马尔尼菲青霉菌感染的实验室检测

马尔尼菲青霉菌感染的实验室检测 《海南医学}2007年第l8卷第lO期 文章编号:1003--6350(2007)l0—026—02 马尔尼菲青霉菌感染的实验室检测 李佩章,陈艳华,李晖,陆一平,雷考宁,王英,江红 (广西医科大学附属肿瘤医院检验科,广西南宁530021) 论着 摘要目的确定检出患者体内所感染的病原体为马尔尼菲青霉菌.方法取患者血液,骨髓,淋巴结穿刺 物涂片染色镜检和真菌双相培养,观察真菌生长情况及菌落形态,并涂片,固定,染色,显微镜下观察菌体特征. 结果可排除组织胞浆菌.鉴定为马尔尼菲青霉菌.结论从患者体内分离的病原菌鉴定为马尔尼菲青霉菌. 关键词马尔尼菲青霉菌:组织胞浆菌;鉴别诊断 中图分类号:R446文献标识码:A Laboratorydetectingofinfectionofpenicilliummarneffei LIPei-zhang,CHENYan-hua,LIHui,LUYi—ping,LEIKao—ning,WANGYing,JIANGHong heLaboratoryofAffiliatedCancerHospitalofGuangxiMedicalUniversity, Nanning,Guangxi,530021China) Abstract0bjectiveTodefinitethepathogenwaspenicilliummarne~iseparatedfromthepatient. MethodsThebloodorbonemarroworlymphnodespunctureliquidwasobserveddirectlyandincubatedat 25%and37%respetivelyforfungi.Thegrowthofpenicilliummarneffeiwereinspectedandthecharacteristics ofPM’Ssmearwereobservedundermicroscope.ResultsHistoplasmacapsulatumwasexcludedandpenicillium marneffeiwasidentificated.ConclusionsThepathogenseparatedfromthepatientwasidentifiedPM. KeywordsPenicilliummarneffei;Histoplasumacapsulatum;differentialdiagnosis 随着抗生素,免疫抑制剂的使用, HIV感染人数的增多.真菌感染逐年增 加.马尔尼菲青霉菌(penieilliummarn— effei,PM)作为唯一能引起人类播散性 感染的青霉菌lI.是引起HIV感染者及其 他免疫缺陷患者机会性感染的主要致病 菌之一.PM具有侵犯血管的习性和潜能 |31.及能在37?人体温度条件下生K繁 殖,使马尔尼菲青霉病(penicilliosis mameffei,PSM)的凶险程度及病死率高. 我院近期收治1例AIDS合并PsM患 者,该患者的确诊最早来自骨髓中疑似 马尔尼菲青霉菌的发现.分别从血液,骨 髓,淋巴结穿刺物中培养分离出PM,现 将其实验窒诊断报道如下: 1临床资料 1.1一般资料患者男性,30岁, 于1个月前无明显诱因出现反复发热, 呈驰张热型,最高体温达4o.1?.于当地 医院输液退热(具体药物及剂量不详), 但体温控制不佳,仍反复发热,并于1周 前到上级医院就诊时B超发现:肝大,脾 大,腹膜后淋巴结大(考虑淋巴瘤可能性 大),为进一步诊治到我院求诊,门诊以 肝大原因待查收入我院肿瘤内科. 入院查体:T39.8?,中度贫血貌,皮 肤巩膜黄染,颈后,颌下,腋窝,腹股沟可 触及数个肿大淋巴结,肝肋下6cm可触 及,脾肋下3cm可触及. 1.2实验室检查WBC8.8×109/L. RBC3.26×10’1几,Hb82g/L,PLT96×109几, Anti—HIV(+)(经广西区疾控中心确证为 HIV感染),Anti—HCV(+).骨髓涂片检查 发现中性粒细胞和巨噬细胞内或细胞外 有大量圆形,椭圆形或腊肠形病原体.腊 肠形病原体内可见明显横隔.故考虑马 作者简介:李佩章(197O—O9),女,广西南宁市人,主管检验师. - 26- 尔尼菲青霉菌感染,组织胞浆菌待排. 2与方法 2.1材料:?标本:取患者血液,骨 髓,肿大淋巴结穿刺物;?培养基:沙保 罗培养基,血液增菌培养液. 2.2方法 2.2.1涂片镜检:取血液,骨髓,淋 巴结穿刺物直接涂片瑞一姬氏染色,PAS 染色(过碘酸雪夫染色),显微镜观察.分 别取25?和37?环境下孵育的菌部涂 片,固定,瑞一姬氏染色.PAS染色,显微 镜下观察菌体的形态特征. 2_2_2真菌培养:取血液,骨髓各 4m1分别接种于30ml的血液增菌培养液 中,在37?中孵育,待其生长后接种于沙 保罗培养基中各2份.分别置25?和 37?培养.取淋巴结穿刺物直接接种于 沙保罗培养基中2份,分别置25?和 《海南医学)2007年第l8卷第lO期 37?培养.观察各培养物在不同时间的 菌落形态特征. 3结果 3.1形态学特点: 血液,骨髓,淋巴结穿刺物直接涂片 瑞一姬氏染色,镜检发现中性粒细胞,巨 噬细胞内均可见圆,椭圆形或腊肠形,成 堆或散在分布的菌体.腊肠形者两端钝 圆.约2umx8um,中间有横隔.病原体胞 壁不着色,浆染淡蓝色,有1至2个紫红 色小核.PAS染色细菌胞壁染红色. 3.2真菌培养特点: 25?呈霉菌相:沙氏培养基上2,3 天产生菌落,呈淡灰褐色膜样或淡黄色 绒状,直径约5mm,并产生红色色素,扩 散人培养基中.12,14天后菌落呈玫瑰 红蜡样,形成皱褶,菌落直径约22, 31mm,镜下可见有分枝,分隔,无色透明 的菌丝.部分菌丝呈帚状枝,双轮或单轮 生.37?呈酵母相:6,8天菌落直径约3— 5mm.呈淡灰褐色或奶酪色膜样.2,3周 时直径10,16mm,有脑回状皱褶,无色素 生成.镜下为圆形,椭圆形或长形酵母样 菌体.部分呈腊肠样有横隔. 3.3实验室诊断: 根据从患者体内分离出的病原体的 形态学和培养特征,可鉴定为PM.结合 患者的临床现及其他检查,诊断为 AIDS合并PSM. 4讨论 自然界有300余种青霉菌,但只有 PM是唯一的温度依赖性双相青霉菌,且 PM具有深部致病力.在诊断深部真菌感 染时.血液及骨髓检查是最快速,简便而 又比较可靠的方法.能达到早期诊断的 目的.对及时治疗PSM.提高PSM的治 愈率很有实用价值.但马尔尼菲青霉病 和组织胞浆菌(Histoplasmacapstdatum H.cap)病临床上均可有发热,肝,脾,淋 巴结肿大;贫血,消瘦等,两者临床表现 极其相似,极易误诊l4,5t61.因而诊断PM 必须H.cap鉴别.从患者体内分离出病 原体是诊断的金. PM与H.cap的异同:同两者都是温 度依赖性双相真菌,在25?下培养均为 霉菌相,在37?下培养均为酵母相.异: PM25oC生长快.2,3天即产生特征性红 色色素,并渗入菌落周围的培养基中, PM具有青霉菌所特有的帚状枝及孢子 链:H.cap25~C生长慢,2,3周才能看出特 征,无色素产生.有分隔的菌丝,可见大 小两种分生孢子,大孢子表面有棘突如 舵轮状,有诊断价值.PM与H.cap在 25?生长时最易区分.而37?时两者均 为酵母相,不太容易区分.两者的差别还 有繁殖方式的不同,PM为分裂繁殖,H_ cap为芽胞繁殖,因此在血液或骨髓或淋 巴结穿刺物涂片染色中.可见PM分裂 前菌体略变长,可达7,8um,两端钝圆, 形如腊肠,在菌体中部形成横隔;H.cap 分裂前菌体一端膨大可见窄颈芽胞,而 无横隔. PsM病情凶险,死亡率高,因此医务 人员应提高对本病的认识,使该病得到 早诊断,早治疗,为了防止PM漏检,凡 临床上出现不明原因的发热且时间较 长,尤其有高热,肝脾,淋巴结肿大时,除 考虑恶组,淋巴瘤等病外,还要考虑PM 感染.并及时抽标本送检涂片查找病原 体并同时做真菌双相培养,以便及早确 诊. 参考文献 lSinghPN.RanjariaSinghYI,etalIndigenous disseminatedpenicilliummarneffeiinfectioninthe stateofManipur,India:Reportoffourau? tcehthonouscasket【J】.JClinMierobio1.1999,37(8): 2699—2702 2Andrim~opoulosA.Controlofmorphogenesisinthe humanftmgalpathogenpeniciniummarneffei[J].Int JMedMicrobio1.2002.292(5—6):33l一347 3邓卓霖.马韵马尔尼菲青苗穿通血管壁特性的研究 lJ】.临床与实验病理学杂志.1999.15(1):30--31. 4邓卓霖.马韵.酷似组织胞浆苗病的马尔尼菲青霉病 lJ】.中华病理学杂志,1999,28(5}:384-386 5陆林.胡祥仁.吴盂华等.马尔尼菲青霉病六例误诊lJ】. 临床误诊误治.2001.14(6):432—433 6刘艳,詹能勇.李慧渭等.艾滋病合并播散性马尔尼菲 青霉菌感染临床及治疗转归研究【J】.中华传染病杂 志.2005.23(4):256,259. (上接第127页)普贝生是于1994 年获得美国食品和药品管理局唯一批准 的促官颈成熟物质.是前列腺素E:栓 剂.以释放速度为0.3ms,’h恒速释放达12 小时,有效的促宫颈成熟.外源性的前列 腺素E2有松弛宫颈平滑肌的作用,有利 于官颈扩张.同时前列腺素E:也能诱发 宫缩,以达到引产的目的12].由于其化学 性质稳定,药物均匀的释放,避免了一次 用药引起官缩过强的发生,同时由于缓 慢的释放,用药效果长达12小时甚至更 长.常一次给药可获得满意效果. 普贝生与催产素比,具有使用方便, 安全,简便的特点,只需一次收药,卧床休 息30分钟后,行动自如,发现宫缩过强, 随时取出,2,13分钟宫缩回复.而催产素 组静滴需卧床休息时间长,行动不方便, 且需专人守.而米索前列醇促宫颈成熟和 引产有引起宫缩过强,子宫破裂,羊水污 染,甚至羊水栓塞的风险.目前,由于没有 小剂型.故专家不主张用于引产. 我们的研究结果显示,应用普贝生 后宫颈评分24小时提高2分者有43 例,有效率达93%. 而对照组仅9例.占19.5%;24小时 内临产,普贝生组27人次,占60%,对照 组仅7人次,占15%;试验组用药至临产 时间短于对照组,普贝生组剖宫产低于 催产素组:而两组新生儿窒息率,产后出 血量均无差异.仅有1例发生宫缩过强, 1例发生恶心,取药后副反应消失.所有 这些说明了普贝生促宫颈成熟和引产的 有效性和安全性. 普贝生由于价格较贵,在临床应用 受到一定限制.但其降低了剖官产率,增 加了阴道分娩可能.缩短住院天数,同样 减少了住院费用普贝生促进产妇自然 分娩,新生儿安全降生.促宫颈成熟和引 产较其他方法安全,方便,省时,成功率 高.值得推广. 参考文献 l盖铭英等.控释前列腺素E2栓剂一普贝生用于足月 引产的临床研究.中华妇产科杂志.2003.38(4):210~ 2ll 2黄燕萍.宫颈成熟的研究『J】国外医学妇产科学分册. 1996.23:78. ? 27?