昆明白族和彝族人群HLA—DRB1／DQB1等位基因遗传特点及频率分布比较

昆明白族和彝族人群HLA—DRB1／DQB1等位基因遗传特点及频率分布比较 昆明白族和彝族人群HLA—DRB1,DQB1 等位基因遗传特点及频率分布比较 国际免疫学杂志2006年11月第29卷第6期 InternationalJournalofImmunology.Nov2006.Vol_29.N0.6 昆明白族和彝族人群HLA—DRB1/DQB1等位基因 遗传特点及频率分布比较 杨武王关芬黄永坤郝萍戚勤唐睿珠文革生李海林周丽芳 摘要目的研究昆明白族和彝族儿童HLA-DRB1/DQB1等位基因多态性,分析比较 昆明白族和彝 族人群的遗传特点.方法采用PCR-SSP基因分型技术,分别对70名白族儿童和70 名彝族儿童进 行HLA—DRB1/DQB1基因分型.结果昆明白族儿童在HLA—DRB1位点上共检 出13种等位基因, 依次为DRBI08(20.7%),04(16.4%),12(16.4%),15(8.57%),0901(8.57%),14 (6.43%),11(5.71%),16(5.00%),13(4.29%),07(2.86%),03(2.86%),01 (1.43%),10(0.7l%);HLA—DQB1位点上共检出7种等位基因,依次为 DQB10301(23.6%), 06(21.4%),05(18.6%),04(18.6%),0303(7.14%),0302(6.43%),0201(4.29%) 彝族儿童在HLA-DRB1位点上共检出12种等位基因,依次为 DRB112(33.57%),0901 (11.43%),04(11.43%),01(8.57%),11(7.86%),14(7.14%),15(7.14%),08 (5.00%),03(2.83%),13(2.14%),07(1.43%),16(1.43%);HLA-DQB1位点上共检出7 种等位基因,依次为DQB10301(45%),05(22.14%),0303(12.14%),04(6.43%),06 (6.43%),0201(4.29%),0302(3.57%).组间比较HLA—DRB1/DQB1等位基因总体分 布及诸 多等位基因频率均有显着差异.结论昆明白族和彝族人群HIA.DRB1/DQB1等位 基因分布具有各 自遗传特点. 关键词白族;彝族;HLA-DRB1/DQB1;基因多态性. 文章编号1673-4394(2006)06-0341-04中图分类号R392.11文献标识码A HLA-DRBI/DQB1PolymorphismofBaiandYiPeopleinKunming YangWu,WangMei—fen,HUANGYong—kun,eta1. (ThefirstAffiliatedHospital,KunmingMedicalCollege,Kunming650032,China) AbstractObjectiveTostudytheHLA—DRB1/DQB1allelepolymorphismsandgenetic charactersofthechildrenofBaiandYinationalitiesinKuming.MethodHLA—DRB1/ DQB1DNAtypesin70Baichildrenand70YichildreninKunmingwereanalyzedbypoly— merasechainreactionwithsequencespecificprimer(PCR—SSP).ResultsThirteenalleles inHLA—DRB11OCHSand7allelesHLA— DQB1lOCHSwereobservedinthebloodspecimens from70childrenofBainationality.TheallelesinHLA—DRB1lOCHSwereDRBl:l:08 (20.7%),04(16.4%),:{:12(16.4%),:}:15(8.57%),:l:0901(8.'57%),:l:14 (6.43%),:l:ll(5.71%),:l:16(5.00%),:l:13(4.29%),07(2.86%),:l:03 (2.86%),:l:0l(1.43%),and10(0.7l%);TheallelesinHLA.DQB1locuswereDQBI 基金项目:云南省教育厅重点科学研究基金(04Z065C) 作者单位:650032,昆明医学院第一附属医院儿科(杨武,王美 芬,黄永坤,戚勤,文革生,李海林,周耐芳);『临床医学实验ff1心(唐睿 珠,郝萍) 通讯作者:黄永坤,E-mail:hykkmyncn@hotmai].conl ? 341- ? 论着? ?342?国际免疫学杂志2006年11月第29卷第6期 InternationalJournalofImmunolo~,Nov2006,Vo1.29,No.6 :l:0301(23.6%),:l:06(21.4%),:l:05(18.6%),:l:04(18.6%),:l:0303(7.14%), :l:0302(6.43%).and:l:0201(4.29%).TwelveallelesinHLA.DRB1lOCUSand7alMes HLA—DQB1locuswereobservedinthebloodspecimensfrom70childrenofYichildrenin Kunming.TheallelesinHLA.DRB1lOCUSwereDRB1:l:12(33.57%).:l:0901 (11.43%),:l:04(11.43%),:l:01(8.57%),11(7.86%),:l:14(7.14%),:l:15 (7.14%),:l:08(5.00%),:l:03(2.83%),:l:13(2.14%),:l:07(1.43%),and:l:16 (1.43%);TheallelesinHLA—DQBIlocuswereDQBI:l:0301(45%),05:l:(22.14%), :l:0303(12.14%),:l:04(6.43%),06(6.43%),:l:0201(4.29%),and:l:0302 f3.57%.StatisticsignificancewereobservedintheallelesofHLA.DRB1/DQB1lOCUS distributedinthetwonationalities(P<0.001).andmostoftheallelesdistributedamong twonationalitiesweresignificantlydifferent(P<0.05).ConclusionsTheHLA.DRB1/ DQB1distributonamongBaiandYinationalitiesinKunminghastheirowngeneticcharacter— isties. KeywordsBainationality;Yinationality;HLA-DR/DQB1;Allelepolymorphism. 人类白细胞抗原(HumanLeucocyteAntigen, HLA)是已知人类遗传体系中最具高度多态性的,从 1964年召开第一届国际组织相容性专题会议至 2001年2月召开的十三届大会,共确定已发现的 HLA等位基因达到1340个?.HLA基因和抗原多 态性为揭示民族起源,迁移,演化提供了重要的遗传 信息,同时,其等位基因变化与免疫功能密切相关, 因此,通过调查不同民族的HLA等位基因不仅可以 研究中华民族的起源和迁移,而且对研究各民族的 遗传背景和与疾病的关系都起着重要意义.云南省 是民族聚居的主要地区,共有31个之多,是人类群 体研究的良好材料来源.我们应用聚合酶链反应. 序列特异性引物(PCR.SSP)技术,对昆明市70名白 族儿童和70名彝族儿童进行HLA—DQB1,DRB1位 点的基因分型,旨在探讨昆明白族和彝族人群HLA. ?类等位基因的遗传特点,并通过基因频率分布的 比较,为揭示人类基因多态性提供数字依据. 1材料和方法 1.1样本来源 所选用的总共140份外周血样本,分别来自于 昆明市西山区两所民族小学无血缘关系的健康儿 童.其中白族儿童70份,年龄8,l3岁,平均年龄 9.84岁,男:女=1.1:1;彝族儿童70份,年龄5,14 岁,平均年龄9.7岁,男:女=1:1.两组年龄,性别 均无显着性差异(P>0.05). 1.2仪器和主要试剂 基因扩增仪PE-9600(美国Perkin—Eimer提供), 725型超低温冰箱(美国FormaScientificInc.),特种 净化工作台(苏州净化设备厂),TGL.16B离心机 (上海安亭科学仪器厂生产),各型微量加样器(芬 兰),96道专用电泳仪(美国Bio—RadInc),分子生物 学专用分光光度仪(美国Bio—RadInc),170— 8126UniversalHood凝胶成像仪(意大利),血液基因 组DNA提取试剂盒(美国MOBIOLaboratories LLC),DQ/DRB1SSPUNITRAY试剂盒(批号:023— 17073,包括DQ/DRB143个序列特异性引物和1个 污染对照,试剂盒由美国PEL.FREEZESYSTEMS提 供),DI2000.Taq聚合酶(批号:CD39011),琼脂糖 (芬兰产)溴乙锭均由大连宝生物公司提供. 1.3方法 1.3.1基因组DNA提取采用血液基因组DNA 提取试剂盒,在常温下快速提取两组儿童的外周血 基因组DNA,提取的DNA用分光光度仪测定浓度和 纯度,A260/280mm应在1.6,1.8,提取的DNA于 - 70?保存备用. 1.3.2HLA.DR/DQB1基因分型采用SSPUNI— TRAY试剂盒扩增HLA.DR/DQB1DNA片段,PCR 反应体系,循环条件及操作方法均按所附说明.扩 增产物放入加有2%溴乙锭的琼脂糖凝胶中进行电 泳(条件为150V,15min),后将胶板放在凝胶成像仪 和紫外线下成像,并借助其提供的专用读板纸来判 读结果.要求除污染对照孔外,其它各电泳道内控 带(分子量为796bp)必须存在,各阳性条带必须与 读板纸上所提示的分子量相符. 1.4统计学分析 借助SPSS软件包,用接计算法统计各等位基 因的基因频率,样本分布经过Hardy—Weinberg平衡 检验,P>0.05.单个等位基因比较用2x2四格表 6笙11月第29卷第6期InternationalJournalofImmunology.Nov2006.Vo1.29.No.6 x检验,P值经等位基因多项比较校正(同一位点需 比较等位基因数乘P值,即Pe);群体间等位基因频 率分布比较用RXC表作x检验. 2结果分析 2.1昆明白族儿童在HLA.DRB1位点上共检出13 种等位基因,其中等位基因频率大于10%的依次为 DRB1:l:08(20.7%),:l:04(16.4%),12(16.4%), 等位基因频率在5%,10%之间的依次为15 (8.57%),:l:0901(8.57%),:l:14(6.43%),:l:11 (5.71%),:l:16(5.00%),小于5%的依次为:l:13 (4.29%),:I:07(2.86%),:I:03(2.86%),:I:O1 (1.43%),:l:10(0.71%);HLA—DQB1位点上共检 出7种等位基因,其中等位基因频率大于10%的依 次为DQB1$0301(23.6%),06(21.4%),:l:05 (18.6%),:l:04(18.6%),等位基因频率在5%, 10%之间的依次为:l:0303(7.14%),:l:0302 (6.43%),小于5%的为:l:0201(4.29%).总体分 布比较昆明白族和彝族儿童HLA.DRB1等位基因频 率分布有明显差异(x=36.796,自由度=12,P< 0.001);单个基因位点比较中DRB1:l:12(0.1643 对0.3357,P<0.001),DRBl:l:08(0.2071对 0.0500,P<0.001),DRB1:l:01(0.0143对0.0857, P<0.05)3个位点的频率分布有明显差异,经等位 基因多项比较校正后DRB1:l:12,DRB1:l:08两个位 点仍有差异(Pc<0.05).(见表1) 2.2昆明彝族儿童在HLA—DRB1位点上共检出12 种等位基因,其中等位基因频率大于10%的依次为 DRB1:l:12(33.57%),:l:0901(11.43%),:l:04(11. ? 343? 43%),等位基因频率在5%,10%之间的依次为 0l(8.57%),:I:11(7.86%),:I:14(7.14%),%15 (7.14%),:l:08(5.00%),小于5%的依次为:l:03 (2.83%),:l:13(2.14%),:l:07(1.43%),:l:16 (1.43%);HlJA—DQB1位点上共检出7种等位基因, 其中等位基因频率大于10%的依次为DQB10301 (45%),05:l:(22.14%),0303(12.14%),等位基 因频率在5%,10%之间的依次为:l:04(6.43%), :l:06(6.43%),小于5%的依次为:l:0201(4.29%), 0302(3.57%).总体分布比较昆明白族和彝族儿 童HLA—DQB1等位基因频率分布有明显差异(x= 32.336,自由度=6,P<0.001);单个基因位点比较 中DQB1:l:0301(0.2357对0.4500,P<0.001), DQB1:l:0401(0.1857对0.0643,P<0.05),DQB1:l: 0601(0.2143对0.0643,P<0.001),经等位基因多 项比较校正后,上述三个位点仍有差异(Pc<0.05). (见表2) 3讨论 由于HLA抗原具有高度同源性,传统的血清学 分型方法经常会出现较多的交叉反应,从而造成许 多抗原分辨困难和错误结果(错误率平均30%)E2]. 目前更多的是先设计不同基因型的核苷酸序列特异 性引物,利用PCR技术在分子水平上对基因进行分 型,如PCR—SSP,PCR—SSO等,比传统方法要准确,可 靠.国内很多学者已采用此类方法对多个民族进行 基因分型,但尚无有关白族基因多态性的报道,本研 究即通过PCR—SSP方法对白族和彝族儿童进行 HLA基因分型并加以比较,结果可以看出昆明白族 表1昆明白族儿童和彝族儿童HIA—DRBI等位基因频率分布特点和比较 ?344?2006年11月第29卷第6期InternationalJournalofImmunology.Nov2v.!: 表2昆明Et~JL童和彝族儿童HLA—DQB1等位基因频率分布特点和比较 儿童DRB108,DQB10301出现频率最高,彝族 儿童中DQB10301同样最常见,而在HLA—DRB1 位点上则以DRB112基因频率突出;两族儿童相 比,不仅HLA—DR/DQB1等位基因频率总体分布有 显着差异(P<0.001),而且在单个基因位点比较 中,DRB112,DRB108和DQB10401,DQB1 0301,DQB1?0601也有差异(P<0.05,Pc<0.05); 而DRB104和DQB10501等基因位点虽然在白 族儿童和彝族儿童中出现的频率很高,但彼此间无 显着差异(P>0.05);说明白族和彝族人群的HLA— DR/DQB1基因位点有其各自的遗传特点,同时也有 一 定的联系.此前,黄永坤等曾将昆明彝族和汉 族的HLA—DIL/DQB1基因进行对比,发现这两个民 族的HLA—DRB112和DQB10401等位点诸多基 因位点也有差异,说明中国不同民族的遗传背景均 有区别;许绍斌等对云南汉族HLA—DR/DQB1多 态性分析及与其他9个汉族群体的比较结果,佐证 了国内学者目前认为中国汉族存在南北两个聚类的 普遍共识',进一步说明不同地域分布也是造成 人类HLA基因多态性的重要因素.另外,冯明亮 等还就中国汉族HLA—DRB1基因座遗传特点与马 其顿白人及喀麦隆黑人进行比较,结果显示DRB1 12,DRB10401,DRB10301等位点上有所差异, 不同的国家和种族问同样有着不同的遗传背 景.与此同时,我们在上述众多研究中不难发现,各 人群之间在DRB1%12和DQB1040l位点上出现 的差异比较突出,是否说明DRB112和DQB1 0401易突变?尚待研究. HLA系统具有丰富的基因多态性,人类在特殊 的地理,气候等生存环境下,经过长期复杂的融合和 变迁,使各种族和人群既形成了自身的遗传特点,又 有着彼此的联系.群体的HJA基因多态性研究,对 于人类学研究中追溯民族的起源,演化及估计各种 族或民族间的遗传距离有非常重要的作用;同时也 为疾病的遗传因素分析,器官移植配型及法医鉴定 等领域提供科学依据. 参考文献 1刷光炎,范丽安.mJA:新的进展和新的起点一L海免疫学杂志, 1996,16(6):321-324. 2MytilincosJ,SchererS,DunckleyH,eta1.DNAHLA?DRtypingre? suitsof4000kidneytransplants.Transplantation,1993,55:778-781. 3黄永坤,文革生,郝萍等.云南昆明彝族和汉族儿童HLA?DRB1等 位基因的多态性研究.免疫学杂忠,2004,20(3):147?151. 4许绍斌,陶玉芬,黄小琴等.云南汉族HLA—DRB1多态性分析及与 9个汉族群体的比较.遗传,2004,26(6):787-792. 5ChuJY,HuangW,KuangSQ,eta1.Geneticrelationshipofpopula? tioninChina.ProcNatlAcadSciUSA,1998,95(20):11763.11768. 6潘兴华,傅继粱.中华民族11群体HLA一1I类基因遗传结构及流 动轨迹探踪.第二军医大学,1996,17(5):401407. 7冯明亮,杨剑豪,季芸等.江浙沪汉族人群HLA-DRB1基因座遗传 特征及不同人群频率分布比较.中华医学遗传学杂志,2003,20 (4):356?357. (收稿日期:2006—05—24)