10) >(Y + 0.5 Y) 3) 第 3、4、5(组)有相似量试验菌生长，悬液试验在1×107 cfu/ml,5×107 cfu/ml之间，载体试验在 5×105 cfu/片,5×106 cfu/片 之间。其组间菌落数误差率应不超过 15%。第3、4、5 组间菌落数误差率计算公式其计算公式如下。 (4)第6组无菌生长。否则，说明试剂有污染，应更换无污染的试剂重新进行试验。 (5)连续 3 次试验取得合格评价。 • (1)试验所分各组均有其特定意义，不得任意删减。 (2)严守无菌操作，保持试液和器材的无菌，注意更换吸管，以防止沾染影响试验 的准确性。 (3)在计算微生物浓度时，须考虑其稀释倍数。 (4)试验组序应按本所列排列。 抑菌环试验 • 原理 利用抑菌剂不断溶解经琼脂扩散形成不同浓度梯度，以显示其抑菌作用。试验通过 抑菌环大小以判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于抑菌剂与溶出性抗(抑)菌 产品的鉴定。 • (1)金黄色葡萄球菌 (ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌 (ATCC 10231) 菌 悬液(见 2.1.1.2)及根据抑菌剂特定用途所用的其他菌悬液。 (2)抑菌剂载体 (5 mm 直径园形新华一号定性滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后， 置 120? 烤干2h，保存备用)。 (3)活菌培养计数所需器材 (4)微量移液器(5μl,50μl，可调式)。 (5)游标卡尺。 (6)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基与沙堡琼脂培养基 • (1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂，取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑 菌剂溶液 20μl，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37?) 中烤 干，或置室温下自然干燥后备用。 溶出性抗(抑)菌产品，可直接制成直径为 5mm，厚不超过 4mm圆片(块)， 每 4 片(块) 一组。 (2)阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水 20μl，干燥后备用。 溶出性抗(抑)菌产品的阴性对照样本，应取同种材质不含抑菌成份的样品，制成与试验组大小相同的样片(块)。 • (3)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为 5×105cfu/ml,5×106cfu/ml 试验菌悬 液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动 60?，最 后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥 5min。 • (4)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1 片 阴性对照样片，共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm以上，与平板的周缘相距 15mm 以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使 其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37?温箱，培养16h,18h 观察结果。用游标卡 尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) 并记录。试验重复3次。 测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。 测量其直径应以抑菌 环外沿为界。 • (1)抑菌作用的判断: 抑菌环直径大于 7mm 者，判为有抑菌作用。 抑菌环直径小于或等于 7mm 者，判为无抑菌作用。 (2) 3 次重复试验均有抑菌作用结果者，判为合格。 (3)阴性对照组应无抑菌环产生。否则试验无效。 注意事项 (1)每次试验均应设置阴性对照，不可省略。在报告中亦必须将对照组的结果列 出。 (2)接种用细菌悬液的浓度应符合要求。浓度过低，接种菌量少，抑菌环常因之 增大; 浓度过高，接种量过多，抑菌环则可减小。 (3)应保持琼脂浓度的准确性，否则可影响抑菌环的大小。 (4)培养时间不得超过 18h。培养过久，部分细菌可恢复生长，抑菌环变小。 (5)抑菌环直径可受抑菌剂的量、抑菌性能和干湿度影响。故抑菌剂滤纸片应在试验 当天制备。 活菌培养计数技术 • 适用范围 测定细菌悬液、菌片、采样液等样本中含有活菌的数量。 试验器材 (1)刻度吸管(1.0ml、5.0ml)。 (2)稀释液:见附录A。 (3)营养琼脂培养基:见附录A。 (4)电动混合器 操作程序 • 本规范要求在杀菌试验中的活菌培养计数统一使用倾注法。其操作程序如下。 (1)对菌悬液可直接进行培养计数。对菌片、采样棉拭与小型固体样本等，应将其 上的细菌洗下成为菌悬液后进行培养计数。 • 洗菌时，一般以稀释液为洗液。具体方法如下: 取含 5.0ml 稀释液无菌试管，对菌 片或小型固体样本直接投入即可，对棉拭则将其采样端剪入管内，每管一份样本。 而后，用电动混合器混合20s(或在手掌上用力振敲 80 次)，将菌洗下形成菌悬液。 以上操作应严格按无菌要求进行。 2)将试管按需要数量分组排列于试管架上， 每管加入 4.5ml 稀释液。各组由左向右，逐管标上 10-1、10-2、10-3......等。 3)将菌悬液样本在用电动混合器混合20s(或在手掌上用力振敲 80次)，随即吸取 0.5ml加至 10-1 管内。 (4)将 10-1 管依前法用电动混合器混合20s(或在手掌上用力振敲 80次)，混匀，再吸取出0.5ml加入10-2 管内。如此类推，直至最后一管。必要时，还可作某稀释度的1:1或1:4稀释。 (5)选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为 15cfu,300cfu 者为宜)，吸取其中混合均匀的悬液 1.0ml 加于无菌平皿内。每一稀释度接种 3个平皿。一般需接种2个,3个不同稀释度。平皿加样前，应先按组编号，以免弄混。 (6)将冷至40?,45?的熔化营养琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿15ml,20ml。 (7)将平皿盖好，即刻轻轻摇动混匀，平放于台上。待琼脂凝固后，翻转平皿，使底向上，置37?温箱内培养。 (8)每日观察细菌生长情况。培养至规定时间(细菌繁殖体为 48h，白色念珠菌与细菌芽孢为 72h)，计数最终结果的菌落数。 (9)对菌片和采样棉拭洗液的活菌培养计数，先按各试验要求处理(如去除残留消毒剂等)，而后取其最终样液按上法进行培养计数。 (10)计数菌落时，一般以肉眼观察，必要时用放大镜检查。以菌落数在15cfu,300cfu的平板为准，每个稀释度 3 个平板生长菌落数全合乎上述标准，则以该3个平板的菌落平均值作为结果;若有2个符合上述标准，则以该合格的两个平板菌落的平均值为结果。但对黑曲霉菌活菌计数及杀灭试验时，平板菌落数应在15cfu,100cfu之间。 对估计菌量极少的样本(如消毒处理后样本)，在培养计数时可不作稀释，即使平板菌落数未达15时，亦可用其计算最终结果。 将求得的平均菌落值，再乘以稀释倍数，即得每毫升原样液中的菌量。菌量单位为cfu。 注意事项 (1)严格无菌操作，防止污染。 (2)认真检查试验器材有无破损(要特别注意试管底的裂痕和破洞)，以防丢失样本和污染环境。 (3)注意菌液的均匀分散。 (4)稀释或取液时要准确，尽量减少吸管使用中产生的误差。 (5)每吸取一个稀释度样液，必须更换一支吸管，以减少误差。 (6)样液接种于平皿后应尽快倾注营养琼脂培养基，避免样液干燥于平皿上，影响结果的准确性。 (7)倾注时琼脂培养基温度不得超过45?，以防损伤细菌或真菌。倾注和摇动时，动作应尽量平稳，以利细菌分散均匀，便于计数菌落。勿使培养基外溢，以免影响结果的准确性和造成环境的污染。 (8)为提高试验成功率，最好先用浊度计对原菌液含菌量做出估计，尽可能在首次试验时所取的有限稀释范围内(2个,3个 稀释度)即有长菌在 15cfu,300cfu 之间的平板。 (9)结果计算时，必须弄清稀释倍数，以免计算错误。 消毒实验室的基本要求 • 检验机构的微生物实验室应采取封闭式布局，建筑应便于清洁、消毒。为避免污染 应在相对正压洁净条件下进行，但有时因特殊需要，用致病菌作指示菌时，则应在 生物安全柜(负压)内进行。对无菌产品的无菌检查试验， 必须在100 级洁净度 的实验室，或100 级层流操作柜中进行 无菌操作的基本要求 • (1)试验开始前，应以湿式方法清洁台面和打扫室内地面，然后以紫外线或其他方 法对实验室内空气进行消毒; (2)实验人员应穿戴工作服、口罩、帽子;进行无菌检验时，需经风淋后进入实验 室，然后，正确穿戴好无菌隔离衣、帽和口罩; 3)每吸取一次不同样液应更换无菌吸管，接种环(针)需在火焰上烧灼灭菌后，才可再次使用; (4)要求无菌的试剂，如蒸馏水、生理盐水、磷酸盐缓冲液、培养基、牛血清白蛋白、标准硬水、中和剂等，均需灭菌或过滤除菌; • (5)无菌器材和试剂，使用前须检查容器或包装是否完整，有破损者不得使用; (6)正在使用的无菌器材和试剂不得长时间暴露于空气中; (7)移液或接种时，应将试管口和琼脂平板靠近火焰，防止污染; • (8)所有用过的污染器材，应立即放入盛有消毒液的容器中，以防止对周围环境和 清洁物品造成污染; (9)若不慎发生微生物培养物摔碎或其他试验微生物泄漏事故时，不论是否具有致 病性，均应立即对污染及可能波及的区域进行消毒处理; (10)全部试验结束后，应按常规对室内空气和环境表面进行消毒处理。