黄精丸对大鼠大脑局灶性脑缺血损伤保护作用研究

黄精丸对大鼠大脑局灶性脑缺血损伤保护作用研究 黄精丸对大鼠大脑局灶性脑缺血损伤保护 作用研究 第33卷第l期Vo1.33No.1 2012年1月Jan.2012 井冈山大学学报(自然科学版) JournalofJinggangshanUniversity(NaturalScience) 文章编号:1674?8085(2012)01—0088—03 黄精丸对大鼠大脑局灶性脑缺血损伤保护作用研究 周志军,肖移生2 (1.吉安市中心血站.江西,吉安343000;2江西中医学院基础医学院,江西,南昌330004) 摘要:目的观察黄精丸对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤的影响.大鼠提前30d灌胃黄精丸(相当生 药量2—10g,kg)后,采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察大鼠行为学变化,脑组织超氧化物歧化酶(SOD), 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.Px),脂质过氧化物丙_二醛(MDA),白细胞介素(1L)-l13及肿瘤坏死因子(TNF)-Q水 平的变化.结果与缺血再灌注损伤组比较,黄精丸组脑功能受损程度明显改善,脑组织SOD与GSH.Px水平 显着升高,MDA,IL.113,TNF.a水平显着下降且呈剂量依赖关系.结论黄精丸对大鼠大脑缺血再灌注诱导的 氧自由基,脂质过氧化,各种炎性因子损伤具有良好的保护作用. 关键词:黄精丸;缺血再灌注损伤:神经保护 中图分类号:R285.5文献标识码:ADOI:10.39690.issn.1674—8085.2012.01.022 THEPRoTECTIVEEFFECTSoFHUANGJINGWANoNCEREBRAL INJ1JRYAFTERFoCALISCHEMICREPERFUSIoNINRATS ZHOUZhi-jun,XIAOYi.sheng2 (1.JiangXiJi’anBloodCenter,Ji’all,Jiangxi343000,China; 2.TheBasicMedicineCollege,JiangxiUniversityofTCM,Nanchang,Jiangxi330004,China) AbstractObjective:TostudytheprotectiveeffectofHuangJingWanoncerebralinjuryafterfocalischemi c reperfusioninrats.Methods:TheratsweretreatedwithHuangJingWan—liquidatdose2一l0g他byintragastric administration30daysbeforetheanimalmodelwasestablishedbymiddlecerebralarteryocclusion(MC AO),the changesoftheneurologicaldeficitsscores,theactivitiesofSOD,GSH.PxandthecontentofMDA,IL一1p,TNF一? wereinvestigated.Results:Comparedwiththecontro1.theneurologicaldeficitsscoresofcerebralocclu sion indexwassignificantlyimprovedinHuangJingWantreatment,SODandGSH-Pxlevelsweresignifican tly enhanced,MDA,IL—lp,TNF—levelssignificantlydecreasedanddependedonthedosage.Conclusio n:Huang JingWanhastheneuroprotectiveeffectagainstcerebralischemia—reperfusioninratsviaitsantioxidant activity. Keywords:HuangJingwan;cerebralfocalischemicreperfusion;neuroprotectiveeffect 黄精丸为《和剂局方》所创建,其药物组成精 练,包括黄精,当归两味,黄酒浸泡两药,蜜制为 丸.全方有补益气血,延年益寿,美容防皱之功效【JJ, 但其对大脑的保护作用研究甚少.本研究采用大鼠 火脑中动脉阻断(MCAO)模型,探讨了黄精丸抗大 脑局灶性脑缺血再灌注炎性损伤作用. l与方法 1.1试验药物 黄精丸为《和剂局方》所创建,由江西中医学 院基础医学院研制,组方为黄精,当归(成份比为 2:1).黄精丸制法:黄酒充分浸泡黄精,当归,蜜 制为细丸. 药液制备:取黄精丸充分碾碎成粉未,加水煎 煮两次,每次药渣均榨挤,取汁四层纱布过滤,合 并两次药液,浓缩至所需浓度(1g/mL). 收稿日期:2011—10-21:修改日期:2012-01—02 作者简介:周志军(1963一),女,江西吉水人,主管护师,主要从事采供血相关研究 (E—mail:601912160@qqcom); 肖移~k(1976一),男,江西吉安人,讲师,硕士,主要从事中药抗衰老,抗肿瘤研究 (E—mail:xys760928@sin.corn) 井冈山大学学报(自然科学版) 1.2实验动物及分组 雄性SD大鼠48只,(体重2404-10g,江西中 医学院实验动物中心提供,清洁级,合格),每批 随机分成假手术对照组,缺血再灌注损伤组,阳性 药物(六味地黄丸,5g/kg灌胃)组,黄精丸低, 中,高剂量组(即灌黄精丸浓缩液,相当生药量2g /kg,5g/kg,10g/kg组),共6组,每组8只动物. 1.3试剂 六味地黄丸为安徽华佗国药厂产品,四氮唑 (TTC)Sigma公司产品,超氧化物歧化酶(SOD), 丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH.Px) 生化检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所, 白细胞介素(IL).1p,肿瘤坏死因子(TNF).0【放免试 剂盒购自北京福瑞生物公司. 1.4实验仪器 RF.5000型荧光分光光度计(日本岛津),752分 光光度计(上海医用仪器厂产品),DL.6000B型 低速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂),DY89.1 型电动玻璃匀浆器(宁波新芝科器研究所),SN.6930 液体闪烁计数仪(上海核所1. 1.5方法 1.5.1大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型建立 采用大脑中动脉内线栓阻断法(MCAO)【2J建 立大鼠右侧大脑中动脉脑缺血/再灌注损伤模型,大 鼠用10%水合氯醛麻醉(300mg/kg,ip),分离出右 侧颈内动脉后向其插入尼龙线栓塞大脑中动脉,缺 血2h后拔出尼龙线,使血流再通,再灌注24h后进 行检测.造模成功:动物清醒后爬行时出现向 左转圈(追尾现象)或提尾时出现左前肢内收屈 曲.假手术对照组仅进行麻醉和血管分离术,不导 入栓线,其余各组均进行右侧大脑中动脉脑缺 再灌注损伤处理. 给药方法:试验药物组大鼠提前30罐胃黄精细 丸粉未,相当生药量分别为2g/kg,5g/kg,10g/kg, 每天1次,连续30d,30d后行大脑中动脉脑缺 再灌注损伤处理;假手术对照组,缺血再灌注损伤 组于同时点灌胃生理盐水1mL;六味地黄丸组于同 时点灌胃六味地黄丸5g/kg,每天1次,连续30d. 1.5.2脑组织SOD和MDA,GSH—PX测定 再灌注末将大鼠断头处死,迅速取出大脑,取 右大脑皮层,制作10~/6o脑匀浆.按试剂盒说明书比 色法测定脑组织MDA,SOD,GSH.Px含量. 1.5.3脑组织IL一1B,TNF一0【含量测定 再灌注末将大鼠断头处死,迅速取出大脑,取 右大脑皮层,制作10~/5o脑匀浆.按试剂盒说明书 方法采用液相平衡竞争放射免疫分析法(RIA)检测 脑组织中IL一113,TNF.0【含量. 1.5.4统计学处理 实验结果用?示,组间比较采用两样本t 检验,P<0.05差异为有统计学意义. 2结果 2.1黄精丸对脑MDA含量和SOD,GSH.Px活力 的影响 黄精丸各组可以增加大鼠局灶性脑缺血2h 再灌注24h后的脑组织的SOD,GSH.Px活性 (P<0.05,P<0.01),减少其MDA含量(P<O.05, P<O.01)且呈剂量依赖关系(结果见表1). 表1黄精丸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑 MDA含量和SOD,GSH-Px活力的影响(?,=8) Table1ThecontentofMDA,SODandGSH.Pxactivityin theratbrainswhichpretreatedbyHuangJingWanoncerebral injuryafterfocalischemicreperfusion 与缺血再灌注组比较,P<0.05,”P<0.01. 2.2黄精丸对脑IL-ll3,TNF一伐含量的影响 黄精丸中,高剂量可以降低大鼠局灶性脑缺 血2h再灌注24h后的脑组织的IL.113,TNF.0【含量 <0.05,P<O.01),但低剂量组无统计学差异(结果 见表2). 表2黄精丸预处理对大鼠局灶性脑缺血,{耳灌注损伤后脑 IL一113,TNF一0【含量的影响(?S,=8) Table2ThecontentoflL-113andTNF-aintheratbrains whichpretreatedbyHuangJingWanoncerebralinjuryafter focalischemicreoerfusion 与缺血再灌注组比较,P<0.05,?’P<O.01. 井冈山大学学报(自然科学版) 3讨论 脑缺血是一种严重威胁人类健康的常见脑血 管疾病,其发病率和复发率均高【3J.脑缺血往往会 导致脑水肿,颅内压升高,使得脑血管供血受阻, 引起脑部微循环障碍,而脑缺血超过一定时限的恢 复血流反而会加重病情,即发生再灌注损伤【4].另 一 方面,在大脑缺血再灌注损伤过程中,脑内氧自 由基,脂质过氧化产物等有毒代谢产物增多,对脑 组织具有明显的损伤作用【2】,能引起一系列的炎症 因子表达,使炎性细胞浸润,进而加重神经元的损 伤【5】.所以,治疗脑缺血应改善受阻的大脑微循环, 与此同时还应减少脑内氧自由基,脂质过氧化产 物,炎性细胞因子等有毒代谢产物的损伤.故清除 自由基,炎性细胞因子,减轻氧应激损伤是临床脑 血管疾病治疗和脑缺血性实验研究中重要的措施 之一[6】o 黄精丸为《太平惠民和剂局方》所创建,全方 有补益气血,延年益寿,美容防皱之功效.其中黄 精具有补气养阴,健脾润肺,延年驻颜之功:当 归能补血和血,调经止痛,润肠通便,祛斑增白, 润泽肌肤L1J.以往对黄精丸主要是从抗衰老方面进 行实验研究,黄精丸有升高衰老小鼠皮肤及血清中 SOD,降低脂褐素,同时提高老化模型鼠对自由基 防护能力,使小鼠皮肤胶原纤维增加,排列致密, 对皮肤损伤具有保护,减轻或修复作用.从而证实 黄精丸具有明显的抗氧化,抗衰老的作用[],但其 对大脑的保护作用研究甚少. 通过本实验发现黄精丸能使大鼠大脑缺血再灌注 后脑功能受损程度明显改善,脑组织中SOD与GSH—Px 水平显着升高,其中黄精丸低剂量组(2g/kg)就与 阳性对照组有统计学差异(Jp<0.05),中剂量组 (5g/kg)有显着性统计学差异(P<0.01);同时 使脑组织中炎症因子MDA,IL一1B,TNF—水平显着 下降,其中黄精丸低剂量组无统计学差异,中剂量 组有统计学差异(P<0.05),高剂量组(10g/kg) 有显着性统计学差异(尸<0.01).从本结果可以反 映出SOD,GSH.Px两种酶对黄精丸的药理作用敏 感,低剂量就有变化,炎症因子MDA,IL一113,TNF—a 敏感性稍差,要中剂量才有改变.这可能是体内酶 与细胞因子对药物反应差异性导致. 本研究从另一角度证实黄精丸具有明显的清 除自由基及炎性细胞因子,减轻氧应激损伤,抗氧 化等功能,对脑组织神经细胞具有良好的保护作 用.黄精丸为一经典养生保健药方,本课题研究黄 精丸的系列药用功效,主要为开发并扩大其药用价 值提供实验依据,但其详细的神经保护机理的待进 一 步研究. 参考文献: 【1】太平惠民和剂局.太平惠民和剂局方vI】.北京:人民卫 生出版社,2007:298.301. 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