内皮素对兔离体Oddi括约肌功能的影响

内皮素对兔离体Oddi括约肌功能的影响 内皮素对兔离体Oddi括约肌功能的影响 沈阳医学院JournalofShenyangMedicalCollege第7卷第1期2005年3月?5? 内皮素对兔离体Oddi括约肌功能的影响 李智',马丽 (1.沈ml'g学院奉天医院普外一科,辽宁沈阳l10024;2.沈阳医学院临床教研室) 【摘要】目的:观察内皮素对兔离体Oddi括约肌功能的影响,以及内皮素抗血清对其的拮抗作用,从而为预防 缓解治疗Oddi括约肌功能失调提供一种新的手段.方法:采用终浓度为(O.1rum一100nM)ET诱发兔离体Oddi括 约肌收缩,用力.位移换能器测定张力变化,研究ET抗血清对其的影响.结果:ET能收缩静息状态下的Oddi括约 素抗血清对内皮素所致的Oddi括约肌,其作用强度随日浓度的增加而增强.内皮 肌收缩反应呈抑制作用.结 论:内皮素可引起Oddi括约肌收缩并呈刺量依赖关系,同时应用内皮素抗血清可显着抑制内皮素引起的免离体 Oddi括约肌收缩. 【关键词】内皮素-1:兔;Oddi括约肌 【中图分类号】R337【文献标识码】A【文章编号】1008—2344(2005)01—0005一O3 EffectofEndothelinontheIsolatedOddiSSphincterFunctionofRabbits LIZhi' , MALi. (1.Departmen!ofGeneralSI】rgery.Fen~ianHospitalAffiliatedtoShenyangMedicalColteage,Shenyangl10024,China; 2.DepartmentofClinicalFeaehing,ShenyangMedicalCollege) 【Abstract】 Objective:T0observetheeffectofendothehn(ET)ontheisolatedOddiSsphincter(SO)ofrabbits andfurthereffectofE'rantiserumontileeffectabove.Toprovidenewmethodfortheprecaution,reliefandtreatmentof tiledysfunotionofSO.Methods:ET.1withtileconcentrationof0.1nMto100nMwereusedforinducingconstrictionof theisolatedSOofrabbitsandevaluatingtheeffectofET-lanliserumonit.Result:E'rconstrictedtileisolatedSOindose- dependentmannerundertherestingcondition.ET.1antiserumdepressedtheconstriction.Conclusion:ETcaninducetile constrictionofisolatedSOofrabbits.TheapplicationofETantisenlmcansignificantlyinhibititsconstriction. 【Keywords】endothelin-l;rabbit;OddiSsphincter 内皮素(endothelin,ET)是迄今所知作用最强, 持续最久的缩血管活性多肽.具有广泛的生物学效 应,是一种多功能生理调节肽.J.Oddi括约肌是 胆总管末端与十二指肠连接处的环形平滑肌,在许 多胆胰疾病的病理生理过程中起重要作用.目前国 内外文献尚未见有关ET对Oddi括约肌收缩作用的 报道.为此,我们首先观察了ET对兔离体Oddi括 约肌的影响,以及ET抗血清对其作用的影响,为探 讨预防,缓解和治疗Oddi括约肌功能失调提供一种 新的手段. 1材料与方法 1.1药物与制剂内皮素-l(ET—l,美国Sigma化 学公司);内皮素抗体(武汉博士德生物有限公 司);Krebs-henseleit(K—H)液(中国医科大学药理 实验室提供)组成及配制(mM):NaCI1l8.4,KCI 【收稿日期】2004一IO一20 4.7,CaCl2(无水)2.5,NaHCO325,KH2PO41.2,Mg- SO47H2O0.8,Glucose10.1,PH7.4. 1.2仪器与器材LWA-20型力一位移换能器(上 海医用电子仪器厂);XWT-204型台式平衡记录仪 (上海大华仪表厂);HSS—l数字式超级恒温浴槽 (成都仪器厂).以上设备由中国医科大学药理实 验室提供. 1.3方法离体兔Oddi括约肌制备及张力测 定选用大白兔l0只(中国医科大学动物室提 供),雌雄不限,体重3.0—3.5kg.使用前禁食l0 h,但不禁水,击头处死后,将其固定于兔手术台上, 剪毛后,取上腹正中切口进腹,沿胆囊向下找到胆总 管及胆总管十二指肠结合部.剖开十二指肠,可看 到其内壁有一圆形隆起,此为十二指肠大乳头.沿 十二指肠大乳头向胆管方向迅速剪取一小段,放于 冷的通有混合气体(95%O,5%CO2)的Krebs- Henseleit(K-H)营养液中,剪除十二指肠大乳头及 其周围组织,可见成环状的Oddi括约肌组织.指尖 沈阳医学院第7卷 沾点营养液,将其剪成3块宽3—5mill左右的环 状,用两个小钩将其悬挂于盛有l0ITIlK—H液的浴 管中,保持温度(37?0.5)?,并持续通入混合气 体.Oddi括约肌环的张力变化可通过其上端相连 的力一位移换能器记录在台式平衡记录仪上,标本初 始负荷为1g,灵敏度为40小格/1g,走纸速度为8 mm/min,每20min换一次营养液,平衡60—90min 后向浴管中加入实验药物,在平衡期间,加入60mM KCI溶液,并把其收缩力作为收缩力的100%,以此 作为内皮素的对照.首先按累积加药法加入内皮 素,完毕后,用新鲜K—H液冲洗标本3次,平衡60 min,使其回至基线,再给内皮素抗血清孵育5min 后,按累积加药法加入内皮素,分别作出其量效曲线 图.实验中所用的药物浓度参考文献J.实验结 果均以?s表示,组间比较采用t检验. 2结果 2.1内皮素对离体兔Oddi括约肌张力的影响按 累积加药法向浴管中加入ET(终浓度为l0.一 10一M),标本出现缓慢而持久的收缩反应.加药后 至Oddi括约肌收缩,其潜伏期平均为(5.2?3.1) min,从Oddi括约肌开始收缩至明显收缩历时(4.5 ?2.4)min,然后收缩力稳定(30.8?10.6)min.当 内皮素处于低浓度时,Oddi括约肌表现为收缩频率 加快,张力增强;当浓度达到10一M时,出现强直收 缩,再增加浓度,则无反应.内皮素收缩Oddi括约 肌的量效曲线(图1),显示ET能收缩静息状态下的 Oddi括约肌,其作用强度随ET浓度的增加而增强. (n=8,?s)o 图1内皮累对离体兔Oddi括约肌的萤效曲线 2.2内皮素一1抗血清对ET一1所引起Oddi括约肌 作用的影响在K—H液中加入浓度为1/5000内皮 素一1抗血清250ml孵育5min后,按累积加药法加 入内皮素一1(终浓度为l0.,10一M),内皮素抗血 清对其作用的量效曲线图(图2),表明内皮素.1抗 血清对内皮素所致的Oddi括约肌收缩反应呈抑制 作用,使其量效曲线下移,最大反应降低(P< 0.01). 图2内皮素1抗血清对内皮索收缩Oddi括约肌量效曲线的影响 3讨论 ET是1988年日本学者从猪主动脉内皮细胞培 养液中发现的一种强有力的血管收缩肽,因其是血 管内皮细胞分泌产生的内皮收缩因子,故称为内皮 素.它是迄今所知作用最强,持续最久的缩血管活 性多肽,含21个氨基酸残基的短肽.它不仅是存在 于内皮细胞中具有很强收缩血管,升高血压作用的 循环激素,而且广泛分布于神经组织血管平滑肌及 巨噬细胞中的一种潜在的神经递质和细胞生长因 子[. 内皮素作用极其广泛,有多种生物学效应.在 心血管,肝胆,胃肠疾病等的发生发展中起重要作 用【9】.在生理状态下ET调节肠道平滑肌及血管平 滑肌的舒缩,一般认为内皮素可起循环激素样作用, 主要通过旁分泌,自分泌方式起调节作用,在维持机 体内稳定中有着重要意义. 内皮素包括ET一1,ET-2,ET-3和VIC(血管收 缩因子)4种异性肽形式,生物活性以ET一1最强, ET-3最弱.多种因素可影响内皮素水平:缺血,缺 氧,再灌注,灌流量增加,高脂血症和内毒素都明显 促进内皮素释放.而心钠素,脑钠素,CGRP等均可 抑制ET的表达和释放.血液中的内皮素主要为 ET.1[7-91 . 内皮素受体为ETA,ETB,ETC三类.ETA受体 是ET一1选择性受体,主要分布于血管平滑肌,介导 血管收缩,ETB受体为ET非选择性受体,主要分布 于血管内皮细胞,介导NO和PGI的释放,它在血管 舒张和血管张力的短时间调节方面起重要作用, ETC受体亦ET-3选择性受体,对ET-3有高亲和力, 它主要分布垂体前叶细胞和神经系统,起神经介质 第1期李智等.内皮素对兔离体Oddi括约肌功能的影响?7? 作用,并可抑制催乳素的效应.此外在肾髓质亦有 ETC受体.体内许多器官组织都含有ET受体J. 本实验发现内皮素对Oddi括约肌有收缩作用, 并呈剂量依赖关系,其效应考虑是通过特异性受体 起作用,ET-1与受体结合的速度缓慢,从加药至Od— di括约肌开始收缩约有10min,至收缩力稳定后可 维持30min左右,说明ET—l与Oddi括约肌上受体 结合较稳定牢固.ET—l与受体结合后可通过多条 途径进行信息传递,其中主要是?磷酸肌醇系统,以 三磷酸肌醇(IP,),二酰基甘油(DAG)为第二信使, IP3引起肌浆网内Can迅速释放,DAG可激活PKC 同时伴随细胞外钙内流等一系列效 (蛋白激酶C), 应,而细胞外钙内流的确切机制不清.~rT能促使 细胞膜上Na/H交换促进Na内流,H外流,使 胞浆碱化,胞中Na的升高进一步促进细胞膜上 Na/Ca"交换,使细胞内ca?增高.?通过ca? 通道的作用.ET是通过细胞内储存can释放和电 压依赖性ca"通道导致细胞外钙内流.?此外还 可通过花生四烯酸代谢等途径调节平滑肌的张力. 内皮素抗血清可显着抑制ET-1诱发的Oddi括 约肌的收缩,其作用机制可能与抑制外钙内流和内 钙释放有关J.其机制本实验未讨论.迄今尚无 特异性内皮素一l受体拮抗剂,应用ET抗血清中和 ET有普遍治疗意义.在生理状态,机体自身调节网 络可以维持的基础和/或适应生理水平的合成与释 放,参与内环境稳态的调节;在疾病状态下,内源性 生物活性物质,环境理化因素的变化或内毒索等, 影响ET的表达和释放稳态的恒定,导致ET异常表 达释放,从而参与疾病的发病过程.随着ET的生 物学效应,病理生理意义的深入研究,探索ET拮抗 剂或ET.1受体拮抗剂已成为ET研究急待解决的 课题. 【{-}考文献】 [1]BertramG.Katmng.基础与临床药理学【M】.北京:人民卫生出 版社.2001.303—305. 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