EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究
EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细
胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究
在EBV转化或杂交过
程中表面标记发生了较大的变化{对LCL和杂交瘤知胞表面标记的检测可能为探寻
人B细胞在这些过程中染色体保留或丢失的规律提供一种手段.此外,LCL及人B
知胞杂交瘤细胞系有可能被用作一种新的模型,来研究人B淋巴细胞的分化和功
能
关键词表叵亘星;人窆窒盟;ApAAP
淋巴细胞杂交瘤一单克隆抗体技术的闻
世,为生物医学众多领域的发展提供了有力
的工具.具有产生拭体潜能的B淋巴细胞与
骨髓瘤细胞融合,所获得的杂交瘤细胞既可
在体外长期培养传代,叉能不断分泌抗体.
但是,对于B细胞在融合过程中发生的变化
了解不甚透彻.目前应用较多的制备人单抗
的方法之一是EBV,杂交瘤技术,人B淋巴
细胞在此过程中受到的影响因素就更为复
杂.研究人B细胞发生的变化,可能有助于
EBV转化及细胞融合确切机理的阐明.本文
用碱性磷酸酶一抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫
组化染色技术对EBV转化的人B淋巴母细
?
国家863
资助课题
稿亳
胞(LCL),人一鼠杂交瘤和人一(人一鼠)杂交瘤
及它们的亲本骨髓瘤细胞系的部分表面标记
进行了检测,以期了解这些细胞的特点.
1材料和方法
l,】细胞系LCL为EBV转化的正常人外
周血B细胞,体外连续培养2个月,分泌人
IgM及人IgG.人一鼠杂交瘤细胞系86—1,亲
本为小鼠骨髓瘤细胞系Ag8.653(购自美国
ATCC公司);人一(人一鼠)杂交瘤细胞系86—
2,亲本为人一鼠骨髓瘤细胞系SHM-D33(购
自美国ATCC公司).两株杂交瘤均是由EBV
转化的肾综合征出血热患者外周血单个棱细
?
2?
胞,再与相应亲本细胞系融台所得(本室自
制),均分泌IgM()类抗肾综合征出血热病
毒人单抗,体外培养2个月.所有细胞系均
用RPMI1640—10FCS完全培基培养传
代.
1.2小鼠单克隆抗体本实验所用抗人
链,Y链,6链,抗人Ia及抗小鼠CD25(Tac)
杂交瘤细胞系均购自ATCC公司,由本室按
常规方法制备腹水.抗人CD25(Tac)由澳大
利亚IMVSBurns教授赠.抗CD20由天津血
液病研究所惠赠.
1.3APAAP免疫组化染色取对数生长状
态的细胞离心弃上清,用无血清RPMI1640
洗2次,再以RPMI1640—10FCS混悬细
胞,调整密度,用脑脊液细胞玻片离心沉淀
器制细胞抗原片,室温充分干燥后,用福尔
马林一丙酮固定渡4?固定30S,自来水充分
冲洗.按本室常规进行APAAP免疫组化染
色.苏木精衬染后于光镜下观察.同时设正
常小鼠血清作为阴性对照.
2结果
每种小鼠单抗.APAAP染色重复2次,
结果见表l.所有细胞抗原片只加底物液不
显色,表明细胞无内源性碱性磷酸酶.细胞
着染情况见图1(封4).
表15种细胞系细胞表面标记的检测结果
Tab1?m.~?zwj?ace5ceghke.~
*用大鼠抗小鼠I[~2RM,Ab检涮;**M未经克隆化
3讨论
细胞表面标记是免疫细胞相互协同,实
现其功能的物质基础.研究细胞表面标记是
了解免疫细胞本质的重要途径之一.受EBV
感染而转化的LCL以及人B淋巴细胞杂交
瘤细胞表面某些标记的结构和功能可发生较
大的变化,确切机理还不甚明了.目前对
LCL和人B细胞杂交瘤的表面标记研究寥寥
无几[“].
杂交瘤细胞系86—1均分泌人IgM.它们
的表面有SmlgM,但无SmlgG,与分泌的Ig
类别一致.86—1细胞表面表达有SinIgD可能
与C和C基因片段间无转换区序列,由共有
的mRNA剪接而形成有关.以上结果从一个
侧面为EBV转化的B细胞无Ig类别转换的
报道?提供了佐证.LCI.,和杂交癌细胞既
?
3?
有B细胞标记CD20,Ia和smIg,同时又具
有浆细胞分泌Ig的功能.
我们曾发现rHulLL2对86-1,86-2和
SHM-D33细胞系的生长有显着促进作用.
对LCL和Ag8.653无影响.细胞表面CD25
检测结果与增殖试验基本一致,只有86—2
虽无CD25(IL-2Ra链),对rHuIL-2却有明
显应答我们认为很可能86—2细胞上有1工广2
受体日链(P75),保留了与IL一2中亲和性结
合的能力.编码P75与编码型轻链的基因
同位于人类第22对染色体上.86—2分泌的
人IgM轻链恰为型,所以肯定该细胞系保
留了人第22对染色体.
人一鼠骨髓瘤细胞系SHM—D33为小鼠骨
髓瘤细胞系Ag8.653和人骨髓瘤细胞系
U266的杂交体,也可以说是一种人一鼠杂交
瘤细胞系它用作亲本细胞与人B细胞融合,
所得杂交瘤抗体分泌稳定性明显优于小鼠骨
髓瘤细胞系与人B细胞所产生的人一鼠杂交
瘤.Teng等认为稳定性好与该细胞系保留了
4,5条人染色体有关.我们通过对其表面
标记的初步研究,证实它至少保留了人染色
体第4对(编码CD38)和第1O对(编码
CT)25);而可能丢失了第6对(编码Ia),第
12对(编码CD20)和第14对(编码IgH)人染
色体因此,表面标记的研究无疑为杂交瘤
细胞内染色体的确认提供了一种简便可靠的
手段,对于探索人B细胞在杂交过程中染色
体保留或丢失的规律具有较大价值.
体外人B淋巴细胞模型很难建立,给研
究人B细胞分化及功能造成很大碾难.我们
的实验结果显示,LCL及杂交瘤细胞均具有
人B细胞的表面标记,所以或许有可能利用
它们作为模型来研究人B细胞有人就曾用
小鼠杂交瘤细胞对小鼠B细胞的分化及抗原
提呈作用进行过研究口”].
综合研究结果,我们认为对LcL和人B
细胞杂交瘤细胞表面标记的研究有如下意
义:?探讨人B淋巴细胞杂交瘤分她抗体类
型与表面标记的关系;?观察某些表面标记
(如细胞因子受体)的表达程度对杂交瘤细胞
增殖与分化的影响;?为探索人B细胞在杂
交过程中染色体保留或丢失的规律提供了一
种手段{?作为一种新的模型研究人B细胞
的分化与功能.
参考文献
黄传书.等.中华徽生物学和免疫学杂志1990i
10(2):l】3
PosrterMR一.Hy~idoma1983;2(4):369
p?nerMR?H拍rldor~1982;6(8)}811
(~BartMA?吐J]mmunol1986}136(1):106
„曲CF,.I:~ocNatlAcadSeiUSA1985?82:
6495
Ten8NNH..EnglemanEGa(Fas)tHuman
HybridomasandMonoclon~An同d.Plenum.
NewYork1985?P71
GlimeaxerLH—.Nature1982;298-283
HamanoT,et-Ceillmmunol1984;83:330
AnalysisofTheExpressionofSurfaceMarkersonHumanLCLsandHuman
B~LymphocyteHybridomaCellLines
Yoga,z,啪,Xueso~咖
(DepartmentofImmunology,TheFourthMilitaryMedicalUniversity,Xiran
,7t0032)
l23456
AbStractHereweanalyzedtheexpressionof,v~omesur~,~eemarkersonEBvirus(EBV)transformed
Blymph(Jblastoidcells(LCLs),humanB—lymphocytehybridomacellline
sandtheirparentmyeloma
celllinesusinlgalkalinepl10sph&ta辩一
anti—alkalinephosphatone(APAAP)immunocytochemis~rytcch
nique.TheresultsdemonstratedthatthesurfacemarkersonhumanBlymphocyteschangedalotafter
EBVtransformationorhybridization.Thus.analysisofsurfaoemarkerscouldbeusefulforexploring
thenature0fchrom~omesretainedorlostinhumanBlymphocytcsduringtheprocessesabove.More
0vet,LCLsandhumanB~lymphocytchybridomacelllinesprobablyWerepotentialmodalsforstudying
diffcrentiationandfunctionsofhumanBlymghoeytes.
Keywordssurfacemarker;humanB—lymphocytcllybridomatAPAAP
(收稿1995一(13—10)
小鼠循环可溶性CD44的特点:其水平受机体免疫状态
和肿瘤生长情况的影响(文摘)
近年来.可溶性细胞日子受体和可溶性
细胞粘附分子的研究越来越受到人们的关
注.CD44分子在许多生理过程中起着重要作
用,作者建立了小鼠可溶性CD44(sCD44)可
重复的定量分析模型,旨在进一步研究
scD4在体内的作用.
应用ELISA检测小鼠血清中sCD44,发
现它在小鼠血清中含量丰富,但在不同品系
的正常小鼠中其值有一定的变异(0.9至
2.10~/m1).免疫沉淀和SDS-PAGE法进一
步分析发现,已至少有3种不同形式的特异
性sCD44,其中最主要的为85,90KDa
scD4.不论是从正常的还是转化的淋巴细
胞中,均可提取获得这种形式的CD44.电泳
的迁移性上与sCD44无明显差异,但在神经
氨酸酶加D一糖甙酶处理后,从淋巴细胞膜
上提取的CD44与循环中sCD44的电泳泳动
结果不同,后者的核心蛋白较前者约小为17
,
20KDa.针对CD44胞浆氨基酸残基的抗
体并不能识别循环或淋巴瘤培养上清中的
sCD44.这些观察与细胞表面CD44的清除相
一
致,在此过程中跨膜CD44将切除其胞装
区.而蛋白酶抑制剂可减慢培养的淋巴瘤细
胞上CD44的脱落过程.
免疫缺陷的CB17,SCID和BALB/cXid
小鼠的血清中sCD44水平显着降低,而荷瘤
小鼠中则明显升高与BXSB和MRL/1pr品系
小鼠中发生自身免疫性疾病的情形一样.发
生中度移植物抗宿主反应(GVHR)的小鼠血
清中的sCD44显着升高血清中高浓度的
sCD44可部分阻断透明质酸hyaluronate与
CD44阳性淋巴瘤细胞的结合,其抑制程度
与s<:D44的浓度呈正相关.
以上结果提示.血清中含量丰富的
sCD44是来自于细胞表面CD44的脱落,而
这一过程明显受到机体免疫系统活性和是否
有肿瘤生长等情况的影响.本文为临床提供
了一种极为有用的疾病指征.
(赵茜摘译垒伯泉审校)