中澡材 1ouma1ofChineseMedicinalMaterials 第30卷第3期2007年3月 ·361·
摇匀,进样20闪,进样3次,以三次测定结果的平均
值作为含量测定值。结果样品平均含量为98.2%
(RSD二1.08%)。本实验得到纯度较高的大黄素甲
醚。
3 讨论
本品经用巧%HZSO;二周时间水解后较完全,
然后提取二次,提取也较完全。但分离的
笔者
曾经试用过几种不同的方法,分别用pH梯度萃取-
薄层色谱分离一薄层色谱一反复重结晶;pH梯度萃取-
薄层色谱分离一柱层分离一薄层色谱一反复重结晶及
pH梯度萃取一柱层分离一薄层色谱一柱层分离一反复重
结晶等分离方法,前两种方法分离经以薄层板跟踪
检测,效果不如后者。故利用本法分离效果较佳。
但柱层析时柱体温度较高,有柱体裂开的现象。
(20()6一08一07收稿)
RP一HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量
赵晓莉,狄留庆,单进军
(南京中医药大学中医药研究院,江苏南京210029)
摘要 目的:采用HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量。方法:用zoRBAx sB一cl。(250mm x4.6mm,5
卿);以乙睛刁.1%磷酸溶液(40:60)为流动相;检测波长228nm;流速1.OlnFmin;柱温30℃。结果:丁基苯酞在
浓度16.4卜合产耐一262.4林扩nil范围内呈良好的线性关系(r二0.9999)。平均回收率为98.20%,RSD为1.14%。
测得络通胶囊中丁基苯酞的含量分别为1.Zlm岁9、1.18m岁9、1.19m岁9。结论:本方法简便,准确,重复性好,可
用于络通胶囊中丁基苯酞的含量测定。
关键词 络通胶囊;丁基苯酞;RP一HPLC
中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:1001
54(2oo7)03刁361刁2
络通胶囊是由金银花、当归、黄蔑、甘草等几味
药组成的复方制剂,具有养阴清热、活血化疲的功
效,用于治疗血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、脑
血栓形成及其后遗症等。丁基苯酞(NBP)是当归的
主要活性成分之一,药理研究表明,丁基苯酞具有调
节脑缺血状态下脑能量代谢〔’〕、增加缺血区脑血流
量〔2〕、缩小脑梗塞面积、减轻脑水肿〔’〕、改善脑缺血
后神经功能缺损症状的作用。建立本制剂中丁基苯
酞的含量测定方法有助于控制制剂的质量。因此本
实验参考相关文献t4),建立了络通胶囊中丁基苯酞
HPLC法测定方法,所测丁基苯酞色谱峰与相邻色
谱峰得到良好的分离,该法简单、准确、重复性好。
, 仪器与试药
1.1 仪器 Agilenilloo液相色谱仪,二极管阵列
检测器(DAD);METr比RAE240电子天平;HH石数
显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司);J岱一50
超声波清洗器(上海安谱科学仪器有限公司)。
,.2 试药与试剂 丁基苯酞对照品(中国医学科
学院药物研究所提供,经HPLC检测,纯度在98%
以上);络通胶囊(江苏南星药业有限公司生产,批
号为051106、051112、051120);乙睛(美国Tedia公
司,色谱纯);重蒸去离子水(实验室制备);其余试
剂均为
纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:ZORBAXSB一C;:(250mm
x4.6mm,5林m);流动相:乙睛刁.1%磷酸溶液
(如:60);检测波长:228nm;流速:1.oml/min;柱
温:30℃。理论板数:按丁基苯酞峰计算不低于
3(众)。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取丁基苯酞对照
品32.80mg,置100耐棕色容量瓶中,加乙睛稀释
至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取络通胶囊10粒,倾出
物,研匀,取19,精密称定,置50 nil具塞锥形
瓶中,加乙醚30ml以封口膜封口后,超声提取两
次,每次15min,合并乙醚液,置通风厨中常温挥干
乙醚,残渣用乙睛溶解并完全转移至25nil容量瓶
中,加乙睛至刻度,摇匀,过0.45林m微孔滤膜,备
墓金项目:国家863计划“通塞脉微丸的研究与开发(2003AA223247)”;江苏省科技厅自然基金项目(BK2005150)
作者简介:赵晓莉(1976一),女,江苏南京人,南京中医药大学2(X)3级中药学博士研究生。
·362· 中澡材 Joum己otchineseMe山cin目Mated幽 第30卷第3期2(X)7年3月
用。
2.4 阴性对照试验 按络通胶囊生产工艺制备缺
当归的阴性制剂,取此阴性制剂适量,按2.3项下方
法制得阴性供试品溶液。分别精密吸取对照品溶
液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10闪,注人色谱
仪,记录色谱图。在本试验条件下,络通胶囊中其他
成分对丁基苯酞的含量测定无干扰。
2,5 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液
0.5、1.0、2.0、4,0、8.oml分别置于10ml容量瓶
中,加乙睛稀释至刻度,摇匀,制得浓度分别为16.4
卜岁ml,32.8林岁ml,65.6卜岁Inl,131.2林扩Inl,
262.4卜盯ml的对照品溶液系列,分别进样2次,每
次10闪,测定峰面积,以对照品浓度x(林岁ml)为
横坐标,峰面积Y为纵坐标,绘制
曲线,得回归
方程:Y二13.737X+6.049,r二0.9999。表明丁基
苯酞浓度在0.164卜『nil一311.0林留ml范围内与
峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验 精密吸取浓度为65.6林扩耐
的对照品溶液10闪,连续进样6次,记录峰面积并
计算其RSD为1.47%(n=6),表明仪器精密度良
好。
2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10
林1,分别于0.4、8、12、16、20、24h测定,结果丁基苯
酞的峰面积RSD二1.53%(n二7),表明供试品溶液
在室温条件下24h内稳定。
2.8 重复性试验 取同一批号络通胶囊样品5
份,按样品含量测定项下依法平行操作,测定每份样
品中丁基苯酞量,RSD二2.12%(n=5)。
表1 络通胶囊中丁基苯酞加样回收率试验结果
项下方法操作,依法测定,计算得丁基苯酞平均回收
率95.20%,Rsn为1.14%(n=5),结果见表1。
2.10 样品含量刚定 按2.3项下操作,分别制得
供试品溶液,精密吸取对照品溶液、供试品溶液各
ro讨,按上述色谱条件测定丁基苯酞的峰面积,以
外标法计算丁基苯酞的含量,结果见表2。
表2 络通胶囊中丁基苯酞的含t《n=5)
样品批号 丁基苯酞含量(m留9) RsD(%)
051106
051112
051120
1.21
1.18
1.19
1.82
1.54
1.63
Added
/协9
Conients
/协9
Detected
/卜9
Recovery
/%
(x)
/吸,
RSD
%
613.0 以)2.8 1214.3 99.76
605.4
以抖.3
1207.8 98.
1209 .4 98- 98.20 1.14
??
,
?
?
,??
,
?
?
???
???
日抖.7 12(X) .2 97.
6036 11989 97.
3 讨论
3., 检侧波长与流动相的选择 以流动相配制一
定浓度的NBP溶液,在200一400nm波长内扫描,
结果表明,NBP在228nm和274nm处有最大吸收,
为提高NBP的检测灵敏度,选择响应值较强的228
nm作为检测波长。由于络通胶囊是一中药复方制
剂,所含化学成分复杂,我们试用了甲醇一水、甲醇-
酸水、乙睛一酸水等多种流动相体系进行试验,在乙
睛刁.1%磷酸水溶液(60:40)时,丁基苯酞和相邻色
谱峰分离度大于1.5,故最终选定此流动相条件。
3.2 样品提取条件的考察 在络通胶囊的制备工
艺中,当归采用超临界CO:萃取制得提取物,加人
到其余药材的提取物中共同制成微丸,充填胶囊。
考虑到丁基苯酞的脂溶性,试验比较了70%乙醇、
95%乙醇、乙醚三种不同溶剂超声提取,结果以乙醚
为溶剂丁基苯酞的提取得率最高,因此采用乙醚超
声提取的方法制备供试品溶液。
参 考 文 献
〔1] 冯亦璞,胡盾,张丽英.丁基苯酞对小鼠全脑缺血的保
护作用.药学学报,1995,30:741.
〔2〕徐皓亮,冯亦璞.丁基苯酞对局灶性脑缺血大鼠软脑膜
微循环障碍的影响.药学学报,1999,34(3):172一175.
【31 徐皓亮,冯亦璞.丁基苯酞对大鼠血栓形成及血小板功
能的影响.药学学报,2的1,36(5):329一33·
【41赵春顺,崔升森,刘晓红,等.3一正丁基苯酚含量及有关
物质测定的方法学研究.沈阳药科大学学报,20(只,24
(1):2427.
(2006一09一20收稿)
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2.9 加样回收率试验 取同一批号络通胶囊内容
物0。59,共5份,精密称定,每份分别加人丁基苯酞
对照品溶液(122.6卜留ml)sml,按供试品溶液制备