大鼠甲状腺素(T4)ELISA快速检测试剂盒

大鼠甲状腺素(T4)ELISA快速检测试剂盒 使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 产品编号:CSB-E05082r 检测范围:20 ng/ml-320 ng/ml 最低检测限:5 ng/ml 特异性:本试剂盒可检测T4，且与其他相关物质无交叉反应。 有效期:6个月 预期应用:ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中T4含量。 说明 1(试剂盒保存:-20?(较长时间不用时);2-8?(频繁使用时)。 2(浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3(中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4(刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造 成任何影响。 实验原理 本试剂盒采用酶联免疫直接竞争法检测T4。微孔板上包被有抗体T4抗体。加入T4品或样品，然后加入生物素标记的T4。样品中的T4、生物素标记T4与固相板上的抗T4抗体发生竞争结合。再向微孔中加辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成固相抗体-生物素化T4-亲和素-HRP复合物。经加底物显色后，随着样品中T4浓度的升高，显色OD值呈逐渐下降的线性关系。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 2. 标准品(Standard):5×1ml/瓶。 标准品 S1 S2 S3 S4 S5 浓度 20 40 80 160 320 (ng/ml) 3. 生物素标记T4:1×6ml/瓶。 4. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-Avidin ):1×6ml/瓶。 5. 底物溶液A(Substrate A):1×6ml/瓶。 6. 底物溶液B(Substrate B):1×6ml/瓶。 7. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 8. 终止液(Stop Solution):1×6ml/瓶(2N HSO4)。 2 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 超声清洗器 5. 干净的试管和Eppendof管 6. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 7. 蒸馏水，容量瓶等 标本的稀释原则: 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 浓洗涤液稀释原则: 临用前用蒸馏水进行20倍稀释。如有盐析出，稀释后水浴加温助溶。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，先进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔不加任何溶液，余孔分别加标准品 或待测样品50ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，然后在所有孔中加 入50 ul 生物素标记T4(空白孔中不加)。尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶标板加 上盖或覆膜，37?反应60分钟(为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品 溶液)。 2. 温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板3-5次，每次浸泡10秒，约200ul/每孔，甩干。 3. 所有孔中加入50 ul辣根过氧化物酶标记亲和素。尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。酶 标板加上盖或覆膜，37?反应30分钟 4. 按步骤2进行洗涤。 5. 依序每孔加底物溶液A和B各50ul，37?避光显色(30分钟内，一般10-15分钟内， 此时肉眼可见标准品的后3-4孔有明显的梯度蓝色，前3-4孔颜色不明显，即可终止)。 6. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量 与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入 终止液。 7. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内 进行检测。 注: 1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N HSO4。2 测量时先用此孔调OD值至零。 3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8?保存。 5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板:如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。 2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 6. 底物请避光保存。 7. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。