共轭亚油酸的碱催化异构及其减肥作用研究

共轭亚油酸的碱催化异构及其减肥作用研究 共轭亚油酸的碱催化异构及其减肥作用研究 研究方 向 盒 昌 丝堂 年月合肥工业大学燃 本论文经答辩委员会全体委员审查,确定符合合肥工业大 学硕士学位论文质量要求。 答辩委员会签名:姓名、工作单位、职称 主 席常 国家农副食品质检研究员 文 中心安徽 委 日熙 口贝 》 合肥工业大学 教授 砑谚叮 积躐 合肥工业大学 罗酬 刁城水。 合肥工业大学 教授 合肥工业大学 副教授 阈袱 导师: 合肥工业大学 副教授 扒独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。 据我所知,除了文中特别加以标志和致谢的地方外,论文中不包含其他人已 经发表或撰 写过的研究成果,也不包含为获得 或其他教育机构的学位或证书而使 金壁工些太堂 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说 明并表示谢意。 学位论文作者签字巷磅《答字日期洲婷怕舯 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 金胆王些太堂 有关保留、使用学位论文的规定,有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅或 借阅。本人 授权 金胆王些太堂 可以将学位论文的全部或部分论文编入有关数据 库进行检 索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后适用本授权书 学位论文者签名: 套谚西 ?名:彦叭、 ‖‘己 签字日期:少工年牛月 签字日期:加墀乒月力/日 日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通讯地址: 邮编:共轭亚油酸的碱催化异构及其减肥作用研究 摘 要 ,对人类健康具有潜在的功 共轭亚油酸 能,其具有抗癌、减肥降脂、调节血糖、提高动物免疫功能,降低心脏病 和动脉粥样硬化的风险等积极作用。 本文将亚油酸作为反应原料,以碱催化异构方法结合响应面方法 优化共轭亚油酸的工艺条件,采用尿素包合法对共轭亚油酸进行纯化工艺 条件研究,建立昆明种小鼠的肥胖症模型,研究共轭亚油酸的减 肥作用,主要得到以下结论: 碱催化异构法制备共轭亚油酸的研究表明,碱异构化方法制备出的 共轭亚油酸样品同时含有,和,.这两种异构体,较优的制 备共轭亚油酸的条件为:碱与亚油酸的用量比为.:,溶剂与碱的用量比 为.:,反应温度为 ?,反应时间为.。 尿素包合法纯化共轭亚油酸的研究表明,较优的包合条件为:包 合温度为.?,包合时间为,尿素质量与溶剂体积的比为:, 与尿素质量比为:。 共轭亚油酸的减肥作用研究表明:营养饲料配方能成功建立昆明 种小鼠的肥胖症模型。肥胖症对照组小鼠李氏’指数、 脂肪系数、血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量均高度显著高于 共轭亚油酸高、中、低剂量组,肥胖症对照组高密度脂蛋白的含量高度显 著低于共轭亚油酸高剂量组的含量,说明共轭亚油酸具有减肥功能。并且 证实了形成肥胖症潜在靶点很有可能是脂肪酸合成酶。同时,共轭亚油酸 不会对小鼠产生毒副作用。 关键词:共轭亚油酸;碱催化异构;尿素包合法;减肥;小鼠 ., , , , . . .,. . : . ,一 . , 一, .:. . . .:. 。, 一 。. .:, . :’ , , ., , , . , ., ’ . ; ; : : ; 致谢 经过三年的忙碌和工作,在合肥工业大学两年多的学习和生活即将结束。在 读研这段可贵的人生历程中,遇到了很多困难和挑战,但更多的是得到了鼓 励和 帮助,正是由于大家的帮助使我得以顺利完成毕业论文。 首先,要向我的导师一王武老师表示最诚挚的感谢从论文选、实验 设计、实验过程指导到最后论文多次审阅修改,无不凝聚着王老师的智慧和心血。 王老师把他渊博的知识无私地传授给了我,更重要的是通过言传身教,用他积极 进取、豁达乐观的人生态度潜移默化地影响了我,使我学会了做人做事的道理, 而这些都将使我终生受益。在论文完成之际,谨向王老师表示崇高的敬意和衷心 的感谢,祝愿王老师工作顺利,事事如意 其次,感谢给予我指导帮助的陈从贵老师、王泽南老师、周存六老师和叶应 旺老师,感谢你们孜孜不倦的教导,使我的实验少走很多不必要的弯路。在此, 也要感谢实验室的全体同学,尤其是任志伟、梁凤玲、章立新、吴巧同学的 帮助。 此外,还要感谢为我们提供了良好实验环境的学院领导和全体老师,特别是 院实验室的韩卓老师、操丽丽老师谨向你们表示真诚的感谢。 最后,感谢生物与食品工程学院级研究生班的同窗好友,在与大家共 同度过的这段时间里,我学到很多,也懂得很多。三年时光虽转瞬即逝,然而读 研中的点点滴滴都将是我生命中的美好回忆。在即将面临的人生新征途中,无论 面临多大困难,我将始终如一,怀抱一颗感恩之心,铭记责任,不忘理想,坚定 而勇敢地走下去。 作者:李琪玲 年月目 录 第一章前言?. .共轭亚油酸的来源.共轭亚油酸的纯化及检测方法 .共轭亚油酸的生理功能 .本文研究意义和内容? 第二章碱催化异构共轭亚油酸工艺研究.材料??. ..主要试剂? ..主要仪器与设备.. .试验方法 .分析方法 .. .检测共轭亚油酸 ..共轭亚油酸含量计算方法.试验设计 ..碱法异构产物鉴定试验设计? ..单因素试验设计.. ..响应面试验设计一 .结果与分析..碱法异构产物鉴定??. ..碱与亚油酸的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响..溶剂与碱的用量比 对共轭亚油酸百分含量的影响 ..反应温度对共轭亚油酸百分含量的影响? ..时间对共轭亚油酸百分含量的影响. ..响应面试验结果与分析 .本章小结??. 第三章共轭亚油酸的尿素包合工艺研究? .材料?.. ..主要试剂. ..主要仪器与设备 .试验方法??. .试验设计??. ..单因素试验设计 ..正交试验设计? .结果与分析?. .. 与尿素质量比对共轭亚油酸百分含量的影响??.. ..尿素质量与溶剂体积的比对共轭亚油酸百分含量的影响??.. ..包合温度对共轭亚油酸百分含量的影响? ..包合时间对共轭亚油酸百分含量的影响? ..正交试验结果与分析? ..验证试验. .本章小节??. 第四章共轭亚油酸对小鼠的减肥作用研究. .材料?.. ..小鼠..饲料..灌胃用油. ..主要试剂. ..主要仪器与设备 .试验方法??. ..灌胃剂量的选择 ..小鼠肥胖症模型的建立 ..减肥试验的设计 ..检测各项指标及其方法 .结果与分析? ..观察各组小鼠的生长发育状况??.. ..肥胖症小鼠模型的建立情况.. ..共轭亚油酸对小鼠李氏’指数和脂肪系数的影响??. ..共轭亚油酸对小鼠血清生化指标的影响? ..共轭亚油酸对小鼠肝脏脂肪酸合成酶含量的影响 ..小鼠肝脏脂肪酸合成酶含量和肥胖指标的相关性..共轭亚油酸对小鼠脏 器系数的影晌. .本章小节??. 第五章结论?. 参考文献??.. 攻读硕士学位期间发表的论文??. 插图清单 图.两种主要的共轭亚油酸结构式图 图?未进行酸化的样品气相色谱图图.经过酸化的样品气相色谱图图. 标准品的气相色谱图??.. 图?经过酸化的样品峰的质谱图. 图.经过酸化的样品峰的质谱图. 图 标准品峰的质谱图??. 图? 标准品峰的质谱图??.. 图? , 一甲酯质谱图图 ,甲酯质谱图. 图.碱法异构机理示意图? 图. 碱与亚油酸的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 图.溶剂与碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响? 图.反应温度对共轭亚油酸百分含量的影响图.反应时间对共轭亚油酸百分 含量的影响图?碱与亚油酸的用量比和溶剂碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的 交 互影响响应面曲面图及其等高线? 图.碱与亚油酸的用量比和反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响 响应面曲面图及其等高线? 图.碱与亚油酸的用量比和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响 响应面曲面图及其等高线? 图.溶剂与碱的用量比和反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响响 应面曲面图及其等高线图?溶剂与碱的用量比和反应时间对共轭亚油酸百分 含量的交互影响响 应面曲面图及其等高线图?反应温度和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交 互影响响应面曲面 图及其等高线 图. 与尿素质量比对共轭亚油酸百分含量的影响?.. 图.尿素质量与溶剂体积的比对共轭亚油酸百分含量的影响?.. 图.包合温度对共轭亚油酸百分含量的影响??.. 图?包合时间对共轭亚油酸百分含量的影响??.. 表格清单 表.试剂清单表 表.仪器与设备清单表 表.响应面试验因素与水平表??.. 表.设计方案与结果.. 表.回归分析结果?.. 表优化的回归分析结果?.. 表.试剂清单表??.. 表.仪器与设备清单表??.. 表.正交试验设计与水平?.. 表?正交试验结果与分析?.. 表.试剂清单表??.. 表?仪器与设备清单表??.. 表. 操作方法表? 操作方法表? ?操作方法 表 ?操作方法 表? 对小鼠’指数和脂肪系数的影响, 表. 对小鼠血清生化指标的影响强,一 表 对小鼠肝脏含量的影响阻,. 表. 含量与’指数、脂肪系数、血清生化指标的相关性系数.. 第一章前言 共轭亚油酸 ,是指一组具有共轭双键、包含有 多种几何和位置异构体的十八碳二烯脂肪酸的混合物构成的总称弓】。一般 是在 碳、、开始存在共轭双键,在这几种位置异构体中,理论上应该存在以下 四种构象:顺反,反顺,反反,顺顺。但是根据能量稳 定性方面考虑,反顺和顺反这两种构象更容易稳定存在岭。因此, 虽然从理论上来说,共轭亚油酸至少可以有种异构体,但是实际上 和,.这两种异构体在自然界中所占的含量最多而且生理活 性最大。。这两种主要的共轭亚油酸异构体,一和, 的 化学结构示意图见图.所示峭。 一 晦 一‖\ %一乏邺一弋? 图一两种主要的共轭亚油酸结构式图 一 .共轭亚油酸的来源 在年首次发现于反刍动物消化道中含有共轭双键形式存在 的脂肪酸。此后,于 年证明了该种共轭双键形式存在的脂 一 肪酸为, 。在 年发现在牛肉中含有能抗癌的物质, 后证实该抗癌物质为共轭亚油酸?。 共轭亚油酸在自然界中有着较广泛的存在形式,可是含量都很甚微 】。而且共轭二烯的结构形式在油脂中也不太常见【】。天然的共轭亚油酸 。共轭亚油酸主要存在于反刍 主要存在于食物中,并且含量差别很大【‘ 瘤胃动物如羊、牛的乳脂以及其肉制品中,含量从至不等【?。 这是因为存在于反刍动物肠道中的微生物可以产生亚油酸异构酶从而能 将亚油酸转化成共轭亚油酸,所得到的共轭亚油酸主要是以,.异 构体这一异构体存在形式存在。其他动物的体液、血液和组织中也含 有较少量的共轭亚油酸【 。植物油脂食品中也含有少量共轭亚油酸,每 克油脂大致含有. 至.的共轭亚油酸,并且其异构体的分布状况 一基本同时存在于其中 与动物食品也有些不同,,.和 。 【】。此外,海洋食品中也可检测到较低浓度的共轭亚油酸【 总之,自然界中共轭亚油酸含量很少,远远不能满足人们科研和工业生产应 用的需要。因此,有关研究学者专家转而进行人工合成的研究。目 前,共轭亚油酸的人工合成方法主要是微生物合成法和化学合成法这两大 类方法。 微生物合成法反应条件比较温和,产物能安全食用,但缺点是收率较 低,并且反应物和产物分离较为困难,导致该方法未能大量使用【。根据 对共轭亚油酸微生物合成法的大量方法的报道,乳酸菌、丙酸菌、瘤胃菌 是微生物合成法中使用最多的菌种。微生物合成法中最重要的是提高菌种 细胞中的亚油酸异构酶活性并且优化菌种发酵条件‘。 。亚油酸异构酶的 作用位点位于亚油酸的 双键上,从而主要的转化产物是,一异 构体【’。微生物合成法制备合成产量较低,提取比较困难,所以该 合成方法很难广泛应用于工业化生产中。 迄今为止,国内外报道了很多种化学制备共轭亚油酸的方法。其中具有代表 性的制备方法有以下几种:碱催化异构化法,把亚油酸或含有亚油酸的原料 溶解在有机溶剂中,加入强碱高温加热使亚油酸发生共轭异构化【】;丙烯 乙二醇异构化法,此方法是将氢氧化钾、丙烯乙二醇和红花油混合加热一段 时间,得到共轭亚油酸异构体【 ,此方法的特点是反应生成的,. 与, ?的异构体比率基本为:,而其他异构体的比率很低,但是 反应效率较低;油酸烯丙醇脱水法,油酸通过光的照射成为过氧化物,还原 变成.羟基或 .羟基的油酸烯丙醇,接着加入酸催化。或,在 和之间形成共轭双键转变成 ,该方法的特点是得到的共轭 亚油酸产率很低,除了共轭亚油酸还会生成亚油酸等;蓖麻油合成法,选 用蓖麻油作为原料,依次对其进行酯化、卤化和消除反应来制备, 本方法的优点是可以制得较高纯度的, 一异构体,但缺点是反应产 率较低且经济性不高。此外,还有过渡金属催化异构化法和光催化异构化法 笙一 丁 。 目前,碱催化异构化法是工业化最广泛使用和最经济的一种制备共轭 亚油酸的方法 。碱催化异构化法制备的原料主要是亚油酸和各种 富含亚油酸的天然植物油。由于亚油酸的价格昂贵致使其广泛应用于工业 生产受到很大限制,但是由于其不需要皂化等前处理步骤,因此在制备高 纯度的共轭亚油酸上有很广阔的应用前景。等将氢氧化钠作为催 化剂,乙二醇作为溶剂,于 条件下将亚油酸异构化为共轭亚油酸【】。 碱催化异构化反应在进行的过程中,需要使用溶剂使强碱与油脂均匀 混合。根据实验证明,溶剂是影响碱催化异构化法的重要影响因素之一。 常用的溶剂有正丁醇、丙二醇、乙二醇、丙三醇、二甲基亚砜、二甲基甲 酰胺?州。由于二甲基甲酰胺、乙二醇、二甲基亚砜具有一定毒性,限制 了它们在食品中的用途,所制得的共轭亚油酸产品只能用于工业用途。等将 无毒丙二醇作为溶剂,提高了亚油酸转化率,完善了产品色泽 。碱催化异构化反应中所使用的碱可以是无机碱如氢氧化钠、氢氧化钾、 氢氧化铯等,也可以是有机碱如四乙基氢氧化铵、乙醇钠、甲醇钠等醇钠。 由于氢氧化钾价格较便宜且易溶于丙二醇等有机溶剂而较常用。时间、 温度等反应条件也是共轭亚油酸的转化率和产物异构体组成比例的重要 影响因素?。反应温度不是越高越好,当温度达到一定值后,温度的升高 对转化率影响效果不大。反应时间过长,很多不稳定的异构体和未知物会 增加,导致产物不纯?。 .共轭亚油酸的纯化及检测方法 以亚油酸和植物油为原料利用碱法异构化法合成得到的共轭亚油酸 产品中,通常会因为原料中或者反应中混有一些饱和脂肪酸杂质。这些物 质会影响共轭亚油酸产品的纯度。因此需要对制备好的共轭油酸进行纯 化。目前分离纯化共轭亚油酸的常用方法有以下几种:溶剂分离法,利用 饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸在有机溶剂中溶解度不同或者其凝固点的差异来纯 化分离不饱和脂肪酸,该方法的工艺原理比较简单,操作比较方便,但是回 收有机溶剂操作比较麻烦,而且分离的效率较低,产品的纯度不是很高,需要和 其他分离方法一起配合使用;脂肪酶特异性浓缩分离法,其依据脂肪酶特异性依 次进行水解、转酯和酯化反应。借助脂肪酶的选择性、专一性等特点,把很难分 开的共轭亚油酸异构体分开,达到富集的目的【,但是该方法的成本较高,限 制其广泛应用。尿素包合法,在盐酸等酸性条件下,由于尿素分子在结晶 过程中与结构线性较好的脂肪酸结合,也就是与饱和脂肪酸形成较稳定的 的晶体物析出,而结构线性较差的脂肪酸不饱和脂肪酸由于双键较多, 具有一定空间结构,被尿素包合较为困难,过滤除去饱和脂肪酸的包合物, 剩下的就是经过纯化的共轭亚油酸【 。尿素包合法由于其成本低廉,因此 较为普遍使用。 目前,共轭亚油酸及其衍生物的分析主要有以下几种方法:紫外分光光度法 ,由于共轭亚油酸存在共轭双键,所以其在.的紫外区域有 特征吸收峰,可是亚油酸则没有,因此常在这个波长下检测共轭亚油酸的存在和 含量?。但是此方法的缺点是只能检测共轭亚油酸的总含量,却不能检测其中 各个异构体的含量【;银离子高效液相色谱法,该方法依据矿 浸渍色谱柱对共轭亚油酸的特异性吸附作用不同而分开大部分共轭亚油酸异构 体,从而使共轭亚油酸甲酯各异构体的分离效果显著提高 ;高效毛细管电泳 法,该技术是将色谱技术和电泳技术相结合,根据溶质在胶束相及水相 之间的不同分配系数而分离;核磁共振法,主要是根据在较强的外 磁场作用下,元素的原子核会发生能级分裂,其相应能量的电磁辐射将产生共振吸收现象的一种分析方法,根据质子的偶合常数和化学位移来确定顺反异构体和 不饱和度等信息,但其缺点是谱峰重叠较多且不适用于共轭亚油酸含量较低的生 物样品【圳;气相色谱法,是分析大多数脂肪酸的常规分析方法,其对于 分析各种共轭亚油酸异构体也是非常适用的。但是,由于共轭亚油酸具有不挥发 性,故在使用进行共轭亚油酸的分析时,必须将其转化为挥发性的非极性衍 生物共轭亚油酸甲酯【 。在进行甲酯化时会因为酯化时间、酯化温度和酯化试 剂的不同而对异构体的组成产生影响。常用的脂肪酸甲酯化方法一般分为 酸催化法及碱催化法这两大类。酸催化法适用于甲酯化以酯形式存在的脂肪酸和 游离脂肪酸,碱催化法则适用于甲酯化甘油酯。应该根据共轭亚油酸在样品 中的不同存在形式选择较适宜的甲酯化方法,且尽量选择较长的强极性毛细管柱 【;气相色谱质谱联用法.,根据等【的研究报道,只有当共轭 亚油酸中各种异构体浓度达到一定程度时,才能使在以上的极细毛细 管柱中分离检测出来。通过气相色谱质谱联用法中高分辨率质谱可以提高检测的 。因此, 灵敏度,即使样品中共轭亚油酸异构体含量很少也能快速检测出来 在本课题研究中,使用气相色谱质谱联用法来作为检测手段。 .共轭亚油酸的生理功能 在共轭亚油酸的多种生理研究中,抗癌作用是人们最先发现的。共轭亚油 酸是目前众所周知的一种具有明显抑制癌症功能的脂肪酸。在具有抗癌作用 的共 轭亚油酸中,主要是以,?和,?异构体的形式存在。根据大量 的动物实验表明,共轭亚油酸能预防治疗乳腺癌、肠癌、胃癌、黑色素癌、 肺癌、 。 卵巢癌、肝癌、前列腺癌和结肠癌【 此外,据研究发现共轭亚油酸还具有抗 动脉粥样硬化作用、提高机体免疫力和抗糖尿病的作用。 除上述几种生理功能外,共轭亚油酸还有一项特别值得研究的作用。当今 社会,人们的生活水平越来越高,一些不健康不科学的饮食生活方式大量 涌现,导致很多人为了体重问题而烦脑【 。目前研究报道指出,共轭亚油 。等喂 酸可以使机体体内的脂肪堆积减少,增加体内肌肉的含量 养大鼠含%的共轭亚油酸的饲料,周之后,解剖与对照组比较,其大鼠体内 脂肪显著减少【。等将含量分别为%、.%、.%、.%、.%的 共轭亚油酸给老鼠灌胃。周之后解剖发现老鼠体内脂肪随着共轭亚油酸剂量 的增多而减少越多【。实验结果还说明因为共轭亚油酸异构体不同而导致其 减 肥作用不一样。等考察多种不同的共轭亚油酸异构体,发现,没 有明显减肥作用,但是一却有显著减肥效果,说明共轭亚油酸异构体 不同,减肥作用效果不同【】。等发现在人体体内的试验中,服用含有 。 等量,和,?异构体的食物可以显著降低人体脂肪含量【 虽然国内外越来越多的文献认为共轭亚油酸可以有助于机体减肥,但是还尚未证实其对于减肥的作用机理。,,等研究指出形成肥 胖症的潜在靶点是脂肪酸合成酶‘。】。 .本文研究意义和内容 由于共轭亚油酸有较多生理保健功能,共轭亚油酸已越来越多应用到功能性 保健食品领域。目前,工业上主要是利用碱催化异构化法将富含亚油酸的天然植 物油来制备共轭亚油酸。但是需要进行皂化等前处理步骤,且制备的共轭亚油酸 纯度不高。共轭亚油酸减肥生理功能的机理目前还在探索阶段。 因此,本文选 用亚油酸为反应原料来制备高纯度的共轭亚油酸,建立小鼠肥胖模型来研究共轭 亚油酸的减肥生理功能,以期为共轭亚油酸的开发提供更多的理论依据。 本文主要研究共轭亚油酸的碱催化异构制备工艺、纯化工艺及其减肥作用, 具体研究内容如下: 共轭亚油酸的碱催化异构制备:选用亚油酸为原料,氢氧化钾为催化剂,, .丙二醇为溶剂,采用气质联用的检测方法,以共轭亚油酸的百分含量为指 标,先通过单因素实验,再通过响应面实验确定优化工艺条件; 共轭亚油酸的纯化:采用尿素包合法纯化上一步碱催化异构制备的共轭亚 油酸,采用气质联用的检测方法,以共轭亚油酸的百分含量为指标,先进 行单因素试验,再进行正交试验,确定纯化共轭亚油酸的优化工艺条件; 共轭亚油酸的减肥作用:以昆明小鼠为实验动物建立肥胖模型, 对其口服灌胃共轭亚油酸,研究共轭亚油酸的减肥作用,结合脂肪酸合成 酶这一检测指标研究其和肥胖的相关性。第二章碱催化异构共轭亚油酸工艺研究 在本章中将亚油酸作为反应原料,氢氧化钾作为催化剂,,一丙二醇作为 溶剂,通过研究亚油酸与碱的用量比,碱与溶剂用量比,反应温度和反应时间的 关系,以共轭亚油酸百分含量为指标,采用响应面设计方法优化制备共轭亚油酸 的工艺条件。 .材料 ..主要试剂 表.试剂清单表 ? ..主要仪器与设备 表?仪器与设备清单表 .试验方法 在三口烧瓶中加入预先设定比例的,.丙二醇和氢氧化钾,用数显 智能控温磁力搅拌器边逐渐升温边逐步搅拌使其充分溶解,然后加入设定比例下 的亚油酸,并用热电偶测定内部反应温度,反应在设定温度下反应至规定时间。 待冷却至室温,加入盐酸酸化至.,迅速搅拌溶液溶解全部块状凝结物。 加入正己烷萃取.次,加入蒸馏水充分水洗直至呈中性,分液取上层正己 烷溶液。在正己烷溶液中加入无水硫酸钠吸收内部未完全分离的水分,静置 过夜。 弃去底部沉淀,将收集到的正己烷溶液于?下真空旋转蒸发,收集余下液体 【一. .分析方法 .. .检测共轭亚油酸×. 选用气相色谱柱. .,,采取以下程序 升温进行的条件为:初始温度?,保持后,按照。/升温至 ?保持,接着以?/升温至。,再按照?/升温至? 保持。柱前压:控制为.;柱流速:控制为./;检测器温 度:保持为。;进样口温度:保持为?;空气流速:控制为./; 氢气流速:控制为./;进样量:设定为:分流比:设定为:。 质谱条件为:以离作为子源,连接管温度控制为。,离子阱温度控制为。,溶剂 延迟设定为。按照全离子方式扫描,扫描质量数/的 范围为’。使用图谱库进行质谱数据的检测】。 甲酯化方法:取样品,加入%的甲醇溶液于。的水浴 锅中水浴,进行甲酯化。之后加入正己烷进行萃取,蒸馏水反复洗 涤直至上层液体呈中性,静置取上层正己烷层待测【。 ..共轭亚油酸含量计算方法 共轭亚油酸的百分含量%采用峰面积归一化法来计算,以共轭亚油 酸各种异构体的峰面积之和与总出峰面积比值来计算共轭亚油酸的百分含 量 【. .试验设计 ..碱法异构产物鉴定试验设计 按照.的方法省去盐酸酸化的步骤进行操作,将反应得到的产物按照.. 的检测方法进行检测。同时比较按照.的方法进行操作得到的反应产物和 标准品,按照..的检测方法进行检测。 ..单因素试验设计 选取单因素如下:碱与亚油酸的用量比、溶剂与碱的用量比、反应温度、反 应时间试验中固定溶剂的量。每个试验重复三次。 ...碱与亚油酸的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 以碱与亚油酸的用量比作为因素进行单因素试验,研究其对于共轭亚油酸百 分含量的影响,进而确定碱与亚油酸用量的较优比例。在溶剂与碱的用量比 为: ,反应温度为。,反应时间为.条件下,考察碱与亚油酸的用量比分别 为.:、:、.:、:、.:,以共轭亚油酸百分含量作为指标。 ...溶剂与碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 选择不同的溶剂与碱的用量比进行单因素试验,研究其对于共轭亚油酸百分 含量的影响,以确定较优的溶剂与碱的用量比。按照碱与亚油酸的用量比为 以上 试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的量,反应温度为?,反应时间为. 的条件下,考察溶剂与碱的用量比分别为:、:、:、:、:,以 共轭亚油酸百分含量作为指标。 ...反应温度对共轭亚油酸百分含量的影响 对不同的反应温度进行单因素试验,研究其对于共轭亚油酸百分含量的影 响,从而确定较优的反应温度,优化工艺条件。按照碱与亚油酸的用量比,溶剂 与碱的用量比为以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的用量比,反应时间为 .条件下,考察反应温度分别为?、?、?、?、?,以共 轭亚油酸百分含量作为指标。 ...反应时间对共轭亚油酸百分含量的影响选取不同的反应时间作为因素进行单因素试验,研究其对于共轭亚油酸百分 含量的影响,进而确定较优的反应时间,优化工艺条件。按照碱与亚油酸的用量 比,溶剂与碱用量比为以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的用量比,反应 温度为条件下以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的反应温度,考察反应时 间分别为、.、.、.、.、.,以共轭亚油酸百分含量作为指标。 ..响应面试验设计 根据上述单因素试验所得的结果,响应面试验选取碱与亚油酸的用量比、溶 剂与碱的用量比、反应温度、反应时间个单因素,设定个水平,优化合成 的条件,每个试验重复次。 .结果与分析 ..碱法异构产物鉴定 图.未进行酸化步骤的样品气相色谱图 一 图经过酸化的样品气相色谱图 图. 标准品的气相色谱图 图.经过酸化的样品峰的质谱图 :: : ; ? :; : 粥. ; . ?患蕊矬磋 图?经过酸化的样品峰的质谱图 图. 标准品峰的质谱图 图. 标准品峰的质谱图图? , 甲酯质谱图 . 一 太 特州、 . 皋 五 小八: ; :。 .?; .二 奠; . 量篡; :譬 嚣; 三二 臻 图? .甲酯质谱图 , 未经过盐酸酸化的样品气相图谱如图.所示,和标准品的气相色谱 图图?所示作对比,未在保留时间范围内出峰,说明未经过盐酸酸化步骤的产 物中没有共轭亚油酸异构体。经过盐酸酸化的样品的气相色谱图如图?所示。 峰的保留时间为.,峰的保留时间为.。分析标准品的气 相色谱图,如图.所示。峰的保留时间为.,大致和经过酸化的样品 峰的保留时间吻合。峰的保留时间为.,也几乎和经过酸化的样品 峰的保留时间一致。说明经过盐酸酸化过程的产物中有共轭亚油酸异构体。 碱法异构机理如图?所示【::;一?:一一:.一. 【丑::一:?//一算:珂一万:一。 倒//铲娟:?; ::一?:一汀一珂:.~娜一 置。一籍.?蹬:戆?搿麓一铡..一;嚣。?露研一翻 籍一籍.一篷..一固开 图?碱法异构机理示意图 ?亚油酸的碳亚甲基位于两个碳碳双键之间,呈现一定的酸性性质, 很容易在无机强碱的作用下脱去一个质子生成碳负离子中间体,碳负离子中 问体可以形成碳碳双键之间的电子离域作用,该离域作用实际增加了中间体 的稳 定性,更有利于脱去质子形成中间体。加入易电离出氢离子的强酸后,由于碳 和碳都带有部分负电荷,可以很容易与结合,进而生成, 和,这两种位置异构的共轭亚油酸。加入盐酸的目的主要是为了提供, 并且可以中和过量的碱,此步骤不可缺少。 观察样品峰的质谱图.和标准品峰的质谱图较为相似,样 品峰的质谱图.和标准品峰的质谱图?也很相近,且这几个峰都 有分子离子峰/,基峰强度相同,主要碎片离子相同,均为,,, ,,,但强度略有不同。充分证明样品的峰和标准品的峰是 同一种异构体,样品峰和标准品的峰是同一种异构体。经过图 甲酯的质谱图.相似度较高,峰和 谱库的比对,发现峰和, .甲酯的质谱图相似度较高。可判断出峰为,,峰 为,。说明通过碱异构化方法制备出的共轭亚油酸样品同时含有 ,一和一这两种异构体。 ..碱与亚油酸的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 碱与亚油酸的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响如图?所示。在碱与 亚油酸的用量比为.:?:的范围内,共轭亚油酸百分含量极显著增加 .。在碱与亚油酸的用量比为:.:的范围内,,共轭亚油酸百分含量极显 著减少.。当碱与亚油酸的用量比达到:时,共轭亚油酸百分含量 较高,继续增加碱与亚油酸的用量比,共轭亚油酸百分含量反而会下降。说明 在 一定范围之内,共轭亚油酸百分含量和碱与亚油酸的用量比成正比,碱与亚 油酸 的用量比越高,催化剂浓度越大,反应速度则越快,在一定时问内生成的 越多。但是当碱与亚油酸的用量比达到一定量后,反应分子之间的碰撞机会维持 基本不变状态。碱的用量太多,反应过程中反而会产生过多的泡沫,反应体系变 得粘稠而非均匀,加大后续酸化步骤的盐酸消耗量。 髯 : 碱与亚油酸的用量比 图?碱与亚油酸的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 ? % ..溶剂与碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 溶剂与碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响如图.所示。在溶剂与 碱的用量比为:?:的范围内,共轭亚油酸百分含量极显著增加.。 在溶剂与碱的用量比为:?:的范围内,共轭亚油酸百分含量显著减少 .。在溶剂与碱的用量比为:时,共轭亚油酸百分含量较高,继续增加 溶剂与碱的用量比,共轭亚油酸百分含量呈现下降趋势。本实验以,一丙二醇为 溶剂,在整个反应体系中仅仅是作为溶剂用于溶解催化剂和亚油酸,不会参与共 轭异构化反应。当溶剂用量很少时,整个反应体系粘度较大,是非均相的反应体 系,不易进行搅拌并且搅拌不均匀使传质阻力较大,反应不利于正常进行,共 轭 亚油酸百分含量较低;当溶剂用量过大时,虽然使反应体系成为均相反应体系, 但是单位体积内催化剂的浓度相对降低,反应分子之间的有效碰撞概率变小,导 致影响共轭亚油酸百分含量。溶剂与碱的用量比 图.溶剂与碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的影响 %..反应温度对共轭亚油酸百分含量的影响 反应温度的大小对共轭亚油酸百分含量的影响如图?所示。在反应温度为?一?范围内,共轭亚油酸百分含量极显著增加.。在反应温 度为?.?范围内,共轭亚油酸百分含量显著减少.。当反应温 度达到。时,共轭亚油酸百分含量较高,继续升高反应温度,共轭亚油酸百 分含量呈现下降趋势。影响碱的异构化反应重要因素之一是反应温度。在一定范 围内,升高温度,可以促进异构化反应,有利于共轭亚油酸百分含量的提高。 但是过高的温度,亚油酸容易发生环化、聚合等副反应,影响主反应的生 成。 ? ? ? ? 反应温度? 图.反应温度对共轭亚油酸百分含量的影响%..反应时间对共轭亚油酸百分含量的影响 反应时间对共轭亚油酸百分含量的影响如.图所示。在反应时间为一. 范围内,共轭亚油酸百分含量极显著增加.。在反应时间为... 范围内,共轭亚油酸百分含量显著减少.。当反应时间达到.时,共 轭亚油酸百分含量较高,继续延长反应时间,共轭亚油酸百分含量反而会下降。 这说明反应进行到.时,碱异构化反应基本完成。根据化学热力学动力学原 理,反应完成达到平衡时,延长反应时间并不会增加产物,而且可能会产生较多 的副产物。 图.反应时间对共轭亚油酸百分含量的影响 % ? ..响应面试验结果与分析 基于单因素试验的结果,根据.响应面试验设计原理【,对 影响共轭亚油酸百分含量的关键因素进行研究探索,以获得较优的共轭亚油酸工 艺条件参数。使用...为辅助手段设计响应面试验,选取 碱与亚油酸的用量比、溶剂与碱的用量比、反应温度、反应时间这四个影响因素, 采用四因素三水平的响应面分析方法,响应面试验因素与水平设计见表?。以 共轭亚油酸百分含量/%为响应值,对影响共轭亚油酸百分含量的 四个因素水平进行响应面分析,试验设计中有个析因点和个零点,其中析 因点是自变量取值和各因素所构成的三维顶点;零点是区域中心点,零点试 验重 复五次来估计试验误差。 设该模型通过最小二乘法所拟合的二次多项方程式为:,式中为预测响应值,即共轭亚油酸百分含量为预测值;为线性 系数;为二次项系数;为碱与亚油酸的用量比,为溶剂与碱的用量比, 为反应温度?,为反应时间。 表.响应面试验因素与水平表 ...回归分析结果 响应面试验方案及结果数据见表?。通过表中共轭亚油酸百分含量试验数 据对方程进行多元回归拟合,得到共轭亚油酸百分含量对碱与亚油酸用量比、溶 剂与碱的用量比、反应温度、反应时间的二次多项回归方程: 一........ ......... 。方程的方差分析如表?所示,由表得知,模型的值.,说明 模型极显著,而失拟项的值.不显著,说明该模型的拟合程度较好。回 归系数显著性检验表明:因素、、和对共轭亚油酸百分含量的线性效应 皆为极显著.;而、和对共轭亚油酸百分含量的交互效应 影响极显著.,及对共轭亚油酸百分含量的交互效应影响为显著.,但是对共轭亚油酸百分含量的交互效应影响不显著 .。 表?设计方案与结果 表同归分析结果 . 方差来源 平方和 自由度 均方 值值 显著性 注:?.值小于.为极显著;.值小于.为显著。 ...共轭亚油酸百分含量的响应面分析 ?碱与亚油酸的用量比和溶剂与碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的交 互影响 当反应温度为?,反应时问为.时,碱与亚油酸的用量比和溶剂以碱 的用量比对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其等高线图见图 .所示。由图?可以看出,响应曲面呈现钟罩形,在碱与亚油酸的用量比 为.:.:和溶剂与碱的用量比为:?:的范围内,共轭亚油酸百分含量不断 上升,之后随着碱与亚油酸的用量比和溶剂与碱的用量比的增加,共轭亚油酸百 分含量明显下降。等高线的形状可以在一定程度上反映出交互效应的强弱,越趋 于椭圆形则表示两因素的交互作用越显著,而越趋于圆形则表示交互作用越不显 著。从图中等高线看出,碱与亚油酸用量比和溶剂与碱用量比这两个因素的交互 作用极显著。图?碱与亚油酸的用量比和溶剂碱的用量比对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲 面图及其等高线 . % ?碱与亚油酸的用量比和反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响 当溶剂与碱的用量比为:,反应时间为.时,碱与亚油酸的用量比和 反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其等高线图见图 .所示。由图.可以看出,响应曲面呈现钟罩形,在碱与亚油酸的用量比 为.:?:和反应温度为?一?的范围内,共轭亚油酸百分含量明显上 升,之后随着碱与亚油酸的用量比和反应温度的增加,共轭亚油酸百分含量有下 降趋势。从图中等高线看出,碱与亚油酸的用量比和反应温度这两个因素的交互 作用较显著。 图?碱与亚油酸的用量比和反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及 其等高线 ? , % ?碱与亚油酸的用量比和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响 当溶剂与碱的用量比为:,反应温度为?时,碱与亚油酸的用量比和 反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其等高线见图. 所示。由图.可以看出,响应曲面呈现钟罩形,在碱与亚油酸的用量比为.::和反应时间为一.的范围内,共轭亚油酸百分含量明显增加,之后随 着碱与亚油酸的用量比和反应时间的增加,共轭亚油酸百分含量有下降趋势。从 图中等高线看出,碱与亚油酸用量比和反应时间这两个因素交互作用不显著。 图.碱与亚油酸的用量比和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及 其等高线 ? ,% ?溶剂与碱的用量比和反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响 当碱与亚油酸的用量比为:,反应时间为.时,溶剂与碱的用量比和 反应温度对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其等高线见图一 所示。由图.可以看出,响应曲面呈现钟罩形,在溶剂与碱的用量比为:.: 和反应温度为。一。的范围内,共轭亚油酸百分含量明显增加,之后随着 溶剂与碱的用量比和反应温度的增加,共轭亚油酸百分含量有下降趋势。从图中 等高线看出,溶剂与碱的用量比和反应温度这两个因素交互作用极显著。 图.溶剂与碱的用量比和反应温度对共轭?油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其 等高线 , ?% ?溶剂与碱的用量比和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响 当碱与亚油酸的用量比为:,反应温度为。时,溶剂与碱的用量比和 反应时问对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其等高线见图. 所示。由图.可以看出,响应曲面呈现钟罩形,在溶剂与碱的用量比为: ?:和反应时间为一.的范围内,共轭亚油酸百分含量明显增加,之后随 着溶剂与碱的用量比和反应温度的增加,共轭亚油酸百分含量有下降趋势。 从图 中等高线看出,溶剂与碱的用量比和反应时间这两个因素交互作用极显著。 图.溶剂与碱的用量比和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面 曲面图及其 等高线 ?, % ?反应温度和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响 当碱与亚油酸的用量比为:,溶剂与碱的用量比为:时,反应温度和 反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及其等高线见图. 所示。由图.可以看出,响应曲面呈现钟罩形,在反应温度为?一? 和反应时间为一.的范围内,共轭亚油酸百分含量明显增加,之后随着反 应温度和反应时问的增加,共轭亚油酸百分含量明显下降。从图中等高线看 出, 反应温度和反应时间这两个因素交互作用较显著。 图.反应温度和反应时间对共轭亚油酸百分含量的交互影响响应面曲面图及 其等高线 ?% ,...优化回归模型后的分析结果 由于交互项对共轭亚油酸百分含量的的结果影响不显著.,因 此采取手动优化的方式优化回归模型,优化后的结果如表所示。 根据方差分析及回归方程系数显著性检验结果,将差异不显著的因素交互项 剔除,得到共轭亚油酸百分含量/%关于碱与亚油酸的用量比、 溶剂与碱的用量比、反应温度?和反应时间的优化后的回归模型: ...一..... ...一.... 根据表可知,模型的值.,失拟项.不显著且大于优化 前失拟项值,这表明优化后模型拟合度更好。试验误差较小,该模型较合适, 可以将此模型来对共轭亚油酸百分含量进行分析和预测。因素、、和对 共轭亚油酸百分含量的线性效应皆为极显著.;而、和对 共轭亚油酸百分含量的交互效应影响极显著.,及对共轭亚 油酸百分含量的交互效应影响为显著.。较优的制备条件是碱与 亚油酸的用量比为.:,溶剂与碱的用量比为.:,反应温度为. ?,反应时间为.,此时共轭亚油酸百分含量较高,软件预测理论值为共轭亚 油酸百分含量为..%。 表优化的回归分析结果 ...验证试验 根据理论较优条件综合考虑实际条件,选择碱与亚油酸的用量比为.:,溶 剂与碱的用量比为.:,反应温度为?,反应时间为.。在上述试验条 件下进行次碱异构化试验,得到共轭亚油酸百分含量为.%,与预测值 .%基本一致,说明该方程与实际情况相符合,拟合程度较好。 .本章小结 通过碱催化异构化方法制备出的共轭亚油酸样品同时含有,一和 。这两种异构体,利用单因素试验和响应面设计试验将碱催化异构反 应进行工艺优化,并且依据响应面设计试验建立了共轭亚油酸百分含量 /%关于碱与亚油酸的用量比、溶剂与碱的用量比、反应温度 ?和反应时间的二次多项回归方程: 一..一..... ...一....。 碱催化异构化反应优化的工艺条件为:碱与亚油酸的用量比为.:,溶剂 与碱的用量比为.:,反应温度为。,反应时间为.,得到共轭亚油酸 百分含量为.%。第三章共轭亚油酸的尿素包合工艺研究 碱法异构制备的共轭亚油酸不是很纯,有其他杂质如饱和脂肪酸等。 因此在本章中,采用尿素包合法对前面得出较优工艺条件制备出的共轭亚 油酸进行纯化。 纯尿素的空间结构是四方形晶体形式。如果在乙醇或者甲醇溶入直链 化合物中,再在溶液中加入尿素,尿素将会和直链化合物形成六棱形晶体, 且尿素附着在直链化合物上螺旋式排列。观察内部,将形成一个直径约 .的空穴,直链化合物的直径约.,可以被包在空穴之中,形 成脲包化合物。但是直径大于.的化合物就不能包在空洞中形成脲 包化合物。饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸可以和尿素分子在进行结晶的过 程中形成较稳定的脲包化合物析出,但是多不饱和脂肪酸因为双键较多, 导致碳链产生弯曲,形成一定空间结构,内部直径大于.,无法包在 空洞中被尿素包合。因此可以将形成脲包化合物的饱和脂肪酸和单不饱和 脂肪酸过滤除去,获得纯度较高的产物多不饱和脂肪酸。 .材料 ..主要试剂 表.试剂清单表 ? ..主要仪器与设备 表.仪器与设备清单表.试验方法 按照预先设计的方案比例试验中固定尿素的质量,将一定量的尿 素和乙醇混合,加热回流,等尿素全部溶解之后,加入事先按照上章中较 优试验条件制备的共轭亚油酸样品,混合均匀,水浴温度?,回流。 冷却至室温,在不同的温度下保存不同的时间进行包合反应。然后取出过 滤,加入乙醚.石油醚体积比为:萃取次。合并有机相滤液,真 。根据.分析方法来 空旋转蒸发掉有机相,得到高纯度的共轭亚油酸【 分析样品中共轭亚油酸的百分含量。 .试验设计 ..单因素试验设计 ... 与尿素质量比对共轭亚油酸百分含量的影响 以与尿素质量比作为因素进行单因素试验,研究其对于共轭亚 油酸百分含量的影响,进而确定与尿素质量比的较优比例。在尿素 质量与溶剂体积的比为:,包合温度为.。,包合时间为条件下考 察与尿素质量比分别为:、:、:、:、:,以共轭亚 油酸百分含量作为指标。 ...尿素质量与溶剂体积的比对共轭亚油酸百分含量的影响 以尿素质量与溶剂体积的比作为因素进行单因素试验,研究其对于共 轭亚油酸百分含量的影响,进而确定尿素质量与溶剂体积的比的较优比 例。在与尿素质量比为以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的质量 比,包合温度为一?,包合时间为条件下考察尿素质量与溶剂体积的 比分别为:、:、:、:、:,以共轭亚油酸百分含量作为指 标。 ...包合温度对共轭亚油酸百分含量的影响 以包合温度作为因素进行单因素试验,研究其对于共轭亚油酸百分含 量的影响,进而确定包合温度的较优比例。在与尿素质量比,尿素 质量与溶剂体积的比为以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的比例,包 合 时间为条件下包合温度分别为.?、一 ?、?、?、?,以共 轭亚油酸百分含量作为指标。 ...包合时间对共轭亚油酸百分含量的影响 以包合时间作为因素进行单因素试验,研究其对于共轭亚油酸百分含 量的影响,进而确定包合时间的较优比例。在与尿素质量比,尿素 质量与溶剂体积的比为以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的比例,包 合 温度为以上试验得到的共轭亚油酸百分含量较高的包合温度,包合时间分别 为、、、、,以共轭亚油酸百分含量作为指标。 ..正交试验设计 依据单因素试验结果,选取与尿素质量比、尿素质量与溶剂体积 的比、包合温度、包合时间各个水平进行正交试验。 .结果与分析 .. 与尿素质量比对共轭亚油酸百分含量的影响 与尿素质量比对共轭亚油酸百分含量的影响如图.所示。在 与尿素质量比为:?:范围内,共轭亚油酸百分含量极显著增加 .。在与尿素质量比为:.:范围内,共轭亚油酸百分 含量变化不显著.。当与尿素质量比达到:时,共轭亚油 酸百分含量较高,继续增加与尿素的质量比,共轭亚油酸百分含量 无明显变化。原因是中掺杂的饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的量是 固定的,随着尿素质量的增加,饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸已经全部被 包合形成脲包化合物,继续增加尿素的质量,对共轭亚油酸百分含量影响 不大。: : . :尿素他: 图? 与尿素质量比对共轭亚油酸百分含量的影响 ?% ..尿素质量与溶剂体积的比对共轭亚油酸百分含量的影响 尿素质量与溶剂体积的比对共轭亚油酸百分含量的影响如图.所 示。在尿素质量与溶剂体积的比为:.:范围内,共轭亚油酸百分含 量极显著增加.。在尿素质量与溶剂体积的比为:.:范围 内,共轭亚油酸百分含量极显著减少. 。当尿素质量与溶剂体积 的比达到:时,共轭亚油酸百分含量较高,继续增加尿素质量与溶剂体 积的比,共轭亚油酸百分含量反而会急剧下降。可能是因为在尿素的质量 一定的情况下,一定范围内,溶剂的增加有利于的溶解,但是增加 到一定程度继续增加溶剂的体积反而会破坏尿素的包合作用,可能会对形 成脲包化合物产生干扰。 ?;量 刚? 蚍 ?舭 叭 :。 : : 尿素:“溶剂/: 图尿素质量与溶剂体积的比对共轭亚油酸百分含量的影响%..包合温度对共 轭亚油酸百分含量的影响 包合温度对共轭亚