【doc】三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响

【doc】三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响 三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响 400咸宁学院(医学版)2oo4年第l8卷第6期[JoumalofXiarmingCollege(MedicalSciences)] 三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响 余同辉,赵红刚,甘亚平:,吴人亮,李云,周慧芬 (1.华中科技大学同济医学院病理学系,湖北武汉430030; 2.成宁学院医学院病理学教研室) 摘要:目的观察三苯氧胺(TAM)对小鼠睾丸形态结构的影响.方法将雄性小鼠随机分成阴性对照组,TAM (低,中,高)组和阳性对照组,分别以生理盐水,TAM(0.02mg?kg一?d一,0.2mg?kg,?d,,2mg?kg一?dI1)和环 磷酰胺(40mg?kg,?d-1)连续灌胃20天,于末次后15天处死小鼠,计算实验前后体重变化,睾丸重量与睾丸指 数,并观察光镜和电镜下睾丸组织的形态.结果高TAM组小鼠的体重变化,睾丸指数与阴性对照组比较差别显 着(P<0.05),高TAM组睾丸组织的形态结构明显改变.结论高剂量TAb"对小鼠的睾丸组织有毒性作用. 关键词:三苯氧胺;睾丸;生殖;毒性 中图分类号:R965.2文献标识码:A文章编号:1008—0635(2004)06—040o一04 EffectsofTamoxifenonStructureofTestesinMice SHETong—hui,ZHAOHong—gang,GANYa—ping,etal (DepartmentofPathology,TongjiMedicalCol~ge,HuazhongUnive~ityof ScienceandTechnology,WuhanHubei430030,China) ABSTRACT:ObjectiveToobservetheeffectsofTamoxifen(TAM)onthestructureoftesteso fmice.Meth- odsTAMwaSadminis仃atedtomiceatdifferentdoses(0.02mg?kg,?d,,0.2mg?kg,?d,,2mg?kg,?d) bygavageonceadayforsuccessive20days.Themiceweresacrificedonthe35thdayafterthefi rstgavage.The changeofbod—weigh:,theweightoftestesandtheindexoftesteswereexaminedpre—andpost—experimentandthe structuresoftestiswereobserved.ResultsThechangeofbody—weightandtheindexoftestesinhighTAMgroup weresignificantlydifferentwiththoseinnegativecontrolgroup(P<0.05).Thestructureso ftestesinhighTAM groupwerealsoobviouslyinjured.ConclusionHighdoseofTAMhastoxicitytothetissuesoft estesinmice. KEYWORDS:Tamoxifen(TAM);Testes;Reproduction;Toxicity 三苯氧胺(tamoxifen,TAM)是一种治疗雌激素 受体(ER)阳性乳腺癌的非甾体类雌激素拈抗剂, 临床上已成功被上千万妇女使用?工J.流行病学资 料表明女性服用TAM可增加子宫内膜癌的患病危 险J,其他毒副作用也有较多研究.本实验以雄性 小鼠为研究对象,通过对睾丸形态结构的观察,探 讨TAM对雄性小鼠睾丸组织的生殖毒性作用. 1材料与方法 1.1试剂 枸橼酸他莫昔芬(又名三苯氧胺),上海复旦复 华药业有限公司生产,批号:031103;环磷酰胺,上 海华联制药有限公司生产,批号:030909.均用蒸 馏水配成不同的浓度. 1.2试验动物及染毒方法 将35只健康发育期的昆明种小鼠(体重22.78 ?2.98g)随机分成5组,每组7只,设3个染毒组: 低剂量组(TAM0.02rag?kg一?d),中剂量组 (TAM0.2mg?kg,?d),高剂量组(TAM2mg? kg,?d).以等量的生理盐水作为阴性对照组;以 环磷酰胺(CP40mg?kg,?d)作为阳性对照组. 各组均同法经口连续灌胃20d,1次/d.灌胃体积 咸宁学院(医学版)2004年第18卷第6期 [J0umalofXianningCollege(MedicalSciences))401 为0.Olml/go 1.3观察指标与方法 (1)实验前分别称取每只小鼠的体重(g),于 末次染毒l5天后称取小鼠的实验后体重(g),然后 将小鼠断颈处死,分离出两侧睾丸,称取一侧睾丸 重量(g);计算睾丸指数,睾丸指数(kg)=睾丸 重量(g)/实验后体重(); (2)随即将一侧睾丸固定于10%福尔马林溶 液中,常规方法制成HE染色的组织切片,光学显 微镜下观察其形态变化并用HMIAS一20(X)高清晰 度彩色医学图文分析系统采集图片. (3)取另侧睾丸组织1mm大小投入2.5%缓 冲戊二醛固定液中固定2h,磷酸缓冲液jI{洗后,1% Os0固定lh,逐级酒精,丙酮脱水,EPon812树脂 包埋,超薄切片,醋酸铀和枸橼酸铅双染,德国Zeis- sEMIOC透射电镜观察,拍照. (4)所得数据以ii8表示,用MicrosoftExcel 软件中的单因素方差分析对各指标进行分析. 2结果 2.1TAM对小鼠体重,睾丸重量及睾丸指数的影 响 由表I可见,与阴性对照组比较,高TAM组小 鼠的实验前后体重变化有显着意义(p<0.05),其 睾丸指数明显低于正常组(P<0.05). 表l"rAM对小鼠体重,睾丸重量及睾丸指教的影响(i?B,n=7) 与阴性对雕组比较.?p<0.05 2.2TAMx,鼠皋丸组织光镜下形态结构的影响 光镜下(图1),低TAM组与阴性对照组的睾 丸组织形态相似;中TAM组见部分生精小管的细 胞层次减少;高TAM组有多量生精小管的结构紊 乱,可见皱缩,塌陷,只2—3层细胞,排列疏松,或 散碎于管腔中央,与阳性对照组相似,明显区别于 阴性对照组. 2.3TAM剐 明性对照蛆(×100) 透射电镜下观察(图2),可见高TAM组睾丸 组织生精小管的细胞层次减少,生精细胞水肿,间 隙增宽+少数精原细胞的核染色质边集,Sertoli细 胞内有空泡变性,脂质增多及髓鞘样结构;间质内 Leydig细胞有明显的空泡变性,脂滴增多,密度降 低,自噬泡与髓鞘样结构形成.这些改变与阴性对 照组差别显着. 商TAM组(xlO0) 402威宁学院(医学版)2004年第18卷第6期[JournalofXianningCollege(MedicalSciences)] 高TAM组(×400)阳性对照组(xl00) 图1小鼠睾丸组织的光镜下形态改变 Se~oU细胞内脂质(L),麓鞘拌结构()(×3150)Seaoll细胞内室泡变()(×63oo) 精厚细胞闻壤增宽(),棱染色质边集()(x63Oo)Leydlg细胞空泡变性(),脂滴增多(-2-)(x6300) 图2高TAM组小鼠睾丸组织的电镜下形态 咸宁学院(医学版)2oo4年第18卷第6期 [JournalofXianningCollege(MedicalSciences)]403 3讨论 TAM为三苯乙烯衍生物,其抗雌激素作用的机 制为】:TAM与ER结合形成的复合物不能启动靶 基因的转录,将雌激素依赖性细胞组织在细胞周期 的G./G,期以减缓其生长.另外,TAM的组织,细 胞特异性部分激动剂活性依赖于在TAM—ER二聚 体中仍保留功能的NH一反式激活区和基因性质 (正常情况下其性质受雌激素控制),当基因主要由 A/B区控制时,TAM起部分激动剂作用. 本实验的结果:?高TAM组小鼠的实验前后 体重增加甚少,睾丸指数显着低于正常对照组;? 高TAM组睾丸的光镜结构与超微结构明显改变. 上述结果表明:?睾丸的生精细胞损伤,结合精子 计数,形态及活动度的改变,可说明生精能力的下 降;?Sertoli细胞的改变与其能量代谢障碍有关, 由于能量的合成代谢障碍,ATP生成不足,引起对 生精细胞的支持和营养作用降低,生精细胞由于缺 乏必需的营养,形成正常成熟精子的数量下降;? Leydig细胞的损伤,尤其胞浆内脂滴增多,电子密 度降低等,可能有睾酮(T)的合成减少J,其机制 大概与下丘脑一垂体一睾丸轴的调节改变有关,而 T的减少,会引起生精细胞形成精子的数量下降, 或者活动度减弱,畸形增加,因而影响睾丸的生殖 功能.这几个方面之间的因果联系,作者认为可能 与TAM的部分激动剂作用或其他机制有关,如 TAM的部分激动剂作用即雌激素样作用,导致雌激 素灭活减少,睾酮合成不足,Sertoli细胞合成雄激 素结合蛋白(ABP)下降,则生精小管内不能保持较 高的雄激素水平,因而生精能力减弱,其具体作用 机理尚有待于进一步研究. 综上所述,高TAM对小鼠的睾丸组织有生殖 毒性作用. 参考文献: [1]PowlesTJ,HickishT.Tamoxifentherapyandcarcinogenic risk[J].J.NagCancerInst.,1995;87:1343. [2]ClarkeM,CollinsR,DaviesC,cta1.Tamoxifenforearly breastcancer:anoverviewoftherandomizedtriats[J]. 1ancet,1998;351:1451. [3]RutqvistLE,JohanssonH,SignomldaoT,cta1.Adjuvant tamoxifentherapyforearlystagebreastcancerandsecond primarymalignancies[J].J.NatCancerInst.,1995;87: 645. [4]WeibelVJ,OsborneCK,FuquaSW,eta1.Tamoxifenre. sistanceinbreastcallcer[J].CfitRevOncol/Hematol, 1993;14:173. [5]ReehefortH.Mechanismofactionofhish-affinityantiestro- gens[J].AmJClinOneol,1991;14(supp1.2):1. [6]王水明,王德文.电磁脉冲辐射对小鼠窜九问质细胞结 构和功能的影响[J].中华男科学,2003,9(5):327. (收稿日期:2004—09—30)