抗乙肝胎盘转移因子的特异免疫活性观察

解放军医学杂志 1994年 第 19卷 第 6期 Med J Chin PI AVol19 No 61994 ·447· 叼 一辞 抗乙肝胎盘转移因子的特异免疫活性观察 R ． 叠 271。。。 泰安 解放军第 88医院 张光曙 孙 思才 韩 纪举 赵 汇川 郭庆 R 7 ^摘 要 本研 究由 HBVM—Ab阳性胎盘提取的抗己肝胎盘转移因子(PSTF)的特异免疫活性 证明， 经注射 ，小鼠外周血淋 巴细胞 明显增 多，晌腺重量和指数亦显著增加 ，酯酶 染色证 明 75 属 T一样淋巴细 胞，25 属 Thy样淋巴细胞 ，人 白细胞或小鼠白细胞体外转移 PSTF特异免疫活性、或豚鼠和小鼠体内转 移 PsTF特异免疫活性 ，再取其白细胞作白细胞粘附抑制、白细胞移动抑制、特异淋巴细胞转化 、小鼠足掌 注射和诱 生 干扰翥试验 ，均 可得到明显稳定阳性结果，说明 PSTF对 HBV具有特异免疫活性 ，阳性供 体可将 PSTF的特异免疫活性转移蛤 胡性受体 关键词抗己肝胎盘转移因子；T一淋巴细胞；特异免疫活性 乙 晰衰 SURVEY oN THE SPECIFIC IM M UNE ACTIVⅡ lY oF ANTI-HEPATITIS B PLACEN． TA TRANSFER FACToR Zhang Guangshu，Sun Sicai，Han Jiju，et a1．The 88th Hospital of PLA，Taian 271000,Guo Qingfu．The Microbiology and Epidemiology Institute of Academy of Military Medicine，Beijing 100039 ． Abstran It has been proved that the anti—hepatitis B placenta transfer factor(PsTF)extracted from HBVM—Ab positive placenta could raise the peripheral W BC in mice，especially the lymphocyte，thymus weight and index，and the increased lymphocytes mainly belonged to T—appearance lymphocytes by anae stain． In addition， leucocyte adhesion inhibition， leucocyte migration inhibition， specific lymphocyt e transformation stimulation，mouse foot—pad i njection and induction of T-interferon production atl could give stable and strong positive results．If the peripheral blood W BC of a normal donor and the mice were transfefred with the specific immune activity from PsTF by co—culture in vitro，or the W BC collected from the mice were injected with PSTF for transferring specific immune activity in vlvo．So，it was considered that not only PSTF had specific immune activity to HBV，but also the spec ifie immune activity could he transferred from the positive donor to the negative recipient． Key words Anti—hepatitis B placenta transfer factor；T-lymphocyte；Specific immune activity 抗乙肝胎盘转移因子 (PSTF，抗乙肝胎盘 肽)，是一新型免疫调节制 ，8o年代初首先在我 国提取成功 ，实验研究证明 PSTF具有较好免 疫活性 ，临床用于治疗乙型肝炎和肝硬变可获 较好效果。 。为探讨治疗机制 ，进一步观察其 特异免疫活性 ，现如下。 1 材料和方法 ： 1．2 HBsAg纯蛋白：购 自北京医科大学肝病 研究所。 1．3 实验方法 ： 1．3．1 PSTF对小鼠免疫功能影响：①实验动 物：体重 18~20g昆系小鼠 3O只，雌雄各半，随 机分为 3组 ：第 l组对照每 日腹腔注射生理盐 水0．2ml／只 ，第 2、3组 每 日腹腔 注射PSTF 1．1 PSTF：由本院制剂实验室提取供用。 ①北京 军事医学科学院散生物流行病研究所 100039 维普资讯 http://www.cqvip.com ·448· 堕芏壁查 塑生 第19卷 第6期 Med JChin PLA V0119 N。61994 0．2ml，第 3组第 1天加注乙肝疫苗 1次，3组 均连续注射 7d；②细胞计数与分类：第 8天摘 眼球取血 ，2h内计数白细胞，同时作细胞分类 和酯酶染色 ；⑧胸腺、脾脏重量和指数：取出的 胸腺和脾脏用分析天平称重 ，计算指数。 1．3．2 自细胞粘附抑制试验 ： 体外转移 PSTF特异免疫活性 ：①人 自细 胞：取 正常 人外周血 自细 胞，制 成 悬液 后与 PSTF 37。C共育 30min，转移特异免疫活性 ，同 时作生理盐水对照。实验按常规方法进行 ；②小 鼠自细胞：昆系小 鼠处死后用 Hank液洗出腹 腔 内巨噬细胞 ，同时取出脾脏制成脾细胞悬液， 两者混合后调整细胞数为 lO ／L'转移 PSTF 特异免疫活性和实验方法同上。 体 内转移 PSTF特异免疫活性：昆系小鼠 每 日腹腔内注射 PSTF 0．5ml／只，连续 3d，第 4 天处死 ，按上法配制细胞悬液和自细胞粘附抑 制试验 。 1．3．3 自细胞移动动抑制试验 ： 体外转移 PSTF特异免疫活性 ：人 自细胞 悬液的制备和体外转移 PSTF特异免疫活性均 同上。白细胞移动抑制按琼脂平板法和毛细管 法进行，实验和计算均按常规方法进行 体 内转移 PSTF特异免疫活性 ：采用体重 300g豚鼠每 日腹腔 内注射 PSTF 0．5ml／只，连 续 7d，第 12天处死；或小鼠每日腹腔内注射 PSTF 0．2ml／只，连续 5d，第 6 处死；处死后 均按上法制备 白细胞悬液，然后按琼脂平板法 进行 白细胞移动抑制试验。 1．3．4 特异淋巴细胞转化试验：Balb／C小鼠 9只，平分 3组，分别每 日腹腔内注射 PSTF、胎 盘肽和生理盐水各 0．2ml／只，连续 7d，第 8天 处死 ，按上法制备 自细胞悬液，接种于 96孔细 胞培 养板，每孔 100个／,ul，用不同剂量 HBsAg 刺激，培养观察，以酶联仪测定 OD值，计算出 刺激指数 1．3．5 小鼠足掌注射试验：昆系小 鼠 24只平 分 2组，分别每 日腹腔内注射 PSTF或生理盐 水 0．2m!／只，连续 5d，第 8天右后足掌皮下注 射 HBsAg，左后足掌皮下注射生理盐水 ，观察 反应 ，第 l0天剪下注射部足掌送病理检查。 1．3．6 诱生 干扰素试验：方法同特异淋 巴 细胞转化试验 ，细胞培 养板于孵育第 3、4天收 集孔内上清液检测 7一干扰素含量。 2 实验结果 2．1 PSTF对小鼠免疫功能影响： 2．1．1 自细胞计数、分类和酯酶染色 ：实验组 白细胞总数，特别是淋巴细胞明显高于对照组， 其中又以 PSTF和乙肝疫苗联用组增多最明显 ( 1)。酯酶染色证明 75 属 T一样淋巴细胞， 25 属 Thy一样淋 巴细胞。 2．1．2 胸腺和脾脏重量及指数：实验组平均胸 腺重量和指数均 明显高于对照组 ，而脾脏平均 重 量和指数则与对照组无明显差异(表 2)；提 示增多的淋巴细胞是来 自胸腺的 T一淋 巴细胞 。 2．2 自细胞粘附抑制试验： 2．2．1体外转移 PSTF特异免疫活性 ：实验组 非粘附白细胞指数远大于有意义的 30(表 3)。 2．2．2 体 内转 移 PSTF特异 免疫活性 ：实验 36次，观察组平均非粘附自细胞数为 99．6个 ， 对 照组 为 27．4个 ，非 粘 附 白细 胞 指 数 为 263．5，亦明显高于 3O。 2．3 白细胞移动抑制试验 ： 2．3．1 体外转移 PSTF特异免疫活性 ：琼脂平 板法和毛细管法的白细胞移动抑制指数均小于 有意义的0．8，特别毛细管法更为明显(表4)。 2．3．2 体内转移 PSTF特异免疫活性 ：平板法 白细胞移动 抑制指数 明显小于有意义的 0．8 (表 5)。 2．4 特异淋巴细胞转化试验：孵育 5d和 7d后 实验组 淋巴细胞转化刺激指数分 别为 2．2和 1．8，明显高于对照组 1．1和 1．4。 2．5 小 鼠足掌注射试验 ：小鼠足掌皮下注射 HBsAg后 4h，特别膝关节 以下示明显水肿、充 血 ，最重者不能作正常运动，对照组则不明显； 注射部病理切片检查可见局部明显充血、水肿、 退变，同时可见大量单核细胞、少数多核细胞浸 维普资讯 http://www.cqvip.com 医学杂志 1994年 第 19卷 第 6期 Med J Chin PLA Vot19N0 61994 衰 1 小鼠经 PSTF注射后外周血自细胞(个／ram。，j士 ) ·449· 注 ：尸值均为与生理盐水组比较的结果 衰 2 小鼠经 PSTF注射后晌腺重量和指数 注 尸值均为与生理盐水组比较的结果 衰 3 体外转移 PSTF特异免疫活性非粘附 白细胞指数 衰 4 人 自细胞体外转移 PSTF特异免疫活性白细胞移动抑制指数 注：移动指数为实验组与对照组之比值 衰 5 豚鼠和小鼠体内转移 PSTF特异免疫活性 白细胞移动抑制指数 注；移动指数为实验组与对照组之比值 润，对照组无明显病理改变。 2．6 诱生 干扰素 孵育 3d和 4d，实验组诱 生7一干扰素平均为40．2U和 54．0U，明显高于 对照组的 15．9U和 1 6．3U。 3 讨 论 我国于 70年代末 自正常人体胎盘提取转 移因子(胎盘肽)获得成功后，作者于 80年代初 又 以 HBVM—Ab阳性胎盘为原材 料提取抗 乙 肝胎盘转移因子 (PSTF，抗乙肝胎盘肽)亦获成 功。实验研究业已证明二者均有免疫活性 ，I临床 上试用治疗多种疾病亦证明可获较好效果。 。 因此 ，二者现在被认为系一新型免疫调节剂 ， 值得进一步研究试用。 制备 PsTF主要是在探讨改进乙肝病毒感 染的防治，在初步证实该剂具有免疫活性后，I临 床上又试用治疗观察大量急、慢性乙型肝炎和 肝硬变病例 ，亦证明效果较好 ，尤对早期肝硬变 和代偿期肝硬变经过较长期的治疗 ，不仅 自觉 维普资讯 http://www.cqvip.com · 450· 解放军 医学杂志 1994年 第 19卷 第 6期 Med JChia PI AVol19No 61994 症状消退，肝功能正常，肝组织复查亦可见肝硬 变的病理特征可获消退或改善 ，初步证明肝硬 变是可逆性病理改变。 。为进一步研究其治疗 机制，作者近年试用人和动物白细胞，通过体外 和体内转移 PSTF特异免疫活性 ，然后再 以白 细胞粘附抑制、白细胞移动抑制、特异淋巴细胞 转化、小鼠足掌注射和诱生 7一干扰素等试验观 察其特异免疫活性，结果均获得明确而稳定的 阳性反应 说明 PSTF对 HBV确有较好的特 异免疫活性 ，而且这种特异免疫活性可 由阳性 供体通过体外和(或)体内方式转移给阴性受 体 ，改善免疫功能。 再者，小鼠经 PSTF注射后可见白细胞 ，特 别是淋 巴细胞明显增多，同时胸腺重量和指数 亦显著增加，酯酶染色可证 明在增多的白细胞 其中 75 属 T一样淋巴细胞 ，提示 PSTF可通过 T一淋巴细胞改善机体免疫功能。此点恰与经治 病例白细胞免疫功能变化相符。 。 参 考 文 献 1 霍保来主编 转移因子的研究进展 ．北京 ．中国科学技术 出版杜 ．1990t 255～297 2 张光曙主编 ．眙盘转移因了的研究和应用 ．北京：中国科 学技术出版社 ．1992 t 12～280 3 张光曙．赵世科，赵 汇川，等 抗 己肝睹盘转移因子防治肝 硬变的韧变探讨 ．前卫医药杂志．1993；10(3)：7o 4 张光曙．杜庆峥，赵汇川．等 ．抗 己肝胎盘肽综合治疗失代 偿肝硬化 ．前卫医药杂志．1蜩5{11(4)：222 (1993年 9月收稿 1994年 8月修回) (本文编辑．周国泰) 肝 癌 颅 骨 转 移 1例 110003沈 放 第z。z 院 ： 男，38岁，右头顶部肿物 4个月。不痛 不痒。于 1991年 9月 15日就诊 检查：右顶部有 4cm×4cm× 2cm肿块，头皮颜色正常，无压痛．与头皮无粘连。颅骨 平片右顶骨有小块骨质吸收区。局部外板破坏。1个月 后复诊 ．肿物稍见增大，但仍无症状 诊断：头皮肿瘤， 嗜酸性IIj芽肿不能除外 既往有肝炎、肝硬变史。肝功 正常 ，HBsAg(+)，出凝血时间正常。白细胞 3．4×10’／ L，血小板 4O×10。／L 于 10月 2：3日在局麻下行肿物切 除 切开头皮及皮下脂肪后可见肿物表面与骨膜表面 及帽状睫膜粘连 为一层，有 1．Omm 厚 ，与头皮及皮 下 脂肪易分离。切开肿瘤包膜也易于肿瘤分开，触之较 软 ，粉 红色 ，血管较丰富 ，楔形切 除 1．0cm×O 5em× 0．5cm 送 珠冻活检 。报告 为恶性 肿瘤，汗腺癌可能性 大。手术全部切除肿瘤。术中见颅骨全层破坏。约 4em ×4em 边缘不整齐。扩大切除颅骨 ，见硬 膜表面受侵 经 电灼及福 尔马林处理后，扩切受累硬膜并用阉筋膜 修补 内眼见肿瘤完全切除 病理 ：光镜下瘤组织呈片巢状分布，血管丰富。巢 内瘤细胞呈方形 ，胞浆红，呈片状 。腺管内呈乳头状排 列。瘤细胞异型性 明显，棱分裂多见。瘤组织周围可见 步许骨组织残 留，血管扩张，其脏内可见瘤栓形成。硬 陆膜有瘤组织浸润。皮肤束见瘤组织 诊断：颅骨转移 癌 术后 14d，CT检查肝 表面不光滑，肝叶比倒失调． 肝袭增宽 ，肝密度不均。右叶有直径 3em 的低密度影， 脾大 诊断：④睥大肝硬变 }②肝癌 。MR1检查 ，肝右后 叶有 4．0cm×3．0era类圆形异常信号区．边界清楚。T 加权相为低信号 ．T：加权相为高信号。诊断：肝癌 n 月 2：6日同位索扫描全身显像 ，静脉注射”Tc—MDP 2h 全身骨显像 ANT位见左股骨下 处有 援形放射性维 集 区。其余部位放射性分布均匀对称 POST位 见梭形 放射性浓集区 诊断 t肝癌颅骨股骨转移 化验 ：血谷氨 酰胺转肽酶 (Y—GT)0．1mkat／L(正常值 0．O17～0．5)， 碱性磷酸酶(AKP)0 7mkat／L(正 常值 0．13～1 3)，甲 胎蛋 白(AFP)69ng／L(正常值<50ng／L)，血清癌胚抗 原(CEA)696ng／L(正常值< 15rig／L)，HA 115．9ng／L (正 常值 <20ng／I )，LDH 1．5mkat／L(正常值 0．8～ 2．3mkat) 患者肝硬变多年 ，术前未发现肝癌 ，至术后病理检 查方诊断 为转移癌 并经全身骨骼同位 索扫描证实股 骨 ，颅骨乳突处也有转移灶。随访 4个月病』、已有恶病 质表现。脊柱 T 骨转移出现截瘫 。肝癌颅骨转移者实 为少 见 。 (1994年 5月收稿) 维普资讯 http://www.cqvip.com