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大黄酚对脑缺血再灌注小鼠探究成效的影响　　王树张力张丹参安芳薛贵平　　【摘要】目的不雅察大黄酚对脑缺血再灌注小鼠认知探究成效的影响。要领接纳临时性阻断两侧颈总动脉的要领制备小鼠脑缺血再灌注损伤的模子，举行探究实行，不雅察大黄酚10,1，0.1g·kg-1ip对脑缺血再灌注小鼠认知探究成效的改进作用，并对各剂量组全血中谷胱甘肽过氧化物酶〔GSH-Px〕活力和血浆中超氧化物歧化酶〔SD〕活力举行测定。效果大黄酚可显着收缩脑缺血再灌注小鼠到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间，增长爬高端的次数，使小鼠在暗室和在明室滞留时间相近；并进步全血中GSH-Px活力和血浆中SD活力。结论大黄酚对脑缺血再灌注小鼠所致探究认知举动成效停滞有显着的改进作用，其作用机制大概是加强抗氧化酶GSH-Px和SD活力。　　【关键词】大黄酚脑缺血再灌注谷胱甘肽过氧化物酶超氧化物歧化酶　　Keyrds:hrysphanl;erebralisheiareperfusin;GSH-PX;SD　　血管性痴呆(Vasulardeentia,VD)是指由种种脑血管疾病引起的以认知损害为特性的一种综合征。VD重要举动表现为高级神经活动的智能停滞,特殊是认知成效停滞,包罗学习、影象、头脑等停滞，严峻影响中老年人的生存质量。中药大黄作用普及，有抗高血压、抗菌、泻下、按捺胆碱酯酶、抗朽迈作用等很多作用。大黄酚〔hrysphanl,hry〕为大黄的有用身分之一，但药理作用文献报道却很少，仅限于传统的抗菌、泻下、止血等方面。我室前期事情已证明大黄酚能显着淘汰大鼠肝、脑过氧化脂质天生［1，2］。本实行接纳小鼠短暂性脑缺血模子，研究大黄酚对脑缺血再灌注损伤后小鼠认知探究成效的影响，探究其改进认知探究成效停滞的机制，为其应用于临床治疗血管性痴呆疾病提供理论和实行根据。　　1东西　　1.1药品和试剂大黄酚〔阐发纯，中国药品生物成品检定所〕，实行前用N，N-二甲基甲酰胺溶解，聚山梨酯-80助溶，生理盐水稀释至所需浓度，N，N-二甲基甲酰胺：聚山梨酯-80：生理盐水即是1∶1∶8。谷胱甘肽过氧化物酶活力测试盒，超氧化物歧化酶测试盒：南京建成生物工程研究所。实行用水为三重蒸馏水。　　1.2仪器XTY-2探究活动实行仪，中国医学科学院药物研究所；80-2B离心机，上海安亭科学仪器厂；FSH-2内切式构造可调高速匀浆器，江苏环保仪器厂；721分光光度计，上海细密科学仪器；二列六孔电热恒温水浴锅：北京精科华瑞仪器。　　1.3动物昆明种小鼠120只，体重28～30g，均为雄性，由中国医学科学院北京药物研究所提供。　　2要领　　2.1分组每项实行均取康健小鼠60只，均为雄性，随机分为5组：假手术组〔举行手术但不举行缺血再灌注〕、模子比拟组(缺血再灌注组)、大黄酚高剂量组、中剂量组和低剂量组〔高、中、低剂量别离为10，1，0.1g·kg-1，ip〕。　　2.3探究活动探究活动实行箱，是检测动物举动的场合，由一个暗室和两个明室构成，该装备中装有传感体系，可以担当动物的活动举动信号并传送到盘算机。手术后48h将小鼠放入探究活动实行仪内举行预选，在箱内自由活动3in，3in内不进入暗室者剔除。将颠末预选的小鼠举行分组。除假手术组外，别的各组使脑立即缺血5in，然后规复血流。此中大黄酚高、中、低剂量组于缺血前30in别离ip大黄酚10，1，0.1g·kg-1。24h后举行探究实行，起首将小鼠放在前面的明室中，点击实行开始，同时翻开箱门，当小鼠钻进暗室时，那么关上门断厥后路。记载小鼠到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间〔指反面的明室〕；小鼠在暗室滞留时间、小鼠在明室滞留时间〔指反面的明室〕、小鼠爬高端的次数。　　2.4小鼠全血中GSH-Px活力和血浆中SD活力测定将术后小鼠分组，模子比拟组和大黄酚组均于手术后48h阻断血流5in，此中大黄酚高、中、低剂量组于阻断血流前30in别离ip大黄酚10，1，0.1g·kg-1。规复血供后10in，将小鼠的颈动脉切开取血,肝素抗凝，将抗凝全血用三蒸水制成1%溶血液，以GSH-Px试剂盒测定小鼠全血中GSH-Px活力。划定：每4μl全血在37℃反响5in，扣除非酶促反响的作用，使反响体系中GSH浓度低落1μl·L-1为一个酶活力单元。取上述抗凝全血离心〔4000r·in-1，离心10in〕后取血浆10μl，接纳羟胺法以SD试剂盒测定。划定：每毫升反响液中SD按捺率达50%时所对应的SD量为一个SD活力单元。　　2.5统计学要领　　应用SPSS11.0统计软件举行统计，数据资料用t查验，并举行方差阐发，以±s表现。　　3效果　　3.1大黄酚对脑缺血再灌注小鼠探究活动实行中到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间、爬高端次数的影响　　脑缺血再灌注后可造成小鼠显着的探究认知举动成效停滞。和假手术组比拟，模子比拟组小鼠到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间均显着延伸〔P0.01〕，小鼠爬高端的次数显着淘汰〔P0.01〕。预先赐与大黄酚，那么高、中剂量的大黄酚对脑缺血再灌注小鼠所致探究认知举动成效停滞有显着的改进作用。效果见表1。表1大黄酚对脑缺血再灌注小鼠在探究活动实行中认知探究成效的影响〔略〕　　3.2大黄酚对脑缺血再灌注小鼠探究活动实行中在暗室滞留时间和在明室滞留时间的影响按照实行技能指标的比力要求,只在同一组内举行这两项指标比力。效果表白，模子比拟组和大黄酚低剂量组的小鼠在暗室滞留时间和在明室滞留时间有显着差异〔P0.001〕，而假手术组，大黄酚高、中剂量组在暗室滞留时间和在明室滞留时间无显着差异〔P＞0.05〕，说明高、中剂量的大黄酚对脑缺血再灌注小鼠所致探究认知举动成效停滞有显着的改进作用。效果见表2。表2大黄酚对脑缺血再灌注小鼠在探究活动实行中认知探究成效的影响〔略〕　　3.3大黄酚对脑缺血再灌注小鼠全血中GSH-Px活力和血浆中SD活力的影响　　脑缺血再灌注后小鼠全血中GSH-Px活力和血浆中SD活力显着低落〔P0.01〕；高剂量大黄酚对脑缺血再灌注小鼠全血中GSH-Px活力显着进步〔P0.01〕，高，中剂量的大黄酚对脑缺血再灌注小鼠血浆SD活性显着进步〔P0.01〕。效果见表3。表3大黄酚对脑缺血再灌注小鼠全血GSH-Px和血浆SD的影响〔略〕　　4讨论　　探究是人类在恒久的熟悉天然和改革天然历程中所形成的一种高级神经活动，探究实行是举动学实行中很紧张的实行要领，表现认知本领，从多方面寻求，办理疑难目，更好地顺应情况。实行中创造，脑缺血再灌注损伤的小鼠表现出显着的探究认知举动成效停滞。而脑缺血前赐与大黄酚后，那么对脑缺血再灌注小鼠所致探究认知举动成效停滞有显着改进作用，小鼠到达暗室时间、到达高端时间、到达明室时间收缩，爬高端的次数显着增长〔P0.05〕。对付小鼠在暗室滞留时间和在明室滞留时间的比力，按照实行技能指标的比力要求,只在同一组内举行这两项指标的比力，小鼠在暗室滞留时间和在明室滞留时间越相近，说明小鼠认知探究成效越强；本实行效果表白，高、中剂量的大黄酚组在暗室滞留时间和在明室滞留时间无显着差异〔P＞0.05〕，而模子比拟组小鼠在暗室滞留时间和在明室滞留时间有显着的差异〔P0.001〕，进一步说明大黄酚对脑缺血再灌注小鼠所致探究认知举动成效停滞有显着改进作用，别的，低剂量大黄酚组的小鼠在暗室滞留时间和在明室滞留时间有显着的差异，说明大黄酚作用有剂量依靠性。　　痴呆是一种临床综合征，重要表现为影象、认知、语言和举动停滞及品德改变等，老年期产生的痴呆为老年性痴呆，其又分阿尔茨海默病(AlzhEier'sdisease,AD)和血管性痴呆(vasulardeentia,VD)，严峻地影响着人类的生存［4］。血管性痴呆是指种种脑血管病引起脑成效停滞而产生的得到性智能损害综合征,为慢性举行性疾病,重要与缺血性脑血管病有关。多灶性梗死是导致血管性痴呆的紧张病因［5］。本实行接纳小鼠脑缺血再灌注血管性痴呆学习影象停滞模子,不雅察了大黄酚对模子小鼠探究成效的影响,脑缺血再灌注的小鼠有显着的探究认知举动成效停滞，而脑缺血前赐与大黄酚后，那么对小鼠所致探究认知举动成效停滞有显着改进作用，提示大黄酚有益智作用，可进步认知探究本领，有大概开拓成为VD治疗的新型药物，大概低落血管性痴呆的严峻程度或淘汰血管性痴呆的产生，有助于改进缺血性脑血管病的预后。　　脑缺血再灌注损伤与快乐性氨基酸毒性、细胞内钙超载、自由基的天生、白细胞高度聚拢和高能磷酸化合物的缺乏等有关。脑缺血再灌注损伤的庇护机制和药物治疗的研究比年来不停是国际生物医学界存眷的一个核心，研究以为［6］脑缺血对机体是一种严峻的应急反响，对脑缺血这一严峻应急反响，机体一定存在着一种内源性的抗缺血损伤的体系，包罗热休克卵白70〔HSP70〕的作用、快乐与按捺性神经递质的影响、腺苷及其受体的作用、一些细胞因子的作用和抗氧化酶的作用。体内抗氧化酶重要有SD和GSH等。脑缺血时，大量的自由基产生，引起脂质过氧化损伤，抗氧化酶具有扫除氧自由基、抗脂质过氧化损伤、从而对神经细胞产生庇护作用。本实行研究效果表白，大黄酚可以或许进步血液中SD和GSH-PX的活力，提示大黄酚抗缺血损伤，改进认知探究成效的作用机制大概是通过加强抗氧化酶GSH-PX和SD活力来举行作用的，其确切机制将在以后系列实行中作进一步研究。　　【参考文献】［1］张丹参，张力.大黄酚对大鼠肝过氧化脂质含量的影响［J］.张家口医学院学报,1999，16〔1〕：1.［2］王树，薛贵平，张丹参.大黄酚对大鼠脑过氧化脂质含量的影响［J］.张家口医学院学报,2000，17〔3〕：4.［3］HiriN,atanabeH,AkaikeN,etal.erebralisheiadelithnsiusie:invlveentfNDAreeptrativatinandderangeentflearninganderyability［J］.JPharaleth,1990,23:311.［4］朱兴族，罗质璞.神经药理学新论［］.北京：人民卫生出书社，2022：53.［5］VlpeBT，PetitK.Deentiaithbilateraledialteprallbeisheia［J］.Neurlgy,1985,35:1793.［6］朱桂荣，潘家祜.脑缺血损伤的内源性庇护机制［A］.2022药理学希望［］.北京：人民卫生出书社，2022：46.