胰高糖素样肽1长期作用对RIN—m细胞胰岛素分泌功能的影响

胰高糖素样肽1长期作用对RIN—m细胞胰岛素分泌功能的影响 , , ? ,, ,, 年 , , 月第 , 卷第 ,期 , ,,,,; ,, ～ , ,,,, , , ～～ 翌型 : ～丝 : :～ ? ?基 础 研 究 ? ， ,细胞 胰 岛 素分 泌 功 能 胰 高糖 素 样 肽 ,长期 作 用 对 ,,—的 影 响 王 川 严励 杨川 傅祖植 程桦 【 ( , () ，— 提要】 胰高血糖素样肽 , , ,,在 高糖 培养时可 以延缓 ,,,细胞随体外培养 时间延 长 而出现 ( , ? ) , ,水 平 的下 降 ， 其作 用具 有葡 萄糖 依赖性 。的胰 岛素 和胰十二指肠 同源盒基 因转 录因子 , , , , , , 且 , ( 可能通过 , ,( 延缓 , , ,细胞胰岛素分泌功能 的下降 。由此 推测 , , , , , ，— 【 ，( 胰 关键词 】 , , ,细胞 ; 高糖 素样肽 , ;胰十二指肠 同源盒基 因转录 因子 , , , , , , , , , , ,,, , ， ,, ,; ,,, , ,, , ,; ,,, , ,; ,, ,,, , , , , , ,, , ;, ,, , , ,, , ,, , ,, , , ,? , , , , , ,, , , , , ; ,, , , , , , , , , , ,, ，, , , , , , ,,, , , , , , , ;, , , , , , ? ,, ，, , , ，, , , , ，, , , , , , , ( , , , ,,, , ,, , , ， ,,, ,;, ,,, , ,,,, , , , ,, , , , ,, , , , ,，,, , ,, , , , ,, , ,,,, , ,(, ,,,, , , ,, , ,, , , , , ,, : , , , ,, , ,, , (, , ,, , , : ,, , ,, ,, ,, , , , , ， , , ,, , , , ,, ,,, , 】 , , —, ,, , ;, , , ,( ,一),, , ,, , ,, ,;, ,, , , , ,,, , , , , , , , , , , ,, 【, ,, ,,, ,,,,,,一 , ,, , ,,, , ,, ,, ,,,, , ,,, , , , , , , ,， , , , , , ,, , , , , ; , , ; , , , , ,, , ,,( , , , , ’ , (,, 一 , ,, , , , ,, , ,, ; ,,, , ,( ; , ; , , , , , ,, , , , , ; , , ,,,, , , , , , , , , , , ,, , , ,, , , ,, , , , , , , , , , , , , , , , ,, , , , , , , ,, ,( , , ,, , , , ,, ,,, , ;,, , , , , , , , ,, , (, , ,, , , , , , , , ,, ( , , ,, ，— ,, ,, ,,,, , ,一; , 一 , , ; , , , 【 , ,,】 ,,,;, ; , ,,—, ,,,, , ,, , , , ,,, , 。, , , , (,) , ,, ( ,, ,, , ;, , ,, , ,，,: ,, 有望治 愈糖尿 胰 岛细胞 移植重建 内源性胰 岛素分泌 系统 ， , 观测指标 和方法 : () ，, ?光镜下 观察 , , ,细胞 在培养 过程 中 病 。但其 至今 尚未 大规模地 应用 于临 床 ， 一个重 要的原 因是 可 实验结束 的形态变化 。? 每次换液前 留取并冻存 旧的 培养 液 ，供移植 的胰 岛细胞 匮乏 ， 体外扩增 为获得 足够 的胰岛细胞 提供 用 , ,) 计 , 个 时统一解冻 ， 放射 免 疫 分析 法 ( ， 测 定 ， 算 出每 ,, 但在体外扩增 的过 程 中， 了一种可能 ， 随时 间的延 长 ， 细胞合成 ，( ,, ,半定 量 测 定 , , ,细胞培 养 液 中胰 岛素 的 水平 。? , ,,和分泌胰 岛素的能力都 会逐 渐 下降… 。如 何维 持体 外扩 增 的 , ( , , , ,,, ,的 水 平 。 成为近年来 糖尿病研 究领 域的热 点之一 。胰 胰岛细胞 的功能， … 体外 培养的第 ,, , ,周 用 , ， , , , 提取 细胞 总 , , , , ,后 ， , ( , , )是一种 生理性 肽 类肠 道激 素 ， 期 内可 高糖 素样 肽 , , , , 短 用 , ,, , 一及 (; ,的 , , ,, ,检测 , , , 内参照 ,,,, ,, , ,达 。, , ( , ()明显促进 胰岛细胞胰十二指肠 同源盒基 因转 录因子 , , , , ,引物 : 上游引物 , 一; , , ; ; , , ;, 下 ; ; , , , , ; , ， 游引 使的表达 ， 其合 成 和分 泌 更 多 的 胰 岛 素 。本 研 究 试 图 用 ’ 物 ,, ,，，, ; , , ; , ; ; ， ， 增 片 段 长 度 为 从 , , , ,, ; , ; , , ;, 扩 ,， , , , 长期作用 于体外 培养 的 , , ,细胞 ，, ,, ，( , ( 对 ，( 观察 , , , , , , , , 。 物 :上 游 引 物 ,,, ,, , , , , , , , —; ,,,, 引 , ’ , ，, , , , , , ,细胞胰岛素分泌功能 的影 响。 , , ,,,, ， , ? , , , , , , , ， , 下 游 引 物 ,( , ,, , , , : ,,, , , , 一 、 材 料 和 方 法 扩增片段长度 为 ,,,。, ,, ,, 第 一链 ; , ,， ; , , , ( 和 , 曲 , , 来 , : , 细胞 : ， ( 细胞 ( , ,) 源 及 ( () ,,, ,, 于射 线诱 导 的 , ,,,, , ,反应条 件均按 ,, , 公 司试 剂盒 的使用说 明进行 操作 。 主要分 泌胰 岛素及 极少 量生 长抑 素。 ( )大 鼠胰岛细胞瘤 ， , 试 , , , ?预 变性 ,, , , ? 反应总体积为 , 。, ,反应 条 件 :, , ，, , , , ,, , 、 , , ,, , ,, , ，剂 : , ,( ,, ) 无 糖 型 , ,，,,培养 液 ( , , ) 大 鼠特 ,, , ?退 火 , ，, 变性 , ， , ,, 共 ,个 , ?终 ,,, ?延 伸 , ， , 循环 ，,异性胰 岛素 测 定 试 剂 盒 ( ,; ) , , 抽 提 液 , ， , ,,, ,,, ， , , , ( ,, , ,,, ,, ,产 物行 , 末延伸 , ,。, ,, 扫描 ,琼 脂糖凝胶 电泳观察 、 , ) , ,, ,, ,, 。, , ， ,, ,试剂盒 ( ,, , ) 及半定量分析 。 ( () ,,, , ，, , 方法 :, 细胞培 养与分 组 : ， — 细胞在 , ,，, ,培 ,统计学 处理 : ( 数据 以 , 示 ， ,,,( ? 表 用 ,,,,软件 处理 。养液 中按 常规培养 ， , 个, 接 每 以约 ,×, ,, 种 。 ,天换 液一 次 ， ,组问均数 的比较采用两独 立样本 的 , ,组 检验 ， 间比较采用单 体外 培 养 ,周 。实 验 分 为 ,个组 :?正糖 组 :培 养 液 中 含 因素 方 差 分 析 。 ( , ,,的葡 萄 糖 ; 正 糖 ，, , ,组 : 养 液 中 含 , ,, ,, , ? ,一 培 ( 结果 二、 ,, ,, ,, , ,; 细胞 培 养 ,, ,,的葡 萄糖 和 , , ,,的 , , , ? 高糖 组 : ( , , ,细胞 呈多边 不规 则形 ， , 细胞 大体形态 : ， — 边界 清楚 ， ,,, ,,的葡 萄糖 ; 高糖 ，, , , : 液中含 , , ? , ( 组 培养 液 中含 , ,( 胞 内含有分泌颗粒 。整个培养 过程 中 ， ， , 细胞 大体形 态无 ,, ,, ,, , , (。每组各 ,个样本 。 , ,, ,的葡萄糖 和 , , ,,的 , , , 明显变化。 ( , , , , 表 、) ( ) , 胰 岛素水平及 , ,, , , 的检 测 ( ,, : , ,组 ,, , 作 者单位 :, ,,广州 ，中山大学 附属第二医院 内分泌科 ，, , 一 ,, , , , 细胞 培 养液 中胰 岛素 的水 平 和 , , ,, , 的相 对水 严励 ( , , ,, ,,, ,, 通讯作者 : , , , , :, , , ( , 其 平都 随培养时间延 长而逐渐下 降 ，二者下降趋势基本一致 ， ? ,? , , ,年 ,月第 , 卷第 , ,, , 期 , , , , , , 丛 , ,, , , ～ 丝, : , ,, ,, ?, , 表 , 不 同培养时间培养液 中胰 岛素 的水平 变化( , , ;, ， ) 与 。 ,, 与 , 一组 ,, 与 ,,, , 注 : 正糖 组 比较 ， ,, (,; 正糖 ，, , , 比较 ，,, (,; 高 糖 组 比较 ， (, ( , 一) , ? ) 表 , 不 同培养 时间各组胰 十二指肠 同源盒基因转录因子 , , , , , ,,的相 对水平 ( , .