【doc】 月见草油对培养心肌细胞肥大的抑制作用

【doc】 月见草油对培养心肌细胞肥大的抑制作用 月见草油对培养心肌细胞肥大的抑制作用 第27卷5期 20O5年10月 宁夏医学院 JournalofNingxiaMedicalcollie?361? 文章编号:1005一S4~(200s)05—0361—02 月见草油对培养心肌细胞肥大的抑制作用 ? 论着? 温静,杨建军,张宁,李建宁 (1.宁夏医学科学研究所,银川750004;2.宁夏医学院公共卫生学院,银川750004; 3.宁夏医学院基础学院,银川750004) 摘要:目的探讨宁夏产月见草油对体外培养大鼠心肌细胞肥大的抑制作用.方法将培养的sD大鼠乳鼠 的心肌细胞随机分为三组:空白对照组,胰岛素样生长因子一I(IGF—I)组和IGF—I+月见草油组.选择最佳 剂量进行实验,观察各组心肌细胞存活率,形态,细胞DNA,RNA含量及细胞面积变化,并观察超微结构的改 变.结朵实验各组细胞死亡百分率均<5%;月见草油可使由IGF—I 致肥大心肌细胞的DNA,RNA含量减 低,细胞面积缩小(均P<0.05);超微结构显示月见草油可使由IGF—I致肥大心肌细胞肌丝的增粗减弱.结 论月见草油对IGF—I致体外培养的心肌细胞肥大有抑制作用. 关键词:月见草油;心肌细胞肥大;胰岛素样生长因子一I 中图分类号:R364.31文献标识码:A 月见草油的降血脂等功能已公认,且广泛用于医疗保 健中…,对心肌细胞的肥大有否抑制作用,尚未见报道.选 择宁夏产月见草油用于本实验研究中,旨在对其开发利用 提供实验室依据. 1材料和方法 1.1材料 1.1.1培养细胞:SD大鼠乳鼠(3—7d),由宁夏医学院实验 动物中心提供,取其心肌细胞进行实验. 1.1.2培养基:10%新生牛血清+9o%DMEM. 1.1.3消化液:0.1%胶原酶一?,滤菌备用. 1.1.4药品和主要试剂:月见草油由宁夏志诚食品有限公 司提供;胰岛素样生长因子一I(IGF—I);D—Hanks液, Camoy固定液,戊二醛,锇酸. 1.1.5主要仪器和设备:co:培养箱,倒置显微镜,激光共 聚焦显微镜(USA—ACAS575UV,北京,中国中医研究院提 供). 1.2方法 1.2.1心肌细胞培养:取出生3,7d大鼠乳鼠若干,75%酒 精常规消毒,无菌打开胸腔,取出心脏,剪取心尖人D— Hanks液中冲洗,浸泡,3次后移人洁净无菌直径9cm平皿, 剪碎至糊状,置离心管中加适量胶原酶一?,37?消化,收 集细胞于培养瓶内,加入10%新生牛血清的DMEM培养液 中,5%co:,37~C,60—90min后倾上悬液于另一培养瓶内, 原瓶即分离出的成纤维细胞,移出之悬液多为心肌细胞,如 此3次后,即可得较纯的心肌细胞. 1.2.2分组:利用第二代心肌细胞分3组,即空白对照组, 收稿日期:2005—03—28 基金项目:宁夏医学院青年基金资助项目 作者简介:温静(1974一),女,辽宁人,研究实习员,学士,主要从事 细胞培养工作. IGF—I组,ICF—I+月见草油组. 1.2.3药品剂量选择:取上述细胞,计数分至24孔板内, 每孔lmL含1×105个细胞,每组3o孔,置5%coz,37?培 养24h.IGF—I剂量选择终浓度0.01,0.1,1.0,10,100rig/ mL,依细胞形态,死亡百分率,生长情况选择最佳实验用剂 量;又依照参照剂量,选择月见草油终浓度0.025~L/mL. 1.2.4心肌细胞光镜形态观察,死亡百分率测定:各组细 胞于贴瓶后,分别加入DMEM,IGF—I,IGF—I+月见草油, 24h后观其形态,并收集细胞以2:1胎盘蓝染色,计数死亡 细胞. 1.2.5心肌细胞DNA,RNA含量及细胞面积测定:取各组细 胞涂片,即人冷的Camoy固定液,0.01%AO染色,置激光共 聚焦显微镜下观察,测定各组细胞DNA,RNA含量并进行 比较,同时测定各组细胞面积进行比较. 1.2.6细胞超微结构观察:取各组细胞,人2%戊二醛固 定,0.1N二甲砷酸钠换洗3次,1%锇酸后固定,常规透射 电镜标本制作,超薄切片,置H一60O透射电镜下观察. 1.3统计学方法两样本间t检验. 2结果 2.1选择实验最佳药品剂量反复多次实验,最终选择适 宜剂量,IGF—I终浓度为10ng/mL,月见草油终浓度为 0.02.Sta/mL培养基. 2.2心肌细胞形态观察对照组细胞呈多边形,不规则 形,椭圆形,可见分裂相细胞;IGF—I组可见细胞体积增大, 细胞显密集;月见草油组细胞未见明显增大. 2.3细胞死亡百分率各组细胞死亡率均<5%,提示 IGF—I组及月见草油组对细胞不产生致死效应. 2.4心肌细胞DNA,RNA含量及细胞面积的荧光值测定 (1) . 362.宁夏医学院27卷 与对照组比较*P<0.05;与IGF一1组比较?P<0.05 实验结果显示IGF—I组细胞增大,DNA,RNA含量的 荧光值比对照组明显增高,均P<0.05,差异有统计学意 义;细胞面积的荧光值亦大于对照组,P<0.05,差异有统 计学意义.IGF—I+月见草油组细胞大小近于对照组, DNA,RNA含量的荧光值趋于对照组,较IGF—I组有明显 下降,均P<0.05,差异有统计学意义;细胞面积的荧光值 亦明显小于IGF—I组,P<0.05,差异有统计学意义.提示 图1对照组心肌细胞丝 不规则排列(×4OOOO) 月见草油可抑制IGF—I所致的心肌细胞肥大. 2.5超微结构改变对照组细胞表面光滑,少见微绒毛, 核椭圆,胞质内富含线粒体,可见肌丝不规则排列;IGF—I 组细胞体积增大,核增大,线粒体丰富,可见大量排列紊乱 且粗大的肌丝;IGF—I+月见草油组细胞未见明显增大,线 粒体多见,肌丝排列紊乱,但未见明显增粗(见图1—3). 图2IGF一1组心肌细胞排列紊乱, 粗大的肌线(×4OOOO) 3讨论 IGF—I是一类具有细胞分化和增殖功能并具有胰岛素 样代谢作用的多肽,属于细胞因子中多肽类生长因子与分 化因子的一种_2j,具有促进A11)生成同时抑制ATP降解的 作用3.IGF—I直接作用于肌纤维,可使肌纤维体积增大, 细胞表面积增大,刺激蛋白质合成_4.本实验利用体外培 养大鼠心肌细胞,选择IGF一1终浓度0.01,0.1,1.0,10, 100ng/mL,进行最佳浓度选择,结果提示10ng/mL组可明显 增粗,增长心肌细胞,细胞内DNA,RNA含量的荧光值明显 增高,肯定IGF—I10ng/mL致心肌细胞肥大,且细胞死亡百 分率<5%. 月见草油中的主要有效成份为Y一亚麻酸,系不饱和 脂肪酸,具有降血脂,延缓衰老等功能_lJ,对于IGF—I致心 肌细胞的肥大有否抑制作用,尚未见报道.本实验则利用 培养的心肌细胞,在IGF—I作用的同时加用月见草油,可 产生明显抑制细胞肥大的作用,使细胞内DNA,RNA含量 的荧光值明显低于IGF—I组(P<0.05),趋于对照组;细胞 面积的荧光值测定亦显示了趋于对照组,明显小于IGF—I 图3IGF一1+月见草油组心肌细胞 肌丝未见明显增粗(×4OO03) 组.超微结构显示月见草油可使细胞肥大致肌丝的增粗减 弱,趋于对照组细胞,提示月见草油可对IGF—I致培养心 肌细胞肥大有明显的抑制作用,其作用机理有待进一步探 究. 参考文献: [1]硕学裘.中国月见草油对抗癌,抗衰老,保健食疗的 研究[J].医药导报,1977,16(1):3. [2]彭葆坤,周宁.IGF—I临床应用探讨[J].天津 药.1996,24(8):506. [3]关庆柏,柳延春.IGF—I对ISP损伤大鼠心肌能量代 谢影响的研究[J].中国慢性病预防与控制,200O,8 (1):37. [4]FullerSJ,MynettJR,SugdenPH.StimulationofPALeSt proteinsynthesisbyinsulin—likegrowthfactors[J]. BiochemJ,1992,282:85—9o. (责任编辑:任义芳) (下转第365页) 5期陶虹,等.参附注射液预防心动过缓的实验观察?365? EffectsofShenfuInjecti0nAgainstBradycardia TA0Hong,HEYt.ZHoUYong.zhone (Dept.ofphysiology,NingxiaMedicalCollege,YiIlchuan75ooo4) Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofshenfuinjectiononbradycard ia.MethodsFourtyeight ratswereaveragelygroupedintotwoparts.Ineachpart,ratswererandomlydiv idedintothreegroups.Group1, 0.9%NS(Smg/kg)wasinjectedgroup2andgroup3.Shenfulnjection(5rag/kgandlOmg/)wasinjectedin— t0tailveintWOtimesfor5days.Partone:Bradycardicmodelsweresetup,? ithacetylcholineinrats.Electrocar— diogramwasrecordedbyBL一 420.ParttWO:ExceptforAchmjection,thethreesubgroupsweretreatedas sameasthepartonedid.MaleicDialdehyde(MDA),NitricOxide(NO),SuperoxideDismutase(SOD)con— tentsofserulTlweremeasuredrespectivelybybabituricAcid,NitrateReductase,XanthineOxidase.Results 11leheartratewasenhancedrapidlyandP—Rphasewasshortenedingroup2a nd3thanthoseingroup1after Achinjection(P<0.05orP<0.O1).11leP—RPhasewaslongerafterAch iniectionthanbeforeinthree groups.Inaddition,theMDA,NOcontentsofserulTlweredecreasedingroup2and3(P<0.05).ButtheSOD contentsofserurnwereincreasedingroup2and3(P<0.O1).ConclusionShenfuinjectionhasantagonistic effectsagaistbradycardia.11leeffectsmaybeduetothedecreaseofMDAandNOandtheincreaseofSOD. Keywords:shenfuinjection;bradycardia;acetylcholine;nitricoxide (上接第357页) Genel=icStudyonTongue’sMovementTypes ofttuiandHanNationalil=iesInNingxia DGJ/e.PEGLiang.I0Hai.yah.etal (Dept.ofMedicalGeneticsandCellBi0l0gY,NingxiaMedicalCollege,Yinchuarl75ooo4) Abstract:ObjectiveToinvestigatetongue’SmovementtypesbetweenHansandHtliSinNingxiaandtoanalyze thefeaturesofthem.MethodsArandomizedandstratifiedsamplingstudywasconductedand4typesoftongue’ smovement(rolling,twisting,foldingandclover—leaftongues)wereinvesti gatedamong808Hans(412male and396female)and4(I2HtliS(312maleand180female)inNingxia.ResultsHansshowedtherolling,twist— ing,foldingandclover—leaftongueswiththefrequenciesof74.75%,35.27%,26.1l%,and2.35%;respec— tively.,)vhileHtliSwiththefrequenciesof81.30%,26.02%,28.25%and4.47%.HuiSshowedahigherfre— quenciesonrolling,foldingandclover—leaftongues,butalowertwistington guesthanHans.Hanshadsignificant differencefromH 【liSinthefrequencyofrolling.clover—leaftongueandhadimportantdifferen cefromHuiSinthe frequencyoftwisting.ConclusionThereisnosignificantdifferenceintongue’Smovementtypesinsexbetween HartandHl】i.buttherealecorrelationsin4typesoftongue’Smoverr~nt. Keywords:rollingtongue;twistingtongue;foldingtongue;clover—leafton gue;hartnationality; huinationality;Ningxia (上接第362页) TheInhibil=iveEffectsofEveningPri】【IlroseOilonCultured Cardiomy~ytesHypertrophy WENJing,YANGJian-jun,ZttANGNing,etal (1.MedicalScienceInstitutionofNingxia,Yinchuan750004; 2.PublichealthSchoolofNingxiaMedicalCollege,Yinchuan750004) Abstract:ObjectiveTostudytheinhibitiveeffectofeveningprimroseoil(EPo)onculturedcardiomyocytes hypertrophyinrats.MethylsTheculturedcellsweredividedintothreegroupsascontro1.IGF—Igroupand IGF—IcoupledwithEveningprimroseOilgroup.Theindexesincludingcellsurvivalrate,cellshape,cellDNA, cellRNAconcentration.cellalaandcellultrastructurewereobservedundertheoptimiz~doses.ResultsThe mortalityratewaslowerthan5%inexperimentalgroups.ThecontentsofDNAandRNAinhypertrophiccells causedbyIGF—IinF20groupswerelowerthanothertwogroups,SOascellarea(P<0.O5).Thesignificant weakeneffectsonmyofilamentaugmentationbadbeenobservedinulWastuctureinEPogrouPs.Conclusion TheEveningprimroseoilhastheeffectofinhibitingthehypertrophycausedbyIGF—Iinculturedmyocardial cellsinrats. Keywords:eveningprimroseoil:myocardialcellhypertrophy;IGF—I