葡萄糖测定试剂盒---氧化酶法

葡萄糖测定试剂盒---氧化酶法 技术咨询电话:400-607-9999 葡萄糖测定试剂盒---氧化酶法 货号:M100016 描述:食物中的糖类物质吸收进入血液转化为葡萄糖，为组织细胞提供能量。糖尿病等多种代谢异常状态伴随血糖升高，营养不良、饥饿、或剧烈运动时血糖降低。本试剂盒采用葡萄糖氧化酶(GOD)法 ，精确特异测量生物样品中葡萄糖浓度，是世界卫生组织推荐也是中国《全国临床检验》指定的临床血糖检测方法，用于临床和基础研究的葡萄糖浓度检测。 1,2测定原理:根据著名的Trinder反应，葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢(HO);然后，过氧化物酶(POD)催化过氧化氢，并使色原物质(如4-氨基安替比林偶联酚)生成红色醌亚胺22 类化合物，颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。在500nm处检测吸光度(OD)值可测量葡萄糖含量。 用途:测定人及动物血清、血浆、脑脊液、组织细胞孵育液及其裂解液等样品中的葡萄糖含量。尿液葡萄糖测定推荐使用“邻甲苯胺(o-Toluidine)法试剂盒”。 试剂组成 (200次微量检测): 1. 葡萄糖品 5 mmol/L (等于90 mg/100 ml或90 mg/dl)，0.2 ml 2. 试剂R1，32 ml 3. 试剂R2，8 ml 试剂常温运输。避光4 ºC保存6月。混合的工作液4ºC稳定1个月。 所需仪器:(721型)可见光分光光度计、酶标仪、自动或半自动生化分析仪。波长500nm (480~550nm)。 测定操作:可采用手工、半自动、全自动方式测定。使用1 ml比色杯测试时反应体积为1ml，采用微板测试时反应体积0.2 ml。根据是否预先混合试剂R1及R2，分为单一试剂和双试剂方式测定: (1) 为减少取样误差和测量误差，推荐采用预先混合的单一工作液试剂 (见1):取4体积试剂R1与1 体积试剂R2混合(4:1比例)配制成工作液。混合好的工作液应尽快使用，2-8 ºC避光可存放1周，也 可,20 ºC长期保存。如果加入工作液的空白管500 nm吸光度大于0.3，不能使用应弃去试剂。 (2) 测定少数样品可采用双试剂方式 (见2)，但应分别加入试剂R1，然后分别加入试剂R2。 测试前应使反应管内的测量工作液升温到室温。不同反应管之间不可避免地存在加样间隔而使实际反 应时间有所不同，按照推荐的方法及顺序加样能最大限度减小这种测量误差。 1. 参照以下，依次加入待测样品或标准品。由于线性关系甚佳，标准管设置并需很多:初次测定可 分别取2、4、8 μl标准品与200 μl工作液混合，测定后获得标准曲线;以后的测定可只设置标准品单 管或双管即可。 2. 反应:于20-25 ºC室温反应10-30分钟达到平衡并保持稳定，也可37 ºC保温10分钟。此方法对反应 时间要求不很严格，但样品管数多时为保证各管达到平衡可延长反应至40分钟以上。 注意:本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途 技术咨询电话:400-607-9999 3. 测定工作波长500nm (480~550 nm)，光径1cm，测定测各管吸光度值(OD值)。 4. 计算:葡萄糖浓度(mmol/L) = 标准品浓度 × (测定管吸光度-空白管吸光度) / (标准管吸光度-空白管吸 光度)。不同单位之间的换算公式:1 mmol/L = mg/dL x 0.0556;1 mmol/L × 18 = 1 mg/dL。 以下表格举例列出几种不同的测定和加样方式: 表1. 单一试剂测定 (手工、半自动或全自动测定) 自动测试或手工微板测试，反应体积0.2ml 1 ml比色杯手工测试，反应体积1ml 空白管 标准管 测定管 加入物 空白管 标准管 测定管 加入物 2 μl 0 0 10 μl 0 0 蒸馏水 蒸馏水 0 2 μl 0 0 10 μl 0 标准液 标准液 0 0 2 μl 0 0 10 μl 标本 标本 200 μl 200 μl 200 μl 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 工作液 工作液 表2. 双试剂测定 (全自动、半自动或手工测定) 双试剂手工微板测定 双试剂全自动生化仪测定 加入物 空白管 标准管 测定管 加入物 空白管 标准管 测定管 2 μl 2 μl 蒸馏水 , , 蒸馏水 , , 2 μl 2 μl 标准液 , , 标准液 , , 2 μl 2 μl 标本 , , 标本 , , 160 μl 160 μl 160 μl 160 μl 160 μl 160 μl 试剂R1 试剂R1 40 μl 40 μl 40 μl 试剂R2 37 ºC保温1分钟，温度平衡 40 μl 40 μl 40 μl 试剂R2 注意事项: 1. 人空腹血清葡萄糖参考值3.89-6.11 mmol/L (70-110 mg/dl)，低血糖症临界水平2.7-3.89 mmol/L，高血 糖症临界水平6.11-7.22 mmol/L。上述数值仅供参考，各实验室应建立自己的参考值范围。 2. 方法学评价:葡萄糖浓度检测线性范围0.1~22.2 mmol/L (400 mg/dl)。样品中的葡萄糖浓度超过22.2 mmol/L时可将样品稀释1-2倍后测量。回收率94~105%，批内变异系数为0.7~2.0%，批间变异系数 为~2%，日间变异系数2~3%。准确度与精密度达到临床检测要求。 3. 不能使用用户自己简单配制的葡萄糖标准溶液，否则测定结果不准。 4. 不能直接测定尿液葡萄糖含量。尿液中尿酸浓度比较高，会消耗葡萄糖氧化酶反应中产生的过氧化氢， 降低呈色反应，从而引起负误差使结果偏低。 5. 还原性物质如尿酸、抗坏血酸、胆红质和谷胱甘肽等，可竞争消耗反应产生的过氧化氢，使测定结果 偏低。含有强还原剂如二硫苏糖醇DTT、巯基乙醇等的也样本不使用本法。本法反应终体系中可 容忍的干扰物质最高浓度:溶血标本血红蛋白10 g/L，黄疽标本胆红素340 μmol/L，氟化钠3 g/L。尿 素46.7 mmol/L (280 mg/dl)，尿酸2.95 mmol/L (50 mg/dl)，肌酐4.42 mmol/L (50 mg/dl)，半胱氨酸50 mg/dl，甘油三酯500 mg/dl。 注意:本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途 技术咨询电话:400-607-9999 6. 可采用血清或肝素抗凝血浆，使用血浆测定血糖浓度可能更接近真实浓度。相比之下，用血清标本测 得的葡萄糖浓度偏低，且随着样品放置时间延长而明显下降。新鲜血液2000g离心10分钟得到血浆。 7. 《全国临床检验操作规程》指明草酸钾-氟化钠为测定血浆葡萄糖含量的血液抗凝方法:每5ml血液 可加0.2 ml 6%草酸钾-4%氟化钠抗凝剂。草酸钾-氟化钠抗凝剂的优点是兼具抑制糖酵解和分解作用， 测得的葡萄糖浓度更接近真实;缺点是可能存在干扰而不适用于全套生化检查。枸椽酸钠抗凝剂易引 起溶血，也明显干拢许多临床生化检查项目。尚未有既抑制葡萄糖体外分解，又适于其他全部生化检 查的抗凝剂。如必须用同一份标本做全套生化检测，可采用肝素钠抗凝剂。 8. 采血后血液样品尽快在30分钟内完成测定。血清或血浆标本仍含大量血细胞，室温条件下糖酵解旺 盛可消耗相当数量的葡萄糖，从而使测量值降低。血清或血浆标本室温放置1小时后葡萄糖含量开始 降低，3小时后明显下降。然而如果4 ºC保存分离的血浆或血清，则葡萄糖稳定性明显增加。以草酸 钾-氟化钠抗凝剂(可抑制葡萄糖酵解)抗凝血浆或血清可4 ºC保存2天，葡萄糖测定浓度不会明显降低。 9. 培养基上清应2000g离心10分钟，取去除细胞的上清测定。 10. 本试剂盒仅供实验室使用。 参考文献: 1. Trinder, P. (1969). Annals of Clin. Biochem. 6: 24 – 27. 2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145 注意:本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途