山茱萸多糖的提取及含量测定

山茱萸多糖的提取及含量测定 山茱萸多糖的提取及含量测定 作者:张彩莹， 张良， 惠丰立， 褚学英【关键词】 山茱萸;山茱 萸多糖;均匀设计;提取 摘要:目的从山茱萸中提取多糖，并建 立山茱萸多糖含量的测定方法。方法采用均匀设计优化山茱萸多糖的 提取条件，用热水浸提、乙醇沉淀、DE-52柱层析的方法提取纯化山 茱萸多糖，用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。结果山茱萸中多糖的 含量为16.04%，平均回收率为99.01%，RSD=1.13%(n=3)。结论首次 运用均匀设计优化山茱萸多糖的提取条件，提取得率高，苯酚-硫酸 比色法测定山茱萸多糖含量稳定性、回收率较好。 关键词:山茱 萸; 山茱萸多糖; 均匀设计; 提取 xtraction and Determination of the Content of Polysaccharide from Fructus Corni Abstract:ObjectiveTo extract polysaccharide and establish the method for determination of the content of polysaccharides from Fructus Corni. MethodsUniform design test was used to extract polysaccharides from Fructus Corni. Polysaccharide was purified by water extraction ,ethanol sedimentation, DE-52 chromatography. The content of polysaccharide was determined by phenol-vitriolic colorimetry. ResultsThe content of polysaccharide in the Fructus Corni was 16.04%,the average recovery was 99.01%，and RSD was 1.13% (n=3).ConclusionIt is the first time that uniform design is used to optimize extraction conditions of polysaccharide. The extraction rate of polysaccharide is high. Phenol-vitriolic colorimetry was a stable and reproduciable method to determine content of polysaccharide in Fructus Corni. Key words: Fructus Corni; Polysaccharide; Uniform design; Extraction 山茱萸,1,(Fructus Corni)为山茱萸科植物山茱萸Cornus Officinalis Sieb.et Zucc.的干燥果肉，又名山萸肉、药枣、肉枣 等，临床上以除去种子的成熟果实入药，其味酸、涩、微温，归肝肾 经，有补益肝肾、涩精固脱的功效，是我国传统的中药材。中医药临床研究证明,2，3,，山茱萸是治疗糖尿病、冠心病和高血压病的主要药材。果肉中主要成分有糖类、有机酸类及其酯类、鞣质类等。多糖类物质是生命代谢不可缺少的重要物质，具有多种生物活性而成为当今生物医药研究和开发的一大热点。本文以山茱萸为材料，采用均匀设计实验,4,优化山茱萸多糖提取条件，并通过乙醇沉淀，DE-52柱层析进一步纯化，用苯酚-硫酸比色法测定山茱萸多糖的含量。 1 器材 1.1 材料山茱萸干燥果实(产地:河南西峡县，购自药店)。 1.2 试剂D(+)-葡萄糖(Fluka进口分装，上海华硕精细化学品有限公司);重蒸苯酚(北京市双翔达生化试剂);DE-52(进口分装，whatman产品，国药集团化学试剂有限公司);其他试剂均为国产分析纯。 1.3 仪器TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);台式离心机(太仓市医疗器械厂);数显恒温水浴锅HH-6(国华电器有限公司);中兴高速万能粉碎机(中兴伟业有限公司);旋转蒸发器RE-52AA(上海亚荣生化仪器厂);层析装置(上海沪西分析仪器厂)。 2 方法与结果 2.1 山茱萸多糖的提取与纯化 2.1.1 山茱萸多糖的提取纯化干燥的山茱萸果实粉碎?100目筛筛分?山茱萸粉末?八倍体积95%乙醇回流8 h脱脂?冷却抽滤?滤渣晾干?预处理的山茱萸粉末?水浸提?离心?上清液?合并上清液?浓缩?乙醇沉淀?干燥得粗多糖。粗多糖溶于水?透析?DE-52柱层析纯化?收集部分多糖洗脱液浓缩?乙醇沉淀?冷冻干燥?白色山茱萸多糖。 2.1.2 均匀设计实验优化山茱萸多糖的提取条件选择提取温度、提取时间和料液比3个因素，以山茱萸多糖的提取得率为考察指标进行三因素八水平的均匀设计实验如1。称取一定量的预处理的山茱萸粉末，以不同的料液比、提取温度、提取时间在恒温水浴中保温浸提，4 000 r/min离心15 min，合并上清液，加入3倍体积95%的乙醇，4?放置24 h离心得粗多糖，热水溶解，定容，苯酚-硫酸法,5,测定多糖的含量，计算多糖得率。结果见表1。