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线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的改进与探讨。
曹勇军,程彦斌
(兰州医学院,甘肃兰州730000)
摘要目的:提供一种比较简易的大鼠局灶一|生脑缺血佴灌注模型制备方法。方法:对ZeaLonga线捶法进行改进.
并与ZeaLcuaga法从rCBF、神经功能缺陷
以及梗塞灶体积等三个方面进行对比研究。结果:我们改进的践栓
法与ZeaLonga法相比,在rCBF、神经功能缺陷评分n厦梗塞灶体积等方面,两者之间无显著性差异(t检验.P>
0.05)=结论:改进线柽法建立的太鼠局灶性脑缺血佴灌注模型也同样可靠、稳定,且较ZeaLonga法易操作.
关键词: 大鼠;脑缺血再灌注;模型
中图分类号:R743302 文献标识码:B 文章编号:10006834C2001)0219803
建立理想的缺血性脑血管病模型,是脑血管病
研究的重要课题。其中采用线栓法阻断大鼠大脑中
动脉(MCA)来建立局灶性脑缺血再灌注模型是研
究缺血性脑血管病的常用方法,在科研中应用广泛。
本文在参考ZeaLonga线栓法H】的基础上,对其进
行了改进,并与ZeaLonga法进行对比研究,以期为
研究局灶性脑缺血再灌注损伤提供比较理想、简易
的实验动物模型。
1材料和方法
1.I实验动物与材料
Wistar太鼠14只,雌雄各半,体重200--250g,
兰州医学院实验动物中心提供。大鼠随机分为改进
线栓法组(A组)和ZeaLonga线栓法组(B组),每组
各7只。血管内栓塞用丝线为美国产4—0单股蓝
色心血管外科尼龙丝线,头端烫成光滑球形,球体直
径约为0.2mm,消毒备用。梗塞灶染色用氯化三
苯基四氮唑(TTc),由上海生工生物公司提供,用
02moI/L磷酸缓冲液(PBS)配制成2%rrc溶液
(pm.5),避光保存。
l2模型制作
1.2l改进线拴法本方法主要特点是永久结扎
右颈总动脉(CCA),从结扎处上方()CA插入栓线,
再灌注时,抽回栓线至CCA内,缺血区的再灌注主
要通过颅底Willis环的侧枝循环来实现的。具体操
作如下:10%水台氯醛(35mg/100g)腹腔麻醉后,
常规消毒.取颈正中切口,切开皮肤皮下组织,暴露
切断二腹肌肌腹,分离OcA,结扎0CA近心端,向
上分离右颈外动脉(ECA)与颈内动脉(ICA),在近
CCA分叉处结扎ECA,用小血管夹夹住()CA远心
端(cCA结4'L处与上血管夹处保持5mm左右距
离),在此处放置一打好结的丝线,勿收紧线结,在此
线下端剪--d,口,插人己制备好的栓线头端,收紧线
结,松去血管夹,顺CCA经ICA将栓线送至颅内,
遇阻力而止,栓线插人深度为(23±0.5)rrtrn,此时
栓线头端正好位于MCA起始部,阻断了MCA的血
流。缝合切口,留置线头于体外,实现再灌注时,抽
提栓线至CCA内即可。
1.2.2ZeaLonga线拴法本方法主要特点是不用
永久结扎右CCA,栓线从右ECA插入,再灌注时,
栓线抽回ECA内,再灌注主要通过右CCA来实现
的。具体操作如下:麻醉及切口同上,分离右CCA、
ECA和IcA,在近cCA分叉处约5—8nm处结扎
ECA,在解剖显微镜下分离结扎ICA的颅外分支翼
腭动脉,用血管夹分别阻断cCA与ICA的血流,在
ECA近分叉处留置一打好结的丝线,勿收紧线结,
在此线上端剪一小口,插人栓线头端,收紧线结,松
去血管夹,顺ECA经ICA将栓线送人颅内,插入深
度为(20±0.5)iilrll,其余同上。
以上两组动物在手术中均用白炽灯加热,以保
持体温恒定(肛温37℃左右),两组遗模成功后,缺
血6h再灌注18h后处死。
1.3观察指标
1 3 1 大脑皮层局部血流量(衄F)测定根据氢
清除原理,用组织血流仪(LsⅢ型,北京神经外科研
究所研制)分别在缺血前、缺血后0.5h、再灌注后0.5
h、1h,2h5个时限点测定右额顶叶皮层的棚BF。
1.3.2神经功能缺陷评分两组大鼠造模成功后,
按ZeaLonga的评分
LlJ分别在缺血6h和再灌
注18h进行行为学评分、
。
1.3.3前脑梗塞灶体积测定两组大鼠在缺血6h
*收稿日期:2000.10,23;俸回日期:200t.01.31
作者简介:曹勇军(1972),男.安徽人,硕士,飙事神经解剖受
神经生物学研究,
万方数据
空垦里盥生理茔翌圭2螋l;!!i!!
再灌注18h后,断头取脑,放人冰箱冻至适当硬度,
取其前脑从额极到枕极切成2111//1厚的冠状面脑
片,置入2%TTC溶液中37℃孵育0.5h。正常脑
组织被染成鲜红色,而梗死区呈苍白色。染色后的
脑片用多媒体病理图象分析仪(CMIAS-008型,北
京航空航天大学研制)测出前脑总面积和梗死灶面
积,并根据梯形
,算出相应的体积以及梗死灶体
积百分比。
1.4统计学处理
所有数据经sPssl0.O统计软件处理,结果以
均数±标准差(j±S)表示,组间比较采用f检验。
2结果
2.1 rCBF测定
右大脑中动脉栓塞(McAO)形成后0.5h,A组
右额顶叶血流量较缺血前下降63.43%,B组下降
61.75%,此后两组在整个缺血期间rCBF无明显波
动,再灌注开始后O5h两组右额顶叶血流量均开
始逐渐回升,至再灌注2h时,两组均恢复到缺血前
水平(表1)。
Tab.IChangesofrCBFondifferenttimeofIRbetweenAandBgroups(甜·lOOg/min,f4-5,n=7)
2.2神经功能缺陷评分
A、B两组在MCAO后6h神经功能缺陷评分
分别为229±0.49和2.14±0.38,再灌注18h神
经功能缺陷评分分别为2.14L-0.69和2.00±
0.50。
2.3梗死灶体积测定
见表2。
Tab.2Corrtparisionuf[nfarctvotumeandcewbralvolume
betweeoAandBgroups(ram3,j±s,n=7)
3讨论
线栓法是Koizumi.2‘于1986年首次报告,1989
年ZeaLonga对其进行改进,线栓法自问世以来.因
无需开颅、对全身影响小、缺血部位恒定、可进行再
灌注损伤研究等优点而被广泛采用。但zeaLonga
法要求分离结扎ECA以及ICA的颅外分支翼腭动
脉,且栓线须从ECA插人,因太鼠的解剖特点,手术
视野小,分离难度大,易出血,且需要显微器械,因此
对技术要求高,限制了它的推广应用。我们在本实
验中,对ZeaLonga法进行了改进,只需分离出一段
长约5Ⅱn的cCA,在(:(、A分叉处结扎ECA(这样
处理主要为了阻止栓线在插人过程中误人ECA),
永久结扎CCA近心端,栓线直接从CCA经ICA插
至MCA起始部,再灌时,抽回栓线至CCA内即可。
整个操作比较简单、方便,在肉眼直视下即可完成。
在本实验中,我们观察了5个时限点的rCBF,发现
A、B两组在各时限点rCBF无显著性差异(t检验,
P>0.05)。我们还通过行为学评分和梗塞灶体积
测定,也发现两组之间无显著性差异(f检验,尸>
0.05)。曹霞_J等采用这种改进线栓法观察了太鼠
缺血1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、9h、12h、及24h
的梗塞体积,并与时间进行了相关分析,发现各组大
鼠随缺血时间延长梗塞体积逐渐增大,与时间有显
著相关性.4h出现比较明显的梗塞灶,至12h梗塞
体积趋于稳定,与24h点相比较无显著差异。说明
我们的改进线栓法与ZeaLonga法相比,造成的缺
血/再灌注也同样可靠恒定,值得推广应用。
模型制备中应注意的问胚:(1)栓线插入长度:
一般报告从ECA或CCA分叉处插人,其深度为(18
±0.5)mm。在实验中我们通过测量,认为在A组
中经右CCA插入的栓线长度为(23±0.5)ram比较
适宜,在B组中经右ECA插入的栓线长度为(20±
0.5)tnlTl比较合适;(2)栓线头端球体直径:张成
英【4o等报告大鼠ICA颅底段管径左侧为(0.37±0.
03)ram,右僦为(0.33±0.04)rnm,因此挂线头端球
体直径以0.2r一比较适宜,但在实际操作中不易
测量,我们的经验是将丝线头端稍近火加热,使头端
微成光滑球形即可,不可过大,否则难以通过颅底颈
动脉孔到达颅内;(3)在栓线插入过程中,强调遇阻
力即止,不可用力过猛,以免穿破血管,造成蛛网膜
下腔出血(SAH),但也应注意此时栓线进入的长度,
如果进入过短(<10mlYt),应考虑是否桂线头端球
体过大,难以通过颈动脉fL引起,此时应拔出栓线,
重新制备。
万方数据
一般认为该模型成功的标志之一是出现同侧
Homer征。我们认为把出现同侧Homer征作为造
模成功的标志之一缺乏特异性。因为只要从丘脑交
感中枢到脊髓颈胸段的交感中枢到支配效应器的外
周交感神经通路中的任何一部分损伤均可引起
Homer征,而大鼠的cCA、ECA和ICA周围就广泛
分布着颈动脉交感丛,在本模型制备过程中,极易损
伤该交感神经丛。在本实验中,我们发现分离出
CCA、ECA和ICA而未进行线栓的大鼠也出现了
Homer征。所以把出现同侧Homer征作为造模成
功的标志之一,值得进一步探讨。、
Chin)AwIPhysld2001;17(2)_
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THEIMPROVEMENTANDDISCUSSIONOFTHEMoDEL
oFFOCALCEREBRALISCHEMIA/REPERFUSloN
WITHSUTURE—oCCLUDEDMETHODINRATS
CAOYong-jun,CHENGYan-bin
fL蚰抵MedicalColLege.Lanz}】。u730000.China)
ABSlWACT
A妇n:Tosupplyasimplemethodofthemodeloffocalcerebralischemia/repefusioninratsMethods:ZeaLonga’5sumre-occlu—
dedmethodwasimpmveelandthemrn叫.isionbetweenthetwomethodswasmadeinrCBF.thescores0fnenmlogiealdelicitandin
farctvolumeR俗ttlIs:There愀notsignificantdifferenoesbeuoceellourimprovedmetbaxtandZeagOll暑a’smethodiI"1rCBF.1he
sooresofneurologicaldeficltandinfantvoltmae.(如ndh菇蛐:ThemodeIoffocalcerebralisehm'】ia/reperfusionwithourimproved
melhodwasalsostablear—establishedmoreeasilythanthatwithZeaLonga’smethod.
KEY",'CORDS:Tat:mrebratischeanla/reperfuMon:tildel
(上接茅160页)
3讨论
肮硫醚詹合酶是体内清除同型半胱氨酸的关键酶,各种原因引
起的CBS活性降低、均可导致高同型半胱氪酸血症。血液中高浓度
的同型半胱氨酸可通过损伤血管内皮细胞、改变血液的凝固状态和
血小板功能、刺激血管平滑肌细胞增殖和促进j氐密度脂蛋白氧化等
参与舡的发生发展过程。已经证明,太鼠CtKS分【一Ⅳ型、它们系同
一基因转录后加工生成的不同产物,其编码区棱苷酸序列高度同源.
由于四种类型的CBSmI毛NA均可与探针进行结合,因此DOtblot杂
交结果是总CBS的表达活性。在所检测的对照和As大鼠不同组织
中,CBSmRNA水平与CRS活性具有相似的变化趋势,与对照大鼠比
较,A5大鼠各组织中的cBsmRNA和酶恬性均不同程度地升高,其
中肝脏【璐活性显著高于对照组。
脂质代谢紊乱所致的动脉粥样硬化常伴有其他方面的代谢改
变,肝脏是体内物质代谢最为活跃的器官,其中蛋氨酸循环的加快,
有助于各种甲基化反应的进行,但同时叉会造成同型半胱氨酸的聚
积,放此时肝脏cBs表达括性升高,对于清除俸内多余的同型半胱氨
酸具有促进作用.这可能是机体的一种保护性反应。然而,有关CBS
与As之间的确七玎关系尚有待于深入研究。
(收稿时问:2000,03—06;修回时间:2000—0630)
^爨麓
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A.Aumradingram,BDensitometnescamling(10pg/
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万方数据
线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的改进与探讨
作者: 曹勇军, 程彦斌
作者单位: 兰州医学院
刊名: 中国应用生理学杂志
英文刊名: CHINESE JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY
年,卷(期): 2001,17(2)
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