沉降菌检测(课堂PPT)

沉降菌检测基本概念菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。沉降菌:用GB/T16292-2010提及的方法收集空气中的活性微生物粒子,通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 测试原理本测试方法利用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经若干时间,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净区的洁净度。 测试方法1、使用的仪器设备和培养基:（1）高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。（2）恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。（3）培养皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。 测试方法1、使用的仪器设备和培养基:（4）培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。将培养基加热熔化,冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿,每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后,将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用,制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。测试方法2、测试时间对单向流,如A级净化房间内及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。对非单向流,如B级、C级、D级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。测试方法3、采样点数目及其布置:（1）最少采样点数目:沉降菌的最少采样点可按表1确定。测试方法3、采样点数目及其布置:在满足最少测点数的同时,不宜满足最少培养皿数,见表2测试方法3、采样点数目及其布置:（2）采样点的布置:除受洁净区的设备限制外,取样点应在洁净区均匀布置。在日常监控时,那些与产品相邻近的区域,以及可能与产品直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取样次数(与产品非接触区相比,这些区域应视为关键区):人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区,需加强监控。测试方法3、采样点数目及其布置:（2）采样点的布置:取样点一般在离地面0.8-1.0m之间或操作平台的高度。取样设备会对气流产生干扰,取样时应避免可能对气流组织的干扰。尽量避免在回风口附近取样(距离lm以上),且测试人员应在取样口的下风侧,并尽量少走动。测试方法4、测试步骤: （1）采样方法:用无菌容器(如不锈钢储槽)将预先培养的培养皿(无菌平皿)带至待测区,将培养皿取出,放置在预先确定取样点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5小时,再将培养皿盖上,盖后倒置。检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时间。测试方法4、测试步骤: （2）培养:全部采样结束,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。32℃培养,时间为72小时。每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可每批选定三个培养皿做对照培养。测试方法4、测试步骤: （3）菌落计数:用肉眼直接计数,然后用5-10倍放大镜检查,是否有遗漏。若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上计数。 测试方法5、注意事项: 测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。采取一切措施防止人为对样本的污染。对培养基、培养条件及其他参数作详细的。由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,必要时用显微镜鉴别。测试方法5、注意事项: 采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。测试状态:沉降菌测试前,被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求,静压差必须控制在规定值内。沉降菌测试前,被测试洁净区己经过消毒。 测试方法5、注意事项: 测试状态有静态和动态两种,在空调系统验流时、长期停产恢复生产前、设施设备大修复产前进行静态测试,在日常监测时进行动态监测。测试人员:测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时,室内测试人员不得多于2个人。 测试方法6、结果计算: 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的汁算见下式: 测试方法7、标准: 结果评定用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。若某洁净区的菌落数超过评定标准,则必须对此区域先行消毒,然后重新测试两次,测试结果必须合格。 采样点布置图谢谢