复方参芪颗粒对小鼠免疫功能及应激反应的影响

复方参芪颗粒对小鼠免疫功能及应激反应的影响 复方参芪颗粒对小鼠免疫功能及应激反应 的影响 中国医院药学杂志2(}08年第28卷第7期 ChinHospPharmJ,2008Apr,VoI28,No.{17?517? 胞凋亡的关键蛋白酶,凋亡的最后实施是通过 caspase一3的激活而实现的,其达表明细胞必定死 亡.Davoli等在大鼠局灶性脑缺血中研究显示,缺 血神经元的caspase-3表达增加,活性增高_7j,在 caspase一3基因缺失小鼠缺血2h再灌注48h后,皮 质梗塞面积缩小55,Tunel阳性细胞数减少 36一.caspase一3抑制剂可有效地减少缺血神经 元凋亡的数量并改善神经症状].提示caspase~3 的表达和激活参与了缺血性脑损伤,在缺血神经元 凋亡中起重要作用. 凋亡诱导因子(AIF)是近年来发现的一种凋亡 效应分子,正常情况下,AIF是一种定位于细胞线粒 体膜间隙中的黄素蛋白,当有凋亡信号刺激时AIF 分子从线粒体释放到细胞浆,再通过其核定位信号 转位到细胞核中,直接引起染色体凝集和DNA呈 大片段(,5okb)断裂,导致细胞凋亡_^"..Ferrer 等]运用SD大鼠脑缺血再灌注模型研究发现缺血 1h再灌注4h脑缺血侧半暗带区,可见明显的AIF 阳性细胞表达,而缺血对侧仅见较少量的AIF阳性 细胞,这提示AIF参与了缺血后神经细胞损伤过 程,AIF是导致神经细胞凋亡的一个重要因素. 本研究发现,大鼠缺血9()min再灌注后 caspase一3蛋白和AIF的表达明显增加,且其时空分 布规律与神经细胞凋亡的变化基本一致,说明缺血 再灌注可以诱导caspase一3蛋白和AIF的表达增 加,进而引起神经细胞的凋亡.给予复方天麻蜜环 菌制剂十预后,治疗组脑缺血90min再灌注24,72 h与模型组和生理盐水组相同时间点相比其表达均 明显降低,提示复方天麻蜜环菌制剂可降低 caspase一3蛋白和AIF的表达.研究表明,脑缺血再 灌注损伤可引起神经细胞过量的谷氨酸受体激活, 细胞内钙超载,活性氧生成增加,线粒体和DNA损 伤,从而激活Caspase级联反应,促使AIF从线粒 体释放,因而促进细胞凋亡.通过以上实验我们证 明了复方天麻蜜环菌制剂具有抑制神经细胞凋亡的 作用,进一步阐明了复方天麻蜜环菌制剂脑保护作 用的分子机制,为其临床应用提供了理论依据. 参考文献: [1]洪震,卯晓岚.食用药用菌实验技术及发酵生产EM].北京:中 国农业科技出版社,1992:183—185. E2]许艳,高佩畸,梁庆成,等.黄芪多糖对脑血栓的疗效实验研究 _J].中国血液流变学杂志,1999,9(3):133—136. r3]LongaEZ,WeinsteinPR,CansonS,ela1.Reversiblemiddle cerebralarteryocclusionwithoutcraniectomyinratsLJ. Stroke,1989,20(1):8491. [4]张红,王粤,龚微微,等.脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和细胞 色素c基因表达及肌苷的干预作用[J].中华老年医学杂志, 2004,23(9):652—655. E5]ZhanRZ,wuC,FujiharaH,ela1.Bothca印ase-dependentand caspase—independentpathwaysmaybeinvolvedinhippocampaI CA1neuronaldeathbecauseoflossofcytochromeCfrommi— tochondriainaratforebrainischemiamodel[J].JCerebBlood FlowMetab.20{}1,21(5):529540. [6]FerrerI,FrigulsB,DalfoE,ela1.Caspase—dependentand caspaseindependentsignallingofapoptosisinthepenumbra followingmiddlecerebralarteryocclusionintheadultrat[J]. NeuropatholApplNeurobiol,2003,29(5):472—481. [71)avoliMA,FourtounisJ,TamJ,el?1.ImmunohistochemicaI andbiochemicalassessmentofcaspase-3activationandDNA fragmentationfollowingtransientfocalischemiaintherat[J]. Neuroscience.2()()2,115(1):125—136. [831.eDA,wuYQ,HuangZH,ela1.Caspaseactivationandneu— roprotectionincaspase-3deficientmiceafterinvivocerebralis— chemiaandinvitrooxygenglucosedeprivation[J].ProcNatl AcadSciUSA,2002,99(23):1518815193. [9]ChenY,DeshmukhM,CostaA,ela1.Caspaseinhibitoraf— fordsneuroprotectionwithdelayedadministrationinaratmod— eIofneonatalhypoxic~ischemicbraininjury[J].JClinInvest, 1998,101(9):1992—1999. L1o1JozaN,SusinSA,DaugasE,etaI.Essentialroleofthemito— chondriaIapoptosis—inducingfactorinprogrammedceildeath L『J.Nature,2001,410(6828):549—554. El1]CandeC,CohenI,DaugasE,ela1.Apoptosis_inducingfactor (AIF):anovelcaspase-independentdeatheffectorreleased frommitochondria[J].Biochimie,2()02,84(23):215-222. [收稿日期]2007—0910 复方参芪颗粒对小鼠免疫功能及应激反应的影响 王春艳,杨建春,于桂兰,杜国辉,韩淑英(1.唐山市妇幼保健院药剂科,河北唐山 0630{}{】;2. @-ItNNN~N 药理教研室,河北唐山【)63【)【)【)) [摘要]目的:探讨复方参芪颗粒提高免疫功能及抗应激能力的药理作用.:复方 参芪颗粒高,中,低剂量组分别连续给 健康昆明种小鼠灌胃,同时腹腔注射环磷酰胺造成免疫抑制模型小鼠,并设阳性对 照组及正常对照组.小鼠于末次给药后30 min处理,检查免疫指标及抗应激能力.结果:复方参芪颗粒对正常小鼠和免疫抑制 小鼠免疫功能有一定的增强作用.对正 常小K@g&4re-~]小鼠耐高温,耐低温和抗疲劳等抗应激能力也有一定的增 强作用.结论:复方参芪颗粒具有良好的提高免 [作者简介]王春艳,女,学士,主管药师,电话:0315— 3726722,E-maiI:cyw211@sohu.co ? 与18?主垦垦垫兰壹2008年第28卷第7期ChinHospPharmJ,2008Apr,Vol28,No.07 疫功能和抗应激能力的作用. [关键词]复方参芪颗粒;免疫功能;抗应激能力;药理作用 [中图分类号]R961[文献标识码]A[文章编号]1001—5213(2008)07—0517—04 Effectof伽igranulesOilimmunologie~functionsandanti-stresscapabilityinmice WANGChun-yan,YANGJian-chun',YUGui—lan',DUGuo-hui',HANShu— ying2(1.TheWornenandChil— dren'QHospitalofTangshan,HebeiTangshan063000,China;2.DepartmentofPharmacology,NorthChinaCoa1Medica1Uni— versity,HebeiTangshan063000,China) A礤RACT:0B硅? 1lvETostudythepharmacologicalactionofimmuneenhancementandanti-stresscapabilityofcompound Shenqigranules.METHODSThestudywascarriedoutthroughtheobservationofnormalmiceandimmunosuppressedmodel inmice.CompoundShenqigranuleswerepouredconsecutivelyintothestomachofhealthyKunmingmicewithhigh,mediumand lowdose.ImmunosuppressedmodelinmicewassetupbyintraperitonealinjectingofCTX.Atthesametime,controlgroupand normalgroupweresetup.Theimmunitytargetsandan@stresscapabilitywereobserved30m inutesafteradministration.RE- STILTSCompoundShenqigranulescouldimprovetheimmunologicalfunctionsofnormala ndimmunosuppressedmice,could enhancetheantbstresscapabilityofanti—hightemperature,anti,lowtemperatureandanti-fatiguealso.CONCLUSIONCom— poundShenqiGranuleshavegoodeffectsofimmuneenhancementandanti-stresscapability. KEYWORld:compoundShenqigranules;immunologicalfunctions;anti—stresscapability;pharmacologicalactivities 复方参芪颗粒(SQ)由黄芪,防风,太子参,炒麦 芽等组成,具有益气健脾,固表止汗的功效.为研究 其提高免疫功能及应激反应能力的药理作用,我们 将其与玉屏风颗粒进行了对比实验研究. 1材料 SQ(唐山市妇幼保健院制剂室提供,批号 040325);玉屏风颗粒(广东环球制药有限公司生产, 批号040522);环磷酰胺(CTX,上海华联制药有限 公司生产,批号030407);四甲基偶氮唑蓝(MTT), 二甲基亚砜(DMSO),刀豆蛋白A(ConA),RP— MI1640培养液均为Sigma公司生产;青霉素(华北 制药股份有限公司,批号9910204);链霉素(华北制 药股份有限公司,批号9904102);昆明种小白鼠,旱 舍兼有,体质量(22?4)g(河南省实验动物中心提 供,合格证号:医动字第410115号). 2方法与结果 2.1动物分组与给药健康昆明种小鼠,旱舍兼 有,分笼饲养.适应饲养一周后,按体质量随机分 组,各组间小鼠平均体质量无统计学差异,每组10 只,旱舍各半:(1)SQ高剂量组,每天20mI?kg 灌胃(给药量为2.24g?kg,,相当于人临床用量的 10倍);(2)SQ中剂量组,每天2【)mL?kg灌胃(给 药量为1.12g?kg,,相当于人临床用量的5倍); (3)SQ低剂量组,每天20mL?灌胃(给药量为 0.56g?kg一,相当于人临床用量的2.5倍);(4)阳性 对照药玉屏风颗粒组,每天20mL?kg灌胃(给药 量为I.27g?kg一,相当于人临床用量的10倍);(5) 正常对照组,每天灌以纯化水20mL?kg,.按规定 剂量,每天上午给药一次,连续7d. 环磷酰胺造成免疫抑制模型:小鼠50只,分组 及给药同上.同时,各组小鼠均腹腔注射环磷酰胺 0.15g?kg..,qd,连续3d,第4天停止注射环磷酰 胺,继续给上述各药至第7天. 2.2SQ对小鼠免疫功能的影响 2.2.1SQ对正常及免疫抑制小鼠胸腺,脾脏指数 的影响小鼠停药次日脱臼处死,称体质量和胸腺, 脾脏质量,计算胸腺,脾脏指数(mg?g),胸腺(脾 脏)指数=胸腺(脾脏)质量(mg)/体质量(g).结果 见图1.SQ对正常小鼠及免疫抑制小鼠胸腺指数, 脾脏指数均有增加作用,但与正常组比较,只有免疫 抑制小鼠的高剂量组差异有显着性(P<0.05). 蘩 琵 踮 图1对正常及免疫抑制小鼠胸腺,脾脏指数的影响 一 正常小鼠胸腺指数;一正常鼠脾脏指数;一免疫抑制小鼠胸腺指数; 免疫抑制小鼠脾脏指数 Fig1EffectofcompoundShenqigranulesonthymusandspleenin- dexofnormalandimmunosuppressedmice —thymusindexofnormalmice;一spleenindexofnormalmice;一 thymusindexofirnmunosuppressedmice;~spleenindexofimmuno— suppressedmice ???_巨耙 ????I-_鹾韶医翻 ???__.鼎_喜蘸孽?聊. ?——?l 目团豳捌熏d】? ?—?臣?——臣 讶 ——————啪睡鞠.軎熏惺 中国医院药学杂志2008年第28卷第7期ChinHospPharmJ,200垒pr!vO!!!:?519? 2.2.2SO对小鼠淋巴细胞转化功能的影响采用 ^仉法.小鼠于末次给药后30min,眼眶放血,脱颈 椎处死,无菌操作,取出脾脏,置于含有双抗(各含青, 链霉素200U?mL)的RPMI1640细菌培养液中,研 磨,过滤,制成单个脾细胞悬液,离心.用含15小 牛血清1640细胞培养液调至所需浓度5×10.个? mL,加入培养板内,加有丝分裂原ConA,在37?, 5二氧化碳培养箱中培养72h,终止培养前4h加 入唧2OL.终止培养时,加入DMSO50/,L,15 min后,用酶标仪在570nnl处测定光密度(oD)值. 结果见表1,表中结果显示SO具有剂量依赖性的增 加淋巴细胞转化功能,高剂量组与正常组比较作用更 明显(P<O.05),并且正常小鼠的淋巴细胞转化功能 较阳性对照组有明显升高(P<0.05). 表1SQ对小鼠淋巴细胞转化功能的影响(?S,=10) TabIEffectofcompoundShenqigranulesonlymphocyte transformationofmice(i?S.=10) 注:与正常组比较,P<(】.05;与阳性对照药比较,P<0.05 2.2.3SQ对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响采 用碳廓清法.小鼠于末次给药后30min,小鼠尾静 脉注射3O稀释的印度墨汁0.1mL/10g,注射后 分别在2,8min于眼眶取血2()L,加入4碳酸氢 钠溶液中,摇匀,在650nm波长处测定光密度 (oD).计算吞噬指数K,K=(1ogOD一logOD2)/ (,一t).结果见表2对正常及免疫功能低下小鼠 的吞噬功能有显着的增加作用,与阳性对照组相近. 表2SQ对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(?S,=10) Tab2EffectofcompoundShenqigranulesonphagocytosis ofmacrophageofmice(x?S.=10) 注:与正常组比较,P<0.01,P<().05 2.3SQ对小鼠应激能力的影响 2.3.1SQ对小鼠游泳时间的影响各组小鼠于 末次给药后30min,做游泳实验.将各小鼠放人玻 璃水槽,水深25cm,水温(25,26?),每鼠尾部负 重3g,存活时间,结果见表3.SQ对正常小鼠 游泳时间均有延长作用,高剂量作用更明显,具有统 计学差异.对免疫抑制小鼠游泳时间有一定的延长 作用,但无统计学差异. 表3SQ对小鼠游泳时间的影响(?ST=1O) Tab3EffectofcompoundShenqigranulesonswimming timeofmice(~?S.=10) 组别游泳时间/min 正常小鼠免疫抑制小鼠 注:与正常组比较,P<0.05,P<O.01;与阳性对照药比较,P< 0.05 2.3.2SQ对小鼠缺氧存活时间的影响采用耐 缺氧实验.小鼠于末次给药后30min,单个放人装 有碱石灰(30g)的250mL广口瓶中,瓶盖周围涂以 凡士林,记录每只小鼠存活时间.结果表明:SQ及 阳性对照药玉屏风颗粒对正常和免疫功能低下小鼠 耐缺氧存活时间没有明显的延长作用. 2.3.3SQ对小鼠高温及低温存活时间的影响 小鼠于末次给药后30min,将小鼠分别装入鼠笼, 分别放人恒温箱(65?1)?及冰箱(一25?1)?内, 记录每只小鼠存活时间.结果表明:SQ能明显延 长正常小鼠高温存活时间,高,中,低剂量组与正常 对照组比较,差异均有显着性,其中高剂量组与阳性 药对照组比较有显着性差异,对免疫功能低下小鼠 存活时间有一定的延长作用,但无显着性差异.复 方参芪颗粒明显延长正常小鼠低温存活时间,高, 中,低剂量组与正常对照组比较,差异均有显着性, 高剂量组对免疫功能低下小鼠存活时间也有明显的 延长作用. 2.4统计学方法实验中所有数据均采用instat 软件处理,结果以?S表示. 3讨论 SQ由黄芪,防风,太子参,炒麦芽等组成.文 献报道:黄芪多糖对小鼠特别是免疫抑制小鼠免疫 功能有增强作用[4],能够增强小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬能力_5;防风连续给药7d后,可明显降低腹腔毛 细血管通透性,连续给药4d,可提高腹腔巨噬细胞 吞噬功能,并能增加脾脏指数[63;太子参能明显对抗 环磷酰胺所致胸腺指数和脾指数的降低,并能激活 小鼠网状内皮系统的吞噬功能_7]. 综上所述,SQ正常小鼠和免疫抑制小鼠免疫 功能有一定的增强作用.对正常小鼠和免疫抑制小 鼠耐高温,耐低温和抗疲劳等应激反应能力也有一 定的增强作用. 参考文献: [1]陈奇.中药药理研究方法学EM].北京:人民卫生出版社.1993: ?520?主国医药学杂志2008年第28卷第7期ChinHospPharmJ,2008Apr,Vol28,No.07 744—779. 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[关键词]布地奈德;结肠靶向;组织分布浓度;高效液相色谱法 [中图分类号]R927.2[文献标识码]A[文章编号]1001—5213(2008)07—0520-03 Determinationofbudesonideconcentrationintissuedistributionafteroraladministrationofthe budesonidecoloniclocalizationtabletwithHPI LIUHui,DURong,PANWei-san(1.DepartmentofPharmacy,WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitary Command,HubeiWuhan430070,China;2.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,LiaoningShenyang 110016,China) RAcI':0B= 『ECIIvEToestablishanHPLCmethodfordeterminationofbudesonideconcentrationinrattissuedistribu— tionandtoofferanewmethodforevaluatingthecoloniclocalizationeffectofthetablets.METHODSThebudesonideconcen— trationwasdeterminedbyusingthefollowingconditions:stationaryphase,lichospherC18(25()mmX4.6mrfl,5m);mobile phase,methanol—water(containing0.1aceticacid,pH3.())(65:35);flowrate,1.0mL?min 一;columntemperature,(2O?2) ?:detectionwavelength,240nln.RESULTSAgoodlinearrelationshipwasshownbetweent hepeakareaandtissueconcen— trationofbudesonidewhentheconcentrationofdrugwasintherangeof8-500/xg?L 一.TheregressionequationwasC 0.876A+6.411,r0.9998.Thelimitofdetectionwas0.1ng.Theaveragerecoveriesandprecisi onwereinlinewithrequire— ments.CONCLUSIONThemethodissimple,accurateandmayjudgeinitiallythecolon-targ etedeffectofbudesonidecoloniclo— calizationtablets. KEYWORDS:budesonide;colon—targeted;tissuedistributionconcentration;HPLC 口服结肠定位给药系统设计成功的关键是制剂 能够控制药物在胃部及小肠部不发生释药行为,只 有进入结肠后,才使药物通过各种特定的定位机制 在结肠部位靶向释放[1],从而达到治疗结肠局部疾 病或药物全身吸收的目的.本课题选择治疗溃疡性 结肠炎的新型糖皮质激素布地奈德作为模型药物, 结合渗透泵控释新技术和结肠靶向释药技术,以能 被结肠特异性生物降解的天然多糖一壳聚糖作为半 透性包衣膜的致孔剂,成功构建微孔型结肠靶向渗 透泵控释制剂E.这种新型结肠定位给药制剂能够 有效提高布地奈德的局部治疗浓度,减少药物的全 身不良反应,增加制剂的结肠靶向性.但这种制剂 的释药特点,再加上布地奈德本身具有的较强首过 效应嘲,使其血药浓度显着下降,结果造成无法通过 测定布地奈德的体内药动学研究评价布地奈德结肠 定位给药制剂的结肠靶向性.本实验通过建立高效 [基金项目]辽宁省自然科学基金(编号:20052059)[作者简介]刘辉,男,博士,主管药 师,电话:027—87649309,E-mail..pharmacyman@126. corn