细胞生物学的定义

细胞生物学的定义 第一章 绪论 细胞生物学的定义 细胞生物学的三个研究水平 我国基础科学发展规划中生命科学的四大基础学科:细胞生物学、分子生物学、神经科学、生态学 当前细胞生物学的研究领域:1(细胞膜与细胞器的研究;细胞骨架体系的研究;细胞核、 染色体及基因表达的研究 2(细胞通讯和细胞信号转导 3(细胞增殖及其调控 4(细胞分化及其调控 5(细胞的衰老与凋亡 6(干细胞及其应用 7. 细胞工程第二章 细胞的起源与进化 从原核细胞到真核细胞的演进 一、原核细胞(prokaryoctyt) 1、结构——细胞壁、细胞膜、细胞质、荚膜 特点:没有细胞核、无膜性细胞器 DNA存在于拟核区，为双链环状，不与组蛋白结合 细胞体积较小(1-10um) 含有核糖体 2、原核生物:支原体、细菌、放线菌、蓝细菌 几乎所有的原核生物都是由单个原核细胞构成 二、真核细胞(eukaryocyte) 1、特点:有细胞核，核内含大部分DNA，有核膜可与细胞质分开 胞质内有许多膜性细胞器，如内质网、高尔基复合体等 体积比原核细胞大1000倍。 有细胞骨架。 2、真核细胞进化过程中的一个关键步骤是:膜性细胞器的出现。 2、真核生物:单细胞生物(酵母、绿藻)、真菌、动、植物 三、原核细胞和真核细胞的比较 1、在基因组组成上有显著差异 1)真核细胞含有更多的DNA，蕴藏更多的遗传信息。 DNA呈线状，并包装成高度凝集的染色质结构。 )真核细胞的细胞器中也含有DNA 2 3)真核细胞的mRNA在合成后，必须在核内剪接加工，然后运到胞浆中翻译成蛋白 质。DNA转录与翻译分开进行。 特征 原核细胞 真核细胞 细胞结构 核膜 无 有 核仁 无 有 线粒体 无 有 内质网 无 有 高尔基复合体 无 有 溶酶体 无 有 细胞骨架 无 有 核糖体 有，70S 有，80S 基因组 DNA量(信息量) 少 大 DNA分子结构 环状 线状 染色质或染色体 仅有一条DNA，DNA裸露 有2个以上DNA分子，DNA 不与组蛋白结合，但可与少 与组蛋白和部分酸性蛋白结合 量组蛋白结合。 以核小体及各级高级结构构成 染色质与染色体。 基因结构特点 无内含子，无大量DNA重 有内含子和大量DNA重复序列 复序列。 转录与翻译 同时进行(在胞质内) 核内转录，胞质内翻译 转录与翻译后大 分子的加工与修饰 无 有 第三章 细胞生物学的研究方法和手段 第一节 显微镜技术(microscopy) 介绍几个相关概念: 1、 分辨率(resolution, 也称分辨本领resolving power):区分开两个质点间的最小距离。 2、极限分辨率:能清楚分辨出两点之间的最小间隔。 数值越小，分辨本领越强。 人眼的极限分辨率为100um, 而动物细胞的大小在10-20um之间。 一、光学显微镜:分辨率为0.2um (一)普通光学显微镜(light microscope) 1、应用最早、广。 2、 光源——自然光、灯光。 3、最大放大倍数——极限放大倍数为500倍 4、可见结构:细胞、细菌、细胞器(线粒体、细胞核等)、少数病毒。 5、观察前的处理:固定、包埋、切片、染色。 (二)荧光显微镜:分辨率高于普通光镜 目前在光镜水平对特异蛋白质等生物大分子进行定性定位的最有力的工具。 (三)相差显微镜技术 1、 特点:观察活细胞、未染色的生物标本 避免在样品制作过程中细胞成分的丢失或失真。 2、 应用:细胞培养中观察细胞的生长情况等。 (四)激光共聚焦扫描显微镜(自学):分辨率是普通光镜的1.4倍。 二、电子显微镜技术 1、光源:电子束 波长与电子运动快慢有关，越快，波长越短，分辨力越强。 2、分辨本领高: 3、 可以观察:细胞的亚显微结构和生物大分子。 4、 样品制备复杂:需要真空;要求样品很薄，一般在数十纳米，要求有超薄技术。一般用 重金属染色。 5、常用的电镜 透射电镜(TEM): 观察细胞的微细结构 扫描电镜(SEM):观察细胞表面的三维形态 第二节 细胞的分离和培养 一、从组织中分离不同类型的细胞 1、制备单细胞悬液:蛋白水解酶(胰蛋白酶、胶原酶 EDTA: 金属螯合剂 机械方法 2、分离出不同类型的细胞 离心 抗体偶联法 流式细胞仪(FCM、flowcytometer):最精密的细胞分离技术3、生化或细胞培养 二、细胞培养(cell culture) 1、定义:从活体组织中分离出特定的细胞，在一定条件下进行培养，使之能够继续生存、 生长以至增殖的一种方法。 2、是研究不同细胞功能的一种有力的手段。 所得的结果不能完全代表体内情况。 3、几个相关的概念 in vitro:——用培养的细胞进行的实验(离体的)。 in vivo——在完整肌体内进行的实验(在体)。 原代培养(primary culture):指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。 传代培养:是指把增殖的原代培养的细胞从培养瓶中取出，以1:2以上的比例扩大培养。细胞系:从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁 殖、传代。三、细胞融合 ,、定义:通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程 2、应用:研究不同细胞间的相互作用 证明膜蛋白的运动 制备单克隆抗体(B淋巴细胞与肿瘤细胞相融合，融合细胞既有肿瘤细胞无限传 代的特性，又有淋巴细胞产生抗体的职能。 人染色体上特定基因的定位 第五章 细胞膜的结构 生物膜和单位膜的定义 第一节 细胞膜的化学组成 脂类——双层、构成膜的主体 蛋白质——膜功能的担负者 糖类——分布在细胞表面 其他:水、无机盐、金属离子 在不同类型的生物膜中各种成分比例有差异。一般说来，功能复杂的膜中蛋白质的比例较高。 一、膜脂 1、种类 磷脂——卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰肌醇等 结构特征 亲水头——磷脂酰碱基 疏水尾——脂肪酸链 胆固醇——调节膜的流动性 加强膜的稳定性 糖脂——存在于一切动物的细胞膜中 有种属和组织差异性 位于所有膜的非胞质面单层 将糖基暴露在细胞表面，可作为受体，参与细胞识别和信息传导 2、特点:双亲性分子 3、存在方式(水溶液中) 球状的胶态分子团 脂质双分子层 脂质体:根据磷脂分子可在水相中形成稳定的脂双层的趋势而制备的人工膜 分成 平面脂质体膜 球形脂质体——直径1微米 作用:质膜功能实验性研究 基因转移 疾病治疗 二、膜蛋白 1、 膜功能的主要承担者 2、 不同类型的膜中含量差别很大 3、 分类: 外在膜蛋白 内在膜蛋白 占20%-30% 占70%-80% 膜的内外表面，内表面为主 多数为跨膜蛋白 不与脂质的疏水区连接 多见于功能复杂的细胞膜 水溶性蛋白 嵌入或贯穿脂双层，直接与脂质的疏 结合力较弱:离子键 水区相作用双亲性分子 静电作用 与膜结合紧密 分离条件:温和，不破坏膜结构 去垢剂使膜崩解后才能分离出来 改变离子强度 浓度 提高温度 4、 功能:物质转运、受体、支持连接、催化作用 三、膜中的糖类 1、存在与所有真核细胞的表面，形成细胞外被(cell coat)或糖萼 2、细胞外被:膜上的糖蛋白和糖脂中的所有糖类都位于膜的非胞质面一侧，在大多数 真核细胞膜的表面，富含糖类的周缘区称为细胞外被，保护细胞表面免受机械和化学 损伤 3、含量:一般少于10% 4、形式:糖蛋白、糖脂 5、种类:半乳糖、甘露糖、唾液酸等9种 6、作用:保护、细胞识别、细胞黏附 第二节、生物膜的特征 生物膜的两个显著的特征:1、流动性、 2、不对称性 一、流动性 1、流动性:膜脂和膜蛋白处于不断的运动状态 2、是细胞进行生命活动的必要条件 3、生理常温时生物膜为液晶态 4、膜脂分子的运动:侧向、翻转、旋转、弯曲、伸缩震荡 5、 膜蛋白在质膜中的运动 )方式: 侧向——细胞融合实验证实 1 旋转——不需要消耗能量 2)特点:速度慢、区域性、 3)并非所有的蛋白分子都能在膜上运动。 6、影响膜流动性的因素 1)脂肪酸链的饱和程度和长度——不饱和脂肪酸越多 流动性越大 烃链越短 2)胆固醇的含量——有双重作用:与磷脂结合，限制磷脂的运动 将磷脂隔开，使其更易流动 正常含量，防止烃链的凝集 防止在温度降低时流动性突然降低 增加膜的稳定性 3)卵磷脂和鞘磷脂的比值:比值越高，流动性越强。 4)膜蛋白的影响:嵌入疏水区，降低流动性 )其他:环境温度、离子强度、酸碱度等。 5 二、膜的不对称性 1、不对称性:质膜内外两层的结构和功能有很大差异 2、膜脂分布的不对称性:相对性不对称，含量上的差别 3、膜蛋白分布的不对称性: 4、糖基均分布在非胞质面:绝对的不对称 一、片层结构模型 二、单位膜模型 三、液态镶嵌模型(fluid mosaic model) 1、 膜中的脂双层构成膜的连续主体——有序的分子排列 液体的流动性 2、 蛋白质分子以各种形式与脂双层结合。 3、 膜是一种动态的、不对称的、具有流动性的结构 4、 不足:无法解释质膜在变化过程中怎样保持膜的相对完整和稳定。 四、脂筏模型 1、 膜各部分脂质的分布不均一。 2、 脂筏(lipid rafts):膜中富含胆固醇和鞘磷脂的微区中聚集一些特定的蛋白质，这些 区域比膜的其他部分厚，更有秩序且较少流动，称为脂筏。 3、 脂筏存在于质膜和高尔基体膜上。 4、 质膜上的脂筏与caveolin-1结合后形成小窝caveole。 5、 作用:在膜内形成一个有效的平台 在信号转导、细胞蛋白质转运等方面起作用。 第四节 细胞膜与癌变 1、将肿瘤称为膜分子病 2、生物膜在癌变中的作用 1) 膜表面糖链残缺，黏着力下降，接触抑制的丧失。 2) 纤连蛋白等糖蛋白消失，肿瘤细胞易脱落，浸润并转移。 3)含唾液酸的糖蛋白明显增加，逃避免疫监视 4)通透性增加，受体介导的胞吞作用增强，物质转运活性增强 5)表面常有所改变(微绒毛、变形等)3、接触抑制:离体的细胞培养时，正常细 胞生长到彼此相互接触的密度时铺满成层后便停止生长分裂，称为接 触抑制。 细胞失去接触抑制。 第六章 物质的跨膜运输与信号转导 第一节 小分子物质的跨膜转运 一、细胞膜是选择性半透膜 二、被动扩散 1、不需要膜蛋白协助，将物质顺浓度梯度(由高到低)进行跨膜转运的方式，不需要 细胞提供能量。 2、 运输物质: 非极性小分子(如HO、尿素、甘油) 2 不带电的极性小分子(如O、CO、乙醇)。 22 3、分子量越小，脂溶性越强，越容易通过脂双层。 膜运输蛋白 三、 1、膜运输蛋白:细胞中负责转运各种极性分子和离子如葡萄糖、氨基酸、核苷酸及细 胞代谢产物的膜蛋白称膜运输蛋白。 2、通常每种膜转运蛋白只转运一种特定类型的物质 3、都是跨膜蛋白 4、分两类:载体蛋白(carrier protein)——改变构象 介导被动和主动运输 通道蛋白(channel protein)——形成水性通道 只介导被动运输。 四、易化扩散 (一)、载体蛋白介导的 1、 定义:不耗能，需要膜运输蛋白的帮助，顺浓度梯度或电化学梯 度方向向低浓度方向的跨膜转运过程。 2、运输物质:极性分子和离子，如葡萄糖、氨基酸、核苷酸等。 3、特点:特异性 饱和现象 竞争性抑制 4、举例:红细胞膜上葡萄糖(G)转运蛋白 (二)、通道蛋白介导的 1、典型的通道蛋白——离子通道 +、、+2、转运的物质:Na、K等 3、离子通道的特点:快速 高度的选择性 非持续性开放 不需要消耗能量 4、离子通道的类型 配体闸门通道——神经递质、信号分子 电压闸门通道——膜电位变化时开放 五、主动运输 1、定义:消耗细胞代谢所产生的能量，借助细胞膜上载体蛋白的帮助，将物质逆浓度 梯度或电化学梯度运输的方式。 2、特点:逆浓度或化学梯度 需要消耗能量 需要特异性载体蛋白介导 + ++ +3、Na-K泵(Na-KATP酶) 1)是一种离子泵，是细胞膜上进行主动运输的一种载体蛋白。它能主动地逆电化，，++学梯度把Na泵出细胞外，把K摄入细胞内以维持细胞内高K低Na的离子梯 度。 ++水解一个ATP分子可排出3个Na，摄入2个K。 2)维持细胞内高K，低Na， 的离子梯度 3)间接效应:a.调节细胞容积 b.物质吸收 c.维持细胞内高浓度的K，(核糖体合成蛋白 质和糖酵解的必要条件) d.产生膜电位 2+ 2+ 4、Ca泵(Ca-ATP酶) +5、H-ATP酶 六、协同运输 1、协同运输:一些转运蛋白在转运一种溶质分子时，同时或随后伴随转运另一种溶质分子。 2、分为 同向运输 逆向运输 + 3、同向运输:见于从肠腔和肾小管主动转运葡萄糖，同时伴有Na的同向转运 + 葡萄糖的主动运输是由其他物质如Na的离子梯度中贮存的能量驱动的。而 不是直接由ATP水解来驱动的。 + + Na-K泵间接驱动这种转运过程。 4、上皮细胞中载体蛋白在细胞膜上的分布是不对称的。 第九章 细胞的内膜系统 1、内膜系统:细胞内膜构成了多种形态各异、功能不同的膜性细胞器。其中有些膜性细胞 器在结构、功能和形态发生上具有一定联系，构成一个完整系统的一些膜性细 胞器，相对于细胞膜而言，将它们统称为内膜系统，包括核膜、内质网、高尔 基体、溶酶体、过氧化物酶体及其它各种小泡。 2、是真核细胞特有的结构 3、各种细胞器有相对固定的比邻关系 4、能使各部分互不干扰、高度协调地进行各种代谢活动 5、主要功能是进行蛋白质的合成和分选 一、核糖体(ribosome) 1、类型 70S的核糖体:原核细胞、真核细胞的线粒体、 叶绿体 80S 的核糖体:线粒体、叶绿体以外的真核细胞 2、化学组成 RNA :60% 蛋白质:40% 3、结构、存在形式 大亚基 小亚基 一般以游离状态存在，只有当小亚基与mRNA结合后，大亚基才与小亚基结合， 形成完整的核糖体 4、分布:原核细胞:大部分核糖体游离存在 真核细胞:大部分为附着核糖体 附着核糖体—附着在粗面内质网上 合成水溶性(分泌蛋白、驻留蛋白) 和膜蛋白 游离核糖体—游离在细胞质中 合成基础性蛋白(结构蛋白、血红蛋白) 多聚核糖体:多个核糖体结合到一个mRNA链上成串排列，形成蛋白质合成的功 能单位。 附着和游离核糖体的结构和功能相同，不同在于合成蛋白质的种类不同。 6、功能:蛋白质的合成。 二、内质网(ER) (一) 形态结构 1、单位膜围成的，由连续的小管、小泡和扁囊组成的三维网状膜系统 。一些细 胞中这三种结构单位并非全部存在。 2、内质网腔与核膜腔相通 3、以细胞核为中心向四周铺展 4、在内膜系统中占中心地位。 (二)类型 粗面内质网(rER) 分泌蛋白合成旺盛的细胞(胰腺和浆细胞)—丰富 分化程度低(肿瘤/胚胎细胞)—较少 可根据粗面内质网结构的复杂程度，判断细胞的功能状态和分化程度 滑面内质网(sER) 扁囊结构少见，多数细胞中不丰富。 肝细胞、睾丸间质细胞、肾上腺细胞和骨骼肌细胞中丰富 通常两种类型同时存在，特殊情况——胰腺外分泌细胞:rER 肌细胞: sER (三)化学组成 1、微粒体——内质网与细胞内其它成分连接复杂，不易分离， 当细胞匀浆而被破坏后，内质网断裂成许多封闭小泡。 a具备合成蛋白、脂类和蛋白糖基化等内质网的基本功能，在研究中可与内质网 同等看待。 b分为 粗面微粒体:来源于粗面内质网 滑面微粒体:来源不易确定 滑面内质网、高尔基体、线粒体、细胞膜 2、脂类 蛋白质——比细胞膜中的含量高 包括 分子伴侣蛋白 酶类:葡萄糖-6-磷酸酶(内质网的标志酶) (四)内质网的功能 , 与蛋白质的合成 , 参与脂类的合成(sER)、膜的生成 , 参与糖代谢:主要在滑面内质网上进行是否参与糖原的合成有争议 主要参与糖原的分解解毒作用:主要由肝细胞的滑面内质网完 成。 将一些外来药物和脂溶性代谢产物经氧化、还原、水解和结合等过 程进行解毒。 存在与解毒作用有关的酶类——细胞色素P450 NADPH-细胞色素c还原酶 , 物质运输与交换 , 机械支持 (五)内质网参与蛋白质的合成。 l、主要由粗面内质网完成 2、合成蛋白的种类 分泌蛋白(酶、多肽类激素等) 驻留蛋白:溶酶体中的酸性蛋白 内质网、高尔基体等的固有蛋白 膜蛋白:细胞膜、内质网膜、高尔基体膜、 3、合成过程: 1) 核糖体由信号肽引导结合于内质网膜上 信号肽(signal peptide):由位于分泌蛋白mRNA5’-端起始密码之后的信号 密码编码 是最先被翻译的氨基酸序列 由16-26个疏水氨基酸组成， 可指导分泌蛋白在粗面内质网上的合成 一旦进入内质网腔，即被信号肽酶切掉 信号假说(参见教材) 2) 核糖体合成的多肽链经膜穿入内质网腔 3) 分子伴侣在内质网腔内对蛋白质进行折叠 分子伴侣:一些蛋白质能特异识别新生肽链或部分折叠的多肽 并与之结合，帮助这些多肽进行折叠、装配和转运但本身不参与最终 产物的形成，只起陪伴作用的蛋白质 包括:蛋白二硫异构酶(PDI) 结合蛋白(Bip) 葡萄糖调节蛋白94 C末端有KEDL序列， 4) 新合成的蛋白质在内质网腔内进行糖基化(N-连接) 由内质网腔转运到高尔基体和溶酶体的蛋白质均为糖蛋白。 糖基化的方式以N-连接为主 5) 内质网合成的蛋白质经芽生的小泡向高尔基体转运 6) 蛋白质在高尔基体内加工、分选并运送到细胞膜或溶酶体等靶结构。 (六)内质网的病理改变(自学) 三、高尔基体(Golgi body) 1、结构:单位膜围成的膜性细胞器 基本结构单位——扁平囊泡、小泡、大泡 2、有极性的细胞器 生成面——面向细胞核、内质网 分泌面——面向细胞膜一侧 3、化学组成 蛋白质:含量低于内质网膜、高于细胞膜 包括多种酶类 标志酶:糖基转移酶 脂类 4、功能不同的三个组成部分 顺面高尔基网状结构——分选内质网新合成的蛋白质、脂类 大部分转入高尔基中间膜囊 小部分返回内质网 高尔基中间膜囊——糖基化 反面高尔基网状结构——蛋白质的分选 5、功能 1)参与细胞的分泌活动 2)参与蛋白质、糖脂等的加工和修饰 3)对内质网合成的蛋白质加工修饰后，通过分选运送到不同的结构 4)水解和加工蛋白质 5)参与膜的转化活动。 6、高尔基体对蛋白质进行糖基化的生物学意义 使蛋白质在成熟过程中能正确折叠、增强蛋白质的稳定性。 利于分类包装。 保证糖蛋白从ER到高尔基体的单方向转运 四、溶酶体(lysosome) 1、一种膜性细胞器 2、形状:圆形、卵圆形 3、内部含有60多种酸性水解酶。 4、内部酸性环境的保持依靠质子泵。 5、膜蛋白的高度糖基化可以使溶酶体膜免受溶酶体内蛋白酶的消化。 6、类型 内体性溶酶体——运输小泡和内体合并 吞噬性溶酶体——内体性溶酶体+被水解的吞噬底物 分为 自噬性 异噬性 7、溶酶体的形成:参见教材 8、残余小体:一些未被消化分解的物质存留在溶酶体内，形成电镜下电子密度较高、色 调较深的残留物。 包括:脂褐质、含铁小体、多泡体、髓样结构 9、功能:消化细胞内吞的物质 分解细胞自身的物质 参与激素的形成 参与器官的发育:青蛙尾部消失过程中除了溶酶体起作用外，细胞凋亡机制也 起作用。 10、溶酶体相关的疾病 先天性溶酶体病 矽肺 类风湿性关节炎 肿瘤 五、过氧化物酶体(peroxisome) 1、膜性细胞器 2、含有多种酶，过氧化氢酶为标志酶 3、功能:代谢解毒 4、过氧化物酶体和溶酶体的区别 电镜下:尿酸氧化酶等常形成晶格状结构 酶的种类:多种氧化酶类 pH:7左右 标志酶:过氧化氢酶 5、发生:已有的过氧化物酶体分裂而成。 蛋白质:由核基因编码 在细胞质基质中合成 合成后转运到过氧化物酶体 膜脂:在内质网上合成 通过膜泡运输或磷脂交换蛋白转运而来 六、蛋白质分选的四种基本类型 蛋白质的跨膜转运: 膜泡运输 选择性的门控转运:核孔复合体 细胞质基质中的蛋白质转运:与细胞骨架密切相关 第十章 囊泡运输 囊泡运输(vesicular transport):囊泡以出芽方式从细胞的一种内膜细胞器脱离后又与另一个 内膜细胞器发生融合，这个转运过程称为囊泡运输。 是真核细胞物质运输的一种主要方式 是一个双向、有序的过程 一、囊泡及其转运的分子基础 1、囊泡:囊膜——来源于细胞膜、细胞器膜 表面有特异性的包被蛋白 、囊泡的分类:根据包被蛋白 2 网格蛋白包被囊泡——细胞膜 内体 高尔基体 内体 高尔基体 溶酶体(偶见) COP?包被小泡———粗面内质网 高尔基体 COP?包被小泡———高尔基体 粗面内质网 其它 3、网格蛋白包被囊泡的转运 1) 网格蛋白(clathrin)——囊泡表面覆盖的一层纤维丝状蛋白，有三个臂(三条腿)， 每条腿含有一条重链和一条轻链。提高囊泡的表面张力。不具备捕获能力 2) 网格蛋白包被囊泡的转运过程: 被转运分子与质膜上的受体结合 被接合素(adaptin)捕获 接合素催化网格蛋白聚合 在动力素和网格蛋白的参与下，囊泡形成 动力素在将囊泡口收缩 囊泡与细胞膜脱离。 三、胞吞作用(endocytosis) 1、大分子物质(细菌、病毒、生物大分子颗粒)进入细胞的一种方式 2、需要消耗能量 3、分为 吞噬作用:固态物质 主要执行清除任务 巨噬细胞、单核细胞、多形白细胞 胞饮作用:液体、溶质 大多数细胞中不断进行 摄取大分子物质的主要途径 主要由网格蛋白包被小泡完成 5、受体介导的胞吞作用 1) 定义:有些大分子物质如LDL，进入细胞必须先与膜上特异性的受体识别并结 合，然后通过胞吞作用进入细胞内的特异性的内吞方式 2) 过程(以LDL为例参见教材) 3) 特点:138页最后一段。 4) 维生素B12、铁离子等 四、胞吐作用 与胞吐作用相反，消耗ATP。 分泌形式:1.固有分泌: 持续不断地分泌出去 2.受调分泌:合成后的大分子贮存在分泌颗粒中，接受刺激后外吐。 见于特化的分泌细胞 第十一章 线粒体(mitochondrion) 提供细胞生命活动所需能量的95%。 有细胞“动力工厂”之称 一、形态结构、化学组成 1、形态:光镜下——线状、颗粒状 2、数量分布:不同类型细胞线粒体的数量相差很大。 多分布在细胞内能量需求大的区域。 3、结构: 电镜下: 双层封闭性膜囊结构 1) 结构和功能不同的两层膜 内膜:胞质与线粒体基质之间主要的通透屏障，内表面有负责多种功能的蛋白 外膜 内膜 厚度 7nm 5nm 表面 光滑、平整 向内突起、折叠 蛋白质含量 低，50% 高，76% 通透性 大，〈5000的小分子可自由小，〉150不能通过 通过 包括ATP合酶、转运蛋白、电子传 递链 2)膜间腔:内外膜间的间隙 充满无定形液体，含有多种可溶性酶、底物和辅助因子 转位接触点——电镜下观察到线粒体内外膜相互接触、使膜间隙变窄的部 位。利于物质运输。 3)基质腔:内膜包裹形成的 含均质性的胶状物， 主要成分——蛋白质(酶)、脂类 线粒体DNA，线粒体RNA，线粒体核糖体(相对独立的遗传信 息复制、转录和翻译系统) 4)基粒(elementary particle):线粒体内膜内表面上排列规则的球形小体，是将呼 吸链电子传递过程中释放的能量用于使ADP生成ATP的重要部位，它的化学 本质是ATP合酶 分成3个部分 头部——合成ATP的关键装置 柄部——调控质子通过 基部——嵌入内膜，是质子流向头部的通道 4、化学组成: 蛋白质: 占65%-70%，含酶最多的细胞器(120种) 不同部位的标志酶 内膜——细胞色素氧化酶 外膜——单胺氧化酶 基质——苹果酸脱氢酶 膜间腔——腺苷酸激酶 脂类: 占25%-30% 特点:含丰富的心磷脂、少量的胆固醇 DNA/RNA/核糖体: 辅酶:如CoQ , FMN, FAD, NAD+ 维生素和无机离子: 第二节、线粒体的半自主性 线粒体是动物细胞中除细胞核之外唯一含有遗传物质的细胞器，并且有自己的蛋白翻译系统。 一、线粒体DNA 1、有种属差异 2、动物细胞mtDNA多为1.6kb, 比核DNA小100-1000倍 3、人mtDNA 9大小:16569bp，比核3*10小得多 结构:双链、环状DNA，不同于核的双链螺旋结构 共有37个基因 22个编码tRNA (核有 个) 2个编码rRNA 13个编码蛋白质 不同于核基因组的特点: 1. 结构紧密，基因内部不含内含子，没有或很少有非编码序列 2. 不与组蛋白结合，核内DNA是与组蛋白结合并包装成染色质 3. 两条链的编码不对称:37个编码序列中28个位于H链上 4. 密码子与反密码子的配对是不严格的:只需22种tRNA 5. 遗传密码的意义有所不同: 二、线粒体内蛋白质的来源: 外源性:90% 依赖于核DNA编码，并在胞质内合成。 对核编码蛋白的转运 1)导肽:将被转运入线粒体的蛋白质(前体蛋白)的N-末端都有一段 20-80个氨基酸组成的序列，称为~。识别、牵引的作用 2)过程:前体蛋白去折叠(分子伴侣如胞质HSP70参与)，在导肽的作 用下与输入受体结合 前体蛋白到达转位接触点，穿膜进入线粒体的基质腔。 前体蛋白重新折叠(线粒体HSP70、60、10参与)，水解酶将 导肽裂解。 内源性:很少，10% 是完成电子传递和氧化磷酸化必须的。 线粒体内合成，不运出线粒体 需要的tRNA,mRNA和核糖体是专用的 4、线粒体遗传系统与核遗传系统的相互关系 1)线粒体中含有DNA、各种RNA、核糖体和蛋白质合成所需的酶类，它的遗传系统能 表达和进行蛋白质的合成。有一定的自主性。 2)线粒体合成的蛋白质只能满足本身结构和功能的极小一部分需求，它的遗传系统的 表达在很大程度上依赖于核遗传系统。因为mtDNA复制，转录和翻译过程中所需的 酶类都是由核基因组指导合成，并转运到线粒体内。 所以，线粒体只能是一个半自主性的细胞器。 3)细胞核遗传系统也会受到线粒体遗传系统表达状态的影响。 三、线粒体与氧化磷酸化 1 、细胞呼吸(细胞氧化)——在细胞内特定的细胞器(主要是线粒体) 内，在O2的参与下，分解各种大分子物质，产生CO2, 同时分解代谢所释放出的能量储存于ATP中的过程 2、细胞氧化的四个阶段 糖酵解——细胞质中进行 乙酰CoA的生成——线粒体基质 三羧酸循环——线粒体基质 氧化磷酸化——线粒体内膜 四、细胞的能量转换:化学渗透假说 当电子沿呼吸链传递时，所释放的能量将质子从内化学渗透假说 膜基质侧泵至膜间隙，由于线粒体内膜对离子是高度不通透的，从而使膜间隙的质子浓度高于基质，在内膜的两侧形成pH梯度及电位梯度两者共同构成电化学梯度。 质子沿电化学梯度穿过内膜上的ATP酶复合物流回基质，使ATP酶的构象发生改变，将ADP和Pi合成ATP。五、线粒体与疾病 1)线粒体疾病的特征 高突变率 多质性 母系遗传 阈值效应 第十二章 细胞骨架 细胞骨架: 真核细胞中由蛋白纤维交织而成的立体网架结构、充满细胞质空间，与细胞膜和 核膜存在一定的结构联系，参与细胞一切重要的生命活动。包括三种类型的蛋白质纤维 微管(microtubules) 微丝(microfilaments) 中间丝(intermediate filaments) 第一节 微管 一、结构、化学组成 1、中空的小管 2、分子组成:微管蛋白(tubulin) 3、基本构件:微管蛋白α和β形成的异二聚体 异二聚体头尾相接——原纤维——侧面扩展成片——片层达13根原纤维 时，合拢为一段微管——在两端不断加上异二聚体——微管延长。 4、有极性 5、存在形式 单管——主要的形式 稳定，低温、钙离子能使之解聚 二联管——分布在鞭毛、纤毛 较稳定 三联管——中心粒、鞭毛和纤毛的基体中 二、微管结合蛋白(microtubule-associated protein, MAP) 1、微管中的一些结合在微管表面，与微管共存并参与微管装配的辅助蛋白， 、包括:MAP-1、2，tau、MAP-4 2 3、分布:神经细胞 MAP-1、2——胞体和树突中 tau——只存在于轴突中 神经细胞、非神经细胞——MAP-4 4、功能:调节微管的特异性，将微管连接到特异性细胞器上 三、微管的组装 1微管组织中心(MTOC, microtubule organizing center) 微管的聚合是从特异性的核心形成位点开始的，这些核心形成位点主要位于中心体和 纤毛的基体中，称为 微管 正端——远离 MTOC 负端——指向MTOC 作用:帮助微管的装配过程中的成核作用 所有微管组织中心都具有γ微管球蛋白 γ微管球蛋白:可聚合成环状复合体 帮助α和β球蛋白聚合 受细胞周期调控 2、影响微管组装、去组装的因素 GTP和微管蛋白浓度是调节微管组装的主要物质 压力、温度、酸碱度、离子浓度等 药物:秋水仙碱和长春新碱可抑制微管的聚合 紫杉醇可促进和稳定微管的组装 Nocodazole抑制微管的聚合 四、微管的主要功能 (一)、构成细胞内的网状支架，支持和维持细胞的形态 (二)、参与中心粒、纤毛和鞭毛的形成 1、中心粒:9组三联管围成的圆柱形小体 属于“9+0” 存在与动物细胞和低等植物细胞中 成对出现，相互垂直 主要功能是与微管蛋白的合成和聚合有关;参与细胞分裂，存在ATP 酶，为细胞运动和染色体移动提供能量 2、纤毛和鞭毛 微管形成的细胞表面特化结构，是能收缩的丝状细胞附属物 来源和结构基本相同，不同点在于数量和长度 大多数属于 “9+2”类型 (三)、参与细胞内的物质运输 主要由微管马达蛋白完成。 马达蛋白的定义:167页 (四)、维持细胞内细胞器的定位和分布 (五)、参与染色体的运动，调节细胞分裂 微管是构成有丝分裂器的主要成分 (六)、参与细胞内的信号传导 第二节 微丝 一、组成: 基本单位——肌动蛋白(actin) 存在方式——球状肌动蛋白 纤维状肌动蛋白 可弯曲性蛋白纤维，双螺旋结构/单根， 具有极性，位于细胞膜内侧——细胞皮质区 二、微丝结合蛋白:参与微丝的组装、微丝功能的正常发挥 +2+三、组装:需ATP和K、Mg存在下 成核期(核心:三聚体)、生长期、平衡期 四、影响组装去组装的因素 1、球状肌动蛋白浓度 ,、ATP:ATP-actin对微丝纤维末端的亲和力高 ADP-actin对纤维末端的亲和力低，容易脱落 ,、+等离子的浓度 K 4、药物:细胞松弛素——抑制微丝的聚合 鬼笔环肽——抑制微丝的解体 5、微丝结合蛋白。 五、微丝的主要功能 1、构成细胞的支架，维持细胞的形态 细胞皮层:细胞膜下，由微丝和微丝结合蛋白组成网状结构 微丝不能单独发挥作用，必须形成网络或束状结构才能发挥作用。 细胞的特化结构微绒毛和应力纤维是由微丝形成的。 2、参与细胞的运动 3、参与细胞分裂 大量极性不同、平行排列的微丝构成收缩环 4、参与肌肉的收缩 肌肉收缩的结构单位肌小节中的细肌丝中包含有肌动蛋白 5、参与细胞内物质的运输: 与微管一道进行细胞内物质运输 6、参与细胞内信号传递 第三节 中间丝 一、结构最复杂、最坚韧。二、构成:由不受细胞松弛素和秋水仙素的影响。一类形态上非 纤维状蛋白质组成 常相似，而化学组成上有明显差异的 各种中间丝蛋白的区别在于头部和尾部的长度和序列 三、装配特点:中间丝的横切面上有32个蛋白单体。 两端是相同的，是非极性的结构。 装配与温度和蛋白浓度无关，不需要ATP或GTP。 四、中间丝的功能 1、形成细胞内一个完整的网状骨架系统 2、为细胞提供机械强度支持 3、参与细胞连接 4、参与细胞内信息的传递、物质的运输 5、维持核膜的稳定:核纤层蛋白是中间丝的一种。 6、参与细胞分化:微管和微丝在各种细胞中都是相同的，而中间纤维蛋白的表达 具有组织特异性，与细胞分化的关系非常密切。 微丝、微管、中间丝的比较:参见181页表12-3 第四节 细胞骨架与疾病 一、细胞骨架与肿瘤 1、肿瘤细胞中细胞骨架的改变 结构破坏，微管解聚 某些成分改变，可导致运动能力增强。 2、细胞骨架与肿瘤的诊断 不同类型的中间纤维严格分布在不同类型的细胞中，用于区分上皮细胞、肌细胞、间质细胞、胶质细胞、神经细胞。 即使转移后，肿瘤细胞继续表达其来源细胞的特征性中间纤维类型 用于区分肿瘤细胞的类型及来源 3、细胞骨架与肿瘤的治疗 细胞骨架可作为肿瘤治疗的靶点 长春新碱、秋水仙素、紫杉酚等——通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡 细胞松弛素——抑制微丝的聚合，使微丝解聚，抑制各种依赖于微丝的运动 第十三章 细胞核 是真核细胞内最大、最重要的细胞器。细胞遗传和代谢的调控中心。 它的出现使遗传物质的转录和翻译过程在不同的时间和空间上进行。 所有真核细胞除哺乳动物成熟的红细胞外，都含有细胞核。 形状:多种多样，与细胞形态相适应。肿瘤细胞中有畸形核。 数目:一个或多个。 位置:中央，偏于一侧(腺细胞)球形或卵圆形 结构:周期性。间期细胞核主要由核被膜、染色质(体)、核仁及核基质组成。 第一节 核被膜的结构和功能 核被膜是由不对称的双层单位膜构成。 (一)外核膜:面向胞质的一层膜， 表面常附有核糖体颗粒，并与内质网相连通 粗面内质网的一个特化区域 形态和生化性质上与粗面内质网相似 (二)内核膜 面向核质的一层膜 表面光滑，无核糖体颗粒附着 紧贴其内表面有一层致密的纤维网络结构，称作核纤层。 (三)核间隙:与内质网腔相通。 (四)核孔 1、核孔:内外核膜融合形成 代谢增殖活跃的细胞(肝、肾、肿瘤细胞等)中，数目较多。 大小是可调节的。 2、核孔复合体:电镜下观察发现，核孔并非单纯由内外两层核膜融合形成的小孔，而 是由蛋白质构成的复杂结构。 中央有一个水性通道——小于孔径的分子通过被动转运自由扩散 具有特异性的受体，通过主动运输完成对特定蛋白质的转运。 3、核孔复合体模型:捕鱼篓式 胞质环 核质环 辐 中央栓 4、核孔复合体的功能:介导细胞核与细胞质间的物质运输 出核—— RNA、核糖体的大、小亚基 入核——遗传物质复制、转录所需的酶类 组蛋白、核糖体蛋白 三、核被膜的主要功能 1、区域化作用:相对稳定的内环境 遗传信息表达得到精确的调控 2、生命物质的合成:附着的核糖体参与蛋白质的合成 3、控制胞核与胞质之间的物质交换: 水分子 +++++-Ca、K、Mg、Cl等离子 自由通过 5kD以下的小分子(单糖、氨基酸、核苷酸) 核糖体大、小亚基，RNA聚合酶等——通过主动运输进行双向性运输。 是一个信号识别、载体介导的过程 入核——DNA聚合酶、核糖体前体、核蛋 白等 出核——RNA、核糖体亚基等 亲核蛋白:是一类在细胞质合成，输入细胞核内发挥作用的蛋白质。 亲核蛋白: 有核输入信号(NIS)——只存在于核蛋白中 可位于多肽链的任何部位 富含带正电荷的氨基酸 进入细胞核后不被切除 第二节 染色质和染色体 染色质(chromatin):间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性 复合结构，是间期细胞遗传物质存在的形式，能被碱性染料染色，呈伸展、分散 的细网状结构 染色体(chromosome):是指细胞在有丝分裂或减数分裂过程中，由染色质聚缩而成的棒 状结构。 两者都是遗传物质在细胞中的存在形式，主要的成分均为核酸和蛋白质，是同一物质在不同细胞时相中所表现出的不同形态，主要的区别在于包装程度不同 间期:染色质，伸展成细丝状 分裂期:浓缩、折叠成短棒状小体 在真核细胞的细胞周期中，大部分时间是以染色质的形态存在的。 一、染色质与染色体的化学组成 核酸:DNA RNA 蛋白质:组蛋白 非组蛋白 1、染色质DNA , 携带着遗传信息 , 性质稳定，数量恒定。 , 在真核细胞中，每条未复制的染色体是由一条线形的DNA分子形成的。 , 染色体DNA必须含有的以下3个序列 着丝粒序列——1个 端粒序列——2个 复制起始点序列——多个 2、组蛋白(histone) 真核细胞特有的蛋白质 构成染色质的主要蛋白成分 碱性，与DNA非特异性结合，可抑制DNA的复制与转录 核小体组蛋白:H2A、H2B、H3、H4 进化上保守，无种属或组织特异性。 帮助DNA卷曲形成核小体 H1组蛋白: 进化上的保守性相对较小 构成核小体时起连接作用 与染色质的高级结构的形成有关。 3、非组蛋白(nonhistone) , 酸性蛋白质。 , 含量少，种类多， , 与DNA序列特异结合 , 具有种属和组织特异性。 , 构成染色体的骨架,参与高级结构的构建。 4.RNA 二、常染色质和异染色质 常染色质 异染色质 euchromatin heterochromatin 状态 松散，细纤丝，螺旋化程度低 紧密、高度螺旋化 电镜下 浅亮 深暗 位置 核中央 核膜内边缘或核仁附近 功能 活跃的转录 转录不活跃 常染色质常位于染色体臂上，异染色质在分裂期常位于着丝粒、端粒或染色体臂的凹陷 处。 常、异染色质虽然在以上诸方面存在差异，但其在化学性质上没有什么差别，只是染色质的 两种不同的存在状态。它们在结构上是连续的，常染色质在一定条件下可以转变为异染色质， 如雌性哺乳类体细胞的核内，两条X染色体之一在发育早期随机发生异染色质化而失活，在 上皮细胞核内，这个固缩的X染色体称为性染色质或巴氏小体 三、染色质的包装 (一)四级结构模型 1、一级结构——由DNA与组蛋白包装成核小体，在组蛋白 H的介导下核小体彼此连接1 形成直径约10nm的核小体串珠结构。 核小体(nucleosome) 是染色质的基本结构单位。 组成 约200bp的DNA片段 一个组蛋白八聚体——HA、HB、H和H各二分子 2234 一分子组蛋白 H1 结构 核心:约146bp的DNA片段缠绕八聚体1.75圈 连接DNA:位于两个相邻核小体之间，平均大小为60bp 组蛋白 H:和八聚体结合 1: 2、二级结构——螺线管 在H组蛋白存在的情况下，核小体串珠螺旋盘绕，每圈6个核小体，形成外径为30nm1 的螺线管。 3、三级结构——超螺线管 螺线管进一步螺旋化形成直径为400nm的圆筒状结构 4、四级结构——染色单体(chromatid) 超螺线管进一步折叠形成 压缩7倍 压缩6倍 压缩40倍 压缩5倍 DNA 核小体 螺线管 超螺线管 染色单体 (二)袢环结构模型(参见教材193页内容) DNA 核小体串珠 螺线管 袢环，沿染色体纵轴向外伸出，袢环的基部连在 染色单体中央的非组蛋白支架上 微带:每18个袢环放射平面排列结合在核基质上 106个微带沿纵轴构建成染色体 四、染色体的结构和特征(分裂中期) 1、染色单体(chromatid):中期的染色体是由两条仅在着丝粒处相连的染色单体组成，它 们互称为姐妹染色体。 2、着丝粒和动粒: 主缢痕:着丝粒处一个向内凹陷的缢痕，光镜下相对不着色， 着丝粒:两条染色单体相连的中心部位，一段高度重复的DNA序列，不与组蛋白结合， 而与纺锤丝结合参与染色体向两极的移动。 着丝粒的位置是鉴别染色体类型的一个重要标志。将染色体分为4类 中央着丝粒染色体 亚中着丝粒染色体 近端着丝粒染色体 端着丝粒染色体 3、染色体臂: 着丝粒将染色单体分为两臂:短臂(p)和长臂(q)。 4、次缢痕:近端染色体的短臂上，是主缢痕以外的狭窄部位 ， 常与核仁的形成有关——核仁组织区(NOR) 。 5、随体: 染色体末端、与次缢痕相连的棒状小体，由异染色质组成。是识别染色体形态的 重要特征之一 ，位于13，14，15，21，22 号染色体上。端粒 6、端粒(telomere): 是染色体末端的特化结构，通常由富含G的短的串连重复序列组成。哺乳类动物端粒的 重复序列中的保守序列是5’-TTAGGG-3’。 由端粒DNA和端粒蛋白构成。 其生物学作用是维持染色体的稳定，防止末端彼此粘着。 正常染色体每复制一次，端粒序列减少50-100bp 是细胞的生命钟，当端粒缩短到一定程度，细胞衰老、死亡。 端粒酶(蛋白质+与端粒DNA互补的RNA)，能合成端粒DNA 正常细胞——缺乏端粒酶活性 肿瘤细胞——端粒酶被激活，逃避死亡而获得永生性。 五、染色体的数目、核型和带型 1、染色体数目:体细胞中因染色体成对出现而称为二倍体，用2n表示。 2、核型(karyotype):一个体细胞中的全套染色体按形态特征进行分组排列，构成核型。 根据相对大小、着丝粒的位置、臂的长短、随体的有无 把正常人的染色体分为A-G七组。 表示方法——正常男性:46，XY 正常女性:46，XX 3、带型: 染色体显带技术;利用荧光染料及其他化学物质，对染色体的不同碱基序列及区域进 行染色，使染色体显出明暗不同的带纹， 每条染色体都有自己独特的带型，故可利用染色体显带技术对染色体进行分类、编号。 第三节 核纤层和核骨架 一、核纤层(nuclear lamina) 1、真核细胞中内核膜下的纤维状蛋白网，一侧结合于内核膜，一侧结合于染色质。分三 种核纤层蛋白(A、 B、C )属于中间丝。 2、化学组成:核纤层蛋白(一种中间纤维)。 3、功能:与核膜重建、染色质凝集有关 参与细胞核重建、DNA的复制和基因的表达。 第四节 核仁(nucleolus) 是真核细胞间期核中最显著的结构。 形态:(光镜)均质的球体、无膜包被 数目:1-2个、多个 位置:不固定 在生长旺盛的细胞中，发生“核仁趋边”的现象。 化学组成:蛋白质 RNA DNA (rRNA的基因)3、间期核仁在电镜下可见三个区域 纤维中心:每一个rRNA基因的袢环为一个核仁组织者 人类rRNA基因位于5条(13、14、15、21、22号)染色体的次缢痕，在二 倍体细胞中10条染色体上分布有rRNA基因，它们共同构成的区域称为核 仁组织区。 致密纤维成分 颗粒成分 第五节 细胞核与病变 与正常细胞相比，肿瘤细胞核的特点 1、 较高的核质比 2、 核结构呈异型性:核被膜增厚且不规则，表面突起或凹陷 核分叶、核出芽 3、 染色质:聚集在近核膜处，分布不均匀，呈粗颗粒状。 4、 核仁:大而深染，数目增多等代谢活跃、生长旺盛的特点。 5、 核孔:数目显著增加。 6、 组蛋白的磷酸化加强，从而有利于转录进行。 、 染色体异常:数目——超二倍体、亚二倍体、多倍体 7 结构——易位、缺失、重复等。 第十六章 细胞增殖和细胞周期 细胞增殖:在细胞的生命过程，物质准备和细胞分裂是一个相互连续的过程 是细胞生命活动的重要特征之一。 实现方式:细胞周期 基本事件:遗传物质的复制 细胞分裂 第一节 细胞分裂 细胞分裂:细胞增殖的主要方式 具有重要的意义:遗传物质精确分配，保持细胞的遗传稳定性 生物界 中细胞分裂的主要方式 有丝分裂(mitosis) 无丝分裂(amitosis) 减数分裂(meiosis) 一、有丝分裂 (一)是体细胞分裂的主要方式 (二)特点:通过专司有丝分裂功能的结构(有丝分裂装置或纺锤体)将遗传物质精确得等 分到两个子细胞中，保证在增殖过程中遗传的稳定性。 (三)主要事件:核膜的崩解和重建 染色质凝集成染色体、染色质的重新形成 纺锤体的形成和染色体的运动 细胞质的分裂 细胞的各种合成活动完全停止。 (四)时间:相对恒定，0.5-2小时 (五)分期及各期特点 前期(prophase):1、染色质凝集成染色体(组蛋白-P 核小体—染色体袢环—染色单体) 2、核膜破裂、核仁消失 核纤层磷酸化——降解成可溶性的核纤层蛋白A、B、C——核 膜裂解成小泡与核纤层蛋白B相连，分散到细胞质中 3、分裂极的确定和纺锤体的形成 间期完成复制的中心体分别移向细胞两极 星体——中心体有微管组织中心的作用，在其周围聚集大量成 放射状排列的微管 中期(metaphase):染色体排列在细胞的赤道面上——主要标志 后期(anaphase): 1、着丝粒纵裂 2、姐妹染色单体分开并向细胞两极迁移 末期(telophase): 1、染色体解聚， 2、细胞核重新形成:核膜前体小膜泡结合到染色单体表面，小膜泡相 互融合，形成较大的双层核膜片段，然后互相融合成完整的核膜，在 核膜的形成过程中，核孔复合体同时在核膜上装配。 3、核仁重新出现 4、胞质分裂(cytokinesis)开始于后期，完成于末期 确立分裂沟的位置:与纺锤体的位置有关 在分裂沟的下方微管、小膜泡等物质聚集，构成一个环形的致密层 称为中间体 收缩环的形成:大量的肌动蛋白和肌球蛋白在在中间体处装配成微 丝并组成微丝束， (六)意义:将遗传物质DNA准确等分到子细胞中，以保持遗传的稳定性。 (七)保证染色体在细胞分裂中准确等分的机制 1、 纺锤体的形成 2、 姐妹染色单体的分开 3、 动粒与微管相连 4、 纺锤体内各种作用力的综合效果 二、减数分裂 (一)主要是生殖细胞的分裂方式 但并不是生殖细胞唯一的分裂方式 早期原始阶段生殖细胞通过有丝分裂进行增殖 成熟阶段 减数分裂形成配子细胞 (二)特点:DNA复制一次 细胞分裂两次 子细胞遗传物质含量减半，形成具有单倍体遗传物质的配子细胞。 (三)过程 减数分裂前间期:S期持续时间较长 第一次减数分裂(减数分裂I) 前期I——时间长 变化大 主要事件:染色质凝集 同源染色体之间的片段交换 分期 细线期——同源染色体配对、染色质开始凝集 偶线期——联会复合体的形成、四分体 粗线期——DNA重组和交换活跃 发生在同源非姐妹染色单体之间 双线期——交叉、 SC解体交叉端化 RNA合成活跃 终变期—— 中期I—— 后期I——同源染色体分离，非同源染色体自由组合。 每条染色体均由两条姐妹染色单体组成 末期I——染色体到达细胞两极 但多保持凝集状态 胞质分裂 减数分裂间期:两种类型 1.有一般间期细胞的基本结构特征 特点——不在进行DNA复制 没有G1、S、G2期之分 持续时间较短 2.没有回复到间期阶段，立即准备进行第二次减数分裂。 第二次减数分裂(减数分裂II):与有丝分裂相似 (四)结果 精母细胞——4个精子 卵母细胞——1个成熟的卵细胞+3个极体 原因:胞质的不对称分裂 (五)生物学意义: 1、 亲代细胞把全套的单拷贝的遗传物质传递给子细胞，使物种的遗传特点得以保持 2、 双亲的同源染色体的基因或DNA片段得以重组和交换，使后代不断出现新的变异， 为生物进化和多样性的形成提供可能。 (六)与有丝分裂的区别 三、无丝分裂 1、低等动物中常见 高等动物:上皮组织、结缔组织、肌细胞中存在 2、与有丝分裂比较:有DNA复制 核膜保持完整 染色质不凝集 3、过程(略) 4、结果:遗传物质不能等分 5、意义:速度快，分裂期间仍然能执行功能，耗能少。 第二节细胞周期 细胞周期(cell cycle):又称细胞增殖周期 细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的过程。 一、细胞周期的分期 G1期——不同类型细胞周期长短差别主要在这个时期 S期——DNA合成加倍 G2期 M期——染色体等分到两个子细胞中 二、三类具有不同增殖特性的细胞 周期中的细胞——持续分裂 造血干细胞、消化道上皮、上皮的基底层细胞 G0期细胞—也称静止期细胞暂时离开细胞周期，停止分裂，执行一定的生物学功能。 周期中的细胞向该类转化多发生在G1期 一旦得到信号指使，快速返回细胞周期 结缔组织中的成纤维细胞、淋巴细胞、肝细胞、肾细胞 终末分化细胞——分化程度高，一旦生成后，则终生不在分裂 神经细胞、横纹肌细胞，血液多型核细胞、 很难界定 三、细胞周期的研究方法 细胞周期时间的长短:体内——不同类型细胞的细胞周期长短差别很大 体外——细胞来源 外界环境(一定范围内温度高，细胞分裂增殖的速度加快) 1、 细胞同步化(cell synchronization) ) 定义:自然发生或人为造成的使细胞群体处于同一细胞周期时相的过程 1 自然同步化:自然界中存在的细胞周期同步过程。 人工同步化: 2) 应用:研究细胞周期各时相中的变化 3) 人工同步化方法: 选择性细胞同步化——利用细胞在不同时相中物理特性的差别，人为地将处于不同 时期的细胞分离开来，从而获得不同时期的细胞群体。 震荡法:1、原理:对数生长期细胞分裂活跃，变圆，与培养皿的附着力 减弱。可获得分裂期细胞 2、优点:无药物影响，能真实反映细胞周期状况 效率高 3、不足:数量少。 密度梯度离心法:某些类型细胞在不同时期在体积和重量上差别显著。 1、 优点:简单省时，效率高，成本低。 、 不足:适应少数细胞类型。 2 化学药物诱导同步化: DNA合成阻断法:采用低毒或无毒的DNA合成抑制剂特异地抑制DNA合成， 而不影响处于其他时相的细胞进行细胞周期运转，从而将细 胞抑制在DNA合成期的实验方法。 常用:过量的TdR、羟基脲、阿糖胞苷、氨甲喋呤等 分裂中期阻断法:某些药物可抑制微管聚合，从而能有效地抑制细胞分裂器的 形成，将细胞阻断在细胞分裂中期 常用:秋水仙素、秋水酰胺、nocodazole(微管解聚药) 因处于间期的细胞受药物的影响相对较弱，在药物存在的情况 下，处于分裂期的细胞数量会逐渐增加。通过轻微震荡可将变圆 的分裂期细胞摇脱，离心即可得到大量的分裂中期细胞。悬浮于 新鲜的培养液中继续培养，可获得G1期不同阶段的细胞。 优点——操作简单，效率高 缺点——处理时间过长，所得到的细胞不能恢复正常的周期运 转。 四、细胞周期各时相的细胞形态和分子事件 细胞周期要完成的两个过程 遗传物质的复制、整个细胞结构组分的加倍 遗传物质精确地等分到两个子细胞中 G1期——是细胞周期中时间变化最大的时相 长期停止在G1期的细胞称为G0期细胞 可分为早期和晚期，两者之间存在一个限制点。 早: 细胞体积增大，核质比增加， 大量合成RNA,蛋白质，脂类，糖类等。 晚:为DNA复制做准备 与细胞周期运行密切相关的细胞周期蛋白等大量合成。 S期——.DNA复制 :GC含量高的序列先，AT含量高的序列在后 常染色质在前，异染色质在后 蛋白质合成:组蛋白 G期(有丝分裂准备期):促有丝分裂因子(MPF)合成 2 微管蛋白(tubulin)合成 0.3%DNA复制 M期: 第三节 细胞周期运行的调控 是一个精细复杂的过程 所有的真核细胞的周期的调控过程基本相同。 一、细胞周期调控蛋白的种类 1、CDK类蛋白激酶:CdK1——Cdk7等 分子的特性:?与cyclin结合 ?具有磷酸激酶的活性。 分类? G1、G1/S 、S期CDK ? M期CDK:CdK12细胞周期素(cyclin):是一类随细胞周期的变化呈现周期性出现和消失的蛋白质 包括:A、B、C、D、E 等多种类型及亚型 作用机制:与特定的CDK结合，使之磷酸化而活化。 各种cyclins表达时间不同，执行功能多种多样 分为 G 期细胞周期素——Cyclin D G /S期细11胞周期素——Cyclin E S期细胞周期素——CyclinA M 期细胞周期素——Cyclin B 3、CDK抑制因子(CKI):CDKI是对CDK激酶起负性调控作用的蛋白质。 已发现多种CKI， INK4家族: p16(抑制CDK4、6)、p15、p18、p19 212757 CIP/KIP家族: P、 P 、 P ， 二、进出M期的调控 1. M-CDK活化 ( 涉及cyclinB、CAK、cdc25、Weel1) 2. CDK1 激发M期所有事件 (参见教材) 三、细胞周期中的限制点 、 限制点(check points):细胞周期中的事件是按照严格的顺序进行的，在细胞周期1 中存在一些特定的敏感点，当前一个事件由于某些因素出现故障或差错时，细胞会暂 时停止在这些点上，给细胞留出时间进行修复，这些敏感点被称为限制点。 2、 细胞周期中主要的限制点(检查点): G1/S限制点——也称R点 防止DNA损伤或突变的细胞进入S期 S限制点——DNA复制是否完成 G2限制点——DNA是否损伤、细胞是否已长到合适大小、环境因素是否利于细胞分裂。 使细胞有足够的时间将损伤的DNA得以修复。 纺锤体装配限制点——称为M限制点 任何一个着丝点没有正确连接到纺锤体上都会抑制 3、意义:保证分裂后的子代细胞遗传物质的准确传代，保持细胞遗传的稳定性。 第十七章 细胞分化 第一节 细胞分化(cell differentiation) 细胞分化是从受精卵开始的个体发育过程中细胞之间逐渐产生稳定性差异的过程. 分化的主要标志——细胞内开始合成新的特异性蛋白质(非DNA的差别) 分化的关键——基因选择性表达，合成特异性蛋白质，导致了形态、结构和功能不同的细胞。 一、细胞分化的特点 1、稳定性:是指一旦分化启动，即使诱导分化的因子不存在，分化仍可继续进行，并且具 有稳定性。 已经分化成某种特异的、稳定性的细胞一般不能逆转到未分化状态或成为其他类 型的分化细胞。 在正常生理条件下，分化过程一般是不可逆的。 2、可产生转分化和去分化 去分化(dedifferentiation):在某些特殊条件下，有增殖能力的组织中，已分化的细胞仍 可能重新获得分化潜能，并回到未分化状态。 转分化(transdifferentiation):对于动物来说，获得的分化潜能是有限的，不能去分化发 育成新个体，但可以转化为其它类型的分化细胞。这种从一种分化状态转化为另 一种分化状态的现象。 3、具有时间性和空间性 时间上的分化:在不同的发育阶段，一个细胞表现为不同的形态结构和功能。 空间上的分化:分化后的同源细胞由于所处的空间位置不同，表现为不同的形态结构和 功能。单细胞生物无空间上的分化。 多细胞生物分化的时空差异为形成各异的多种组织和器官提供了基础。 4、普遍性: 在整个生命过程中均存在 胚胎期——明显，迅速 成体——仍能产生少量的分化细胞如骨髓组织 目的是要替代衰老或死亡的细胞 第二节 细胞决定 1、细胞决定(cell determination):在个体发育过程中，细胞在发生可识别的分化特征之前就 已确定了未来的发育命运，并向特定方向分化，我们把细胞预先做出的分化选择，称为 2、细胞决定是发育潜能逐渐限制的过程。 具有遗传稳定性 先于细胞分化，制约着细胞分化的方向。 3、细胞的全能性、多能性和单能性 细胞的全能性:单个细胞经分裂和分化后仍具有发育成完整个体的能力。 全能性细胞:受精卵;桑椹胚期的8细胞前细胞 细胞的多能性:细胞仅具有分化成有限细胞类型的潜能 多能性细胞:三胚层形成后，各胚层在分化潜能上出现一定的局限性。 外胚层——表皮、神经 中胚层——肌肉、骨骼等 内胚层——消化道、肺的上皮 细胞的单能性:只能形成在形态上特化，功能上专一的终末分化细胞的能力 细胞分化的普遍规律是: 全能——多能——单能 4、全能性的细胞器——细胞核 已特化的体细胞核任然保留形成正常个体的全套基因，具有发育成一个有机体的潜能。 证明: 蛙的核移植实验 ( 20世纪60年代 ) Dolly羊( 1997年 ) 第三节 细胞分化的分子基础 分化的主要标志——细胞内开始合成新的特异性蛋白质(非DNA的差别) 并非细胞中所有基因都参与细胞分化。分化细胞基因组中表达的两种类型基因(按照与细胞 分化的关系) 管家基因(house-keeping genes): 所有细胞中都要表达的一类基因 产物:维持细胞的基本结构、代谢和基本生命活动所必需的。 微管蛋白基因(不是中间纤维)、 糖酵解系基因 核糖体蛋白基因 组蛋白基因 与分化关系不大。细胞分化只起协助作用奢侈基因(luxury genes): 也称组织特异性基因 不同类型细胞特异性表达的基因 赋予细胞特异的形态结构特征和生理功能。 对细胞生存无直接影响 细胞分化的物质基础 如:编码血红蛋白、角蛋白、肌动蛋白 细胞分化的实质是组织特异性基因在时间和空间上的差异表达。 二、基因差异表达(differential gene expression) 1、细胞分化并不是基因组DNA全部表达的结果，而是奢侈基因按一定程序，有选择的相 继活化表达的结果。这一现象称为 2、 转录水平基因表达的调控:顺式调控元件: 反式调控因子:转录因子 活性染色质结构的特异调控区 DNA甲基化: 同源盒基因: 三、分化与分裂的关系:两者伴随发生但不完全平行 细胞在分化前多次分裂 同源群的细胞分裂前可处在不同的分化程度 分化在G期进行 1 增殖快则分化慢 分裂能力随分化程度提高而下降 高度分化的细胞不再分裂 第四节 影响细胞分化的因素 1、细胞核与质的相互作用。 2、细胞间的相互诱导和抑制作用相互协调，维持正常细胞的分化和胚胎的发育过程。 诱导(induction)就是一部分细胞诱导其它细胞向特定方向分化的现象，也叫胚胎诱导 诱导的三个层次:初级诱导、次级诱导、三级诱导3、激素对分化的远距离调节作用(在 个体发育的晚期)。 4、位置信息的作用 5、环境因素:基础在细胞内部。第五节 细胞分化与癌变 1、细胞癌变是细胞异常分化(去分化)的结果 。 2、癌细胞:恶性增殖、有侵袭性和广泛转移能力的肿瘤细胞。 、癌细胞的特征:低分化 3 高增殖 体外培养:失去接触抑制 可无限传代 体内:增殖失控，浸润，广泛转移。4、来源于分化细胞，但缺乏正常分 化细胞的功能。 分化越差，恶性程度越大。 可被诱导向正常细胞分化。 第十八章 细胞衰老与死亡 第一节 细胞衰老 一、细胞衰老:是指细胞在正常环境条件下发生的生理功能和增殖能力的减弱以及细胞形态 发生改变，趋向死亡的现象。 细胞的衰老与机体的衰老不尽相同:每时每刻都有细胞在衰老机体的衰老不等于所有细 胞的衰老 单个的细胞衰老不等于机体衰老 机体衰老是以细胞总体的衰老为基础。 二、体内细胞和体外细胞衰老的特点 体内---细胞衰老特点 保持分裂能力细胞: 分裂周期变长 分裂能力下降 体外---细胞可传代30,50次; 停止分裂增殖后细胞多停留于G或G期,此时细胞表现老化现象:形态变01 大,DNA复制能力降低,蛋白质合成能力 Hayflick界限: 细胞(至少是培养细胞) 增殖能力不是无限的,而是有一定的界限。 肿 瘤 细 胞 : 非整倍体性、亚二倍体 失去接触抑制 不受Hayflick Limitation制约 永生化细胞 三、 细胞衰老的特征 (一)细胞形态结构 1.细胞表面 细胞连接 膜流动性 (凝胶相) 功能 2.细 胞 核 核膜内陷、分叶 染色质凝集 核膜崩解 3.细 胞 器 ER数量 Mt变大数量 Ly膜破坏 4.细胞骨架 骨架系统结构、成分改变 细胞水分 细胞体积 脂褐素 (二)细胞衰老的生化变化 1.DNA复制、转录、修复能力下降;端粒长度缩短;DNA甲基化下降;DNA / chromosome 损 伤增加 2.mRNA与核糖体结合能力减弱;蛋白质合成能力下降3.蛋白质分子损伤，功能及酶活性下降。四、细胞衰老的机理 1、基因转录或翻译差错、代谢废物积累 1)机体内外环境因素引起DNA损伤和突变，蛋白质转录翻译过程障碍，是导致衰老的主 要原因。2)脂褐质沉积 对细胞衰老程度判断的形态学指标之一2、活性氧基团导致细胞损伤和衰老 1) 自由基(free radical):不成对电子或原子基团构成的高度活化分子。如:.O超 2 氧自由基、 .OH 羟自由基 2)与其他分子反应时产生的活性氧基团(ROS)，导致细胞发生氧化性损伤。 ROS产生的损伤:1.脂质、蛋白质和核酸分子的氧化性损伤; 2.细胞能量生成障碍; 3.蛋白质合成受阻; 4.细胞膜、染色体、细胞器结构损伤破坏; 5.生物分子、细胞活力功能下降。4)清除自由基的防御系统: 酶系统:SOD、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶。 抗氧化剂:维E、维C、维A、硒、半胱氨酸。3、端粒学说 1)端粒(telomere)是染色体末端特殊结构。 人类端粒(TTAGGG)n n=250-1500 2)端粒长度取决于端粒酶的活性。 端粒酶(核蛋白酶)由RNA和蛋白质组成。端粒酶维持细胞分裂时染色体端粒长度 活性 (+):胚胎细胞、生殖细胞、肿瘤细胞 (-):正常组织 4)已将端粒长度作为判断细胞衰老程度的指标4、衰老基因与抗衰老基因 1)衰老基因 人类:载脂蛋白Eε4基因、β淀粉样蛋白基因 p16, p53 p21 RB基因 2) 抗衰老基因: WRN bcl-2 5、神经免疫网络 6、线粒体DNA突变学说 细胞的死亡 第二节 定义:细胞生命现象不可逆的停止及细胞生命的结束。 细胞死亡的原因很多，不一定都是细胞衰老的结果。 细胞死亡的分类 被动死亡:也称细胞坏死(cell necrosis)受环境因素如温度、射线、渗透压、化学试剂 以及细菌和病毒感染等影响，导致细胞死亡的病理过程。 常表现为成群细胞的丢失或破坏(由于细胞膜和细胞器破裂溶解，内容物释放 出来引起的炎症反应对其他细胞的破坏) 是细胞被动死亡的过程。 主动死亡:又称程序性细胞死亡(programmed cell death, PCD)或细胞凋亡(apoptosis) 是生理性的 体内细胞发生主动的、由基因控制的自我消亡方式 涉及一系列基因的激活、表达、调控 是细胞为适应生存环境而主动采取的死亡方式。 生物学意义:个体发育中，清除多余的、发育不正常的细胞 清除功能丧失并逐渐退化、有害的细胞 是多细胞生物个体生长发育、组织更新、衰老死亡等生命活动中 不可缺少的部分。 细胞凋亡异常:肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病 一、细胞凋亡 (一)形态结构改变 核——染色质异常凝集，分布于核膜内面。核逐步裂解为核碎片 凋亡小体形成——核碎片由细胞膜包裹，形成一些大小不等的有完成胞膜包裹的，内 含细胞质、细胞器、染色质片段的结构。 是判断细胞凋亡的主要形态结构之一。 细胞质——脱水而浓缩 细胞器——线粒体:增大，嵴明显——出现空泡 内质网:膨大 溶酶体:增多 细胞骨架排列紊乱。 细胞表面——微绒毛减少 细胞间连接减少 但膜是完整的。 (二)生物化学变化 1、DNA片段化:凋亡时核酸内切酶活化——特异地在核小体连接区DNA链切断——形 成180-200bp整数倍的寡聚核苷酸片段，多为单链断裂 DNA琼脂糖电泳——特征的梯状条带(DNA ladders) 不是所有凋亡细胞都出现。 2、RNA、蛋白质合成增加 3、钙离子浓度升高 4、多种蛋白酶的参与: caspase家族 topoisomerase 5、线粒体改变:通透性 细胞色素C释放——caspase家族 产生自由基 (三)细胞凋亡的分子机制 1 ced家族:线虫中与凋亡密切相关的基因。 2.哺乳动物的caspase* 基因家族: 启动凋亡 caspase-2、8、9、10 执行凋亡 caspase-3、6、7哺乳动物的 bcl-2 基因家族 其家族成员可抑制或促进凋亡 bcl-2——阻断凋亡信号的传递 bax，bak，bad——促进凋亡 Fas/FasL触发凋亡 fas:是TNF受体和NGF受体家族的成员 是细胞表面的凋亡信号受体 fasL:fas ligand 原癌基因、抑癌基因在凋亡中的作用 6(其他分子:蛋白激酶C家族等 衰老细胞和年轻细胞的染色体端粒相比变短 细胞衰老学说中具有代表性的包括 、 、 、 。 原文已完。下文为附加文档，如不需要，下载后可以编辑删除，谢谢～ 村支部书记在乡镇会议上的汇报发言 各位领导，同志们: 我叫XXXX，是XXX村村支部书记。能够在今天的会议上发言，我深感荣幸，这是乡党委、政府及管理区领导对XXX村“两委”工作的肯定，也是对我们珍惜荣誉、发扬成绩、戒骄戒躁、再创佳绩的鼓励。 XXX村有6个自然村，8个村民组，1500口人，村域面积9600亩，而耕地面积仅有1370亩。与杨庄管理区大部分村一样，距XXX街较远，自然条件较差，山多地少，人均不足一亩地。 2005年，我接任村支书时，全村还有贫困人口520人，道路、水利等基础设施十分落后，也没有什么产业，村里大部分劳力外出打工，留下老弱病残，在家靠天吃饭。 为了甩掉贫穷落后的“帽子”，村两委做了很多难，也出了很大力。俗话说，要想富，先修路。不走泥巴路也是全村男女老少多年来的期盼，于是，新一届村两委班子将修路确定为全村头等大事。通过跑项目、要指标，功夫不负有心人，终于在07年修通了新东、新西、河西三个组至四柳路的1.9公里村村通道路，08年又修成石东、石西两个组的2.3公里村村通道路。截止目前，全村六个自然村全部通上水泥路，其中XXX、河西两个村民组已经达到了“户户通”。 修好了路，群众们走亲串友方便了，上街买东西方便了，脸上的笑容也多了，几个村干部觉得跑腿流汗都值了。但是，我们又发现了新的问，群众腰包不鼓、兜里没钱，依然是饱一顿饥一顿，甚至有些困难户吃了上顿没下顿，咋办,经过村两委班子多次商议，一致认为要发展一个产业，要有特色，要有高效益。结合村情，我们在充分调查、论证的基础上，决定组织群众沿北部山区，大力发展以薄皮核桃种植为主的特色林果业。说了就算，想了就干，经过做群众工作，甚至是村干部带头种植，如今，全村已经发展薄皮核桃2000余亩，建成苗圃园两个、占地150多亩，成立种植专业合作社4个、养殖合作社1个，已经有一部分群众得到了实惠。 近年来，国家对农村人居环境改善相当重视，我们村两委班子也做了不少努力，村容村貌有了很大改善，虽不能与平原地区相比，但在山区农村也称得上亮点。尤其是去年以来，我们村被乡党委、政府确定为美丽乡村建设试点村，在上级的支持和全村群众的努力下，试点XXX组完成路面硬化、修补300余米，整理边沟280米，铺设道沿石100多米，种植绿化树木312棵，粉刷墙壁600余平，初步实现了污水不乱流、垃圾不乱到，村容村貌焕然一新。 可以说，一直以来，村两委班子总是在千方百计带领群众发展产业，总是在想方设法改善群众生产生活水平，也取得了一些成效，得到了上级领导和绝大部分群众的认可。我们也很知足，但并不是满足，更不会骄傲。下一步，我们还要牢记乡党委、政府的嘱托和全村群众的期望，继续发展特色产业，尤其是薄皮核桃种植，力争今年再发展 600亩，发动更多的群众参与，把产业做大做强，让群众得到更多的实惠。在美丽乡村建设上，进一步解决XXX组试点的污水和垃圾处理问题，加强对群众良好生活习惯的培养，将XXX组打造成居住环境优美、群众精神风貌焕然一新的“美丽乡村”。并在此基础上，逐步向其余村民组辐射，不断加大工作力度，不负领导和群众期望，让XXX村成为一个产业结构明晰、基础设施完善、村容村貌优美、社会治安良好的美丽乡村。 县委第一责任人组织落实巡视反馈意见情况报告 根据XX省委巡视统一部署，XX年4月24日至5月23日，省委县(市、区)巡视一组对XX县进行了巡视。8月18日，省委县(市、区)巡视一组向XX县委反馈了巡视意见。按照党务公开原则和巡视工作有关要求，现将巡视整改情况予以公布。 一、切实把巡视整改工作作为政治任务抓紧抓好 XX县委高度重视省委县(市、区)巡视一组反馈意见，坚决把整改工作抓严抓实抓到位，切实承担起巡视整改的主体责任。县委书记张镇城同志为第一责任人，积极主动对照反馈意见，坚持高标准、严要求，坚决把整改工作落实到位。 (一)统一思想认识，认真领会省委要求和巡视组反馈意见 省委巡视组反馈意见后，张镇城同志立即主持召开县委常委会，专题学习省委重要指示，领会把握巡视组反馈意见。通过学习，大家 深刻认识到省委县(市、区)巡视一组代表省委到XX开展巡视工作，对于我县巩固和扩大党的群众路线教育实践活动成果，深入开展“三严三实”专题教育活动，推进党风廉政建设和反腐败工作的深入开展，营造良好的从政环境、构建良好的政治生态，具有十分重要的意义。巡视组提出的整改要求和各项意见，明确具体，针对性、指导性、操作性都很强，完全符合XX实际，充分体现了对XX工作的关心支持，体现了对XX广大党员干部的警示和爱护，是县委总结反思、改进工作的重要契机。为此，县委要求全县各级党委(党组)和广大党员干部特别是领导干部，要以此次省委巡视组反馈意见为动力，进一步统一思想，充分认识省委对县(市、区)巡视工作的重要意义，不断增强党要管党、从严治党的政治意识和责任担当。 (二)加强组织领导，层层传导压力推动整改落实 县委对巡视整改工作负主体责任，纪委承担监督责任。整改工作在县委常委会集体领导下开展，建立牵头挂项机制，由张镇城同志总体负责整改落实工作，其他班子成员和相关领导认真履行“一岗双责”，根据职责分工相互配合抓好各项整改任务的落实。张镇城同志认真履行第一责任人的责任，亲力亲为抓部署、抓推动、抓督导，先后主持召开县委常委会议和专题会议，对落实巡视整改工作进行专题研究部署;在赴XX中央党校学习期间，还多次打电话了解整改工作进展情况;国庆长假回XX期间，专门听取整改情况汇报，召集相关领导进一步研究，督促落实跟进措施，推动整改落实。县长何德发等领导对照整改问题，牵头制定分管联系领域内问题整改推进措施，督 促县直部门和乡镇推动整改落实向基层延伸;全县各级党委(党组)积极对照整改任务，各负其责、抓好整改;县委办、政府办、纪委认真做好协调、推进、督办等工作，推动形成上下联动、合力整改的工作格局。 (三)明确责任分工，从严从实开展各项整改工作 县委针对巡视组反馈的党风廉政建设、落实中央八项规定精神和作风建设、执行政治纪律和政治规矩、选人用人和执行民主集中制等四方面8项内容，研究制定《关于落实省委县(市、区)巡视一组〈关于对XX县巡视情况的反馈意见〉的整改任务与分解》，细化分解成19项整改任务，每项整改事项都确定了牵头领导、牵头单位和责任单位，明确了整改时限和目标要求，使责任更加明晰、措施更加具体，保证了整改事项“件件有方案、事事有人抓”。张镇城同志在统筹协调抓好整改落实各项工作同时，带头领办具体整改事项，担任3项整改事项的牵头领导，其他常委也根据各自的工作职责领办整改事项，一个问题一个问题深入研究，一个步骤一个步骤推进整改。同时，坚持把整改落实与巩固党的群众路线教育实践活动成果相结合，与开展“三严三实”专题教育相结合，以巡视反馈问题的整改推动作风持续转变。 二、省委巡视组反馈意见整改落实情况 省委县(市、区)巡视一组向我县反馈了在党风廉政建设、落实中央八项规定精神和作风建设、执行政治纪律和政治规矩、选人用人和执行民主集中制等四方面存在的问题。截止10月15日，四个方面 19个具体问题，已经整改完成14个，正在整改5个;移交初信初访件44件，已核查结束37件，正在办理7件;对相关责任人88人进行责任追究，涉及科级领导干部39人，其中，进行诫勉谈话、责令书面检查、辞退等57人次，立案查处31人，已给予党政纪处分26人。具体整改工作进展情况如下: (一)党风廉政建设方面 1.“两个责任”落实不到位问题 一是着力落实“两个责任”。县委深入学习领会习近平总书记关于党风廉政建设和巡视工作的重要讲话精神、省委对巡视整改工作的重要部署，制定出台《关于落实党风廉政建设党委主体责任的实施意见》、《关于落实党风廉政建设纪委监督责任的实施意见》、《XX县党风廉政建设责任追究暂行办法》等文件制度，进一步明确党委主体责任、纪委监督责任和责任追究的情形、方式、程序及结果运用，促进责任落实具体化，督促党委领导班子切实履行“一岗双责”，扎实抓好职责范围内的党风廉政建设。纪委监察机关履行监督责任，协助县委加强党风建设，推动各级党组织履行主体责任。加强纪律审查力度，进一步严明纪律，严格落实中央八项规定精神，坚决查处以招商引资为名公款吃喝、公款旅游的案件，并及时给予问责和曝光，努力形成高压态势。2015年1-9月，全县共新立案79件，办结65件，党政纪处分65人，移送司法机关追究刑事责任4人，挽回经济损失300多万元。同时，强化自身建设，建立纪检监察干部业务培训常态化机制，提升纪检监察干部履职能力和水平，今年共组织纪检监察系 统综合业务培训班3期培训230人次，选派县乡纪检监察干部参加中央、省、市纪检监察业务培训25人次。 二是强化干部监督管理。不断强化“全面”和“从严”意识及措施，切实加强对领导干部监督制约，为经济和社会发展提供坚强有力的纪律保障。抓常态，把严格执行和落实好党员领导干部诫勉谈话、函询、重大事项报告和个人有关事项报告等干部监督制度作为一项常态化的工作来抓，坚持把纪律挺在前面，注重抓早抓小，以良好的党风政风带民风社风。今年来共有178名拟提拔或调整的领导干部提交了个人有关事项报告表，科级干部报告婚丧喜庆等个人重大事项28人次。抓重点，加大对重点领域和关键岗位干部的监督，特别是单位“一把手”和领导班子，对他们在政治立场、民主决策、廉洁自律和班子建设等方面进行全面监督。加强对干部选拔任用工作的监督，把好选人用人关口，今年共对6批160名转任或拟提拔对象进行任前公示，组织2批15名拟提拔科级领导职务的干部参加任职前廉政法规知识测试。落实领导干部任期和离任经济责任审计制度，加大对领导干部特别是重要岗位领导遵守财经纪律等情况的监督力度，今年共计划对18个单位的主要领导进行经济责任审计，已经完成10个，在审3个。抓问责，严格执行“一案双查”制度，加大责任追究力度，坚持把责任追究作为落实党风廉政建设责任制的关键环节，今年已查处责任追究案件19起，问责科级领导干部35人，其中，立案调查17人，给予党纪处分13人，诫勉谈话9人，责令作出书面检查9人。 三是认真办理巡视组移交事项。首先，集中时间集中力量及时核 查省委巡视组移交的信访件和问题线索。要求纪委对巡视组交办的信访件和问题线索162件，其中:业务内信访件84件(初信初访件44件)，业务外信访件78件(已转相关部门办理)，建立工作台账，集中时间集中力量，由县纪委常委带队，进行调查核实。加大查办案件力度，在梳理排查问题线索的基础上，对可查性强、时机成熟的适时启动立案程序。截止10月15日，44件初信初访件中，37件已核查结束，7件正在办理。其中:查实转立案12件15人，已给予党纪处分15人;部分属实7件，已整改到位3件，建议提起诉讼1件，给予诫勉谈话1件，正在落实整改2件;失实了结15件;直接了结3件。对巡视期间，西潭乡党委副书记李南君违反中央八项规定精神，大操大办丧事，在群众中造成不良影响，县纪委及时立案调查，给予党内警告处分。其次，着力做好日常信访举报工作。及时处置新受理的信访件，做到当周签批交办，限时办结。今年1-9月，新受理检控类初信初访103件，逐件进行核实，从中发现问题线索并转立案39件，有效减少信访存量、遏制信访增量，努力做到信访件“零暂存”。 2.工程建设等重点领域存在的问题 责令相关单位、部门进行自查清理，逐个问题抓好整改落实，出台《XX县加强和财政性资金对外借款行为管理意见》、《关于进一步加强和规范招标投标管理的若干意见的通知》等文件制度，加强工程建设等重点领域的廉政风险防控。 (1)关于有的BT项目建设不规范问题 ?厦深高铁XX站站前广场及道路建设BT项目。县城投公司及时 组织审核调查，强化整改落实。一是强化BT项目财政审核和政府项目工程审计结算工作。9月17日，县审计局已对该项目进行审计。二是站前广场及道路建设BT项目建安费下浮1.5%。三是启动追责程序，县纪委对时任城投公司总经理林光荣、副总经理林镇国分别进行党纪立案调查，县城投公司对财务部负责人许隽生进行效能告诫，并通报批评。四是建立健全制度，印发工程招投标管理制度、操作流程，制定小额工程招投标管理办法，加强对业务人员招投标政策法规和BT项目知识的培训教育。 ?XX县中医院搬迁(含瑞康医院)建设BT项目。一是建安费下浮比例按3 % 进行结算。二是对未能认真把关项目建安费下浮比例等问题的相关人员进行问责，县卫计局分别给予负有领导责任的中医院副院长沈永义效能告诫、直接责任人基建科科长沈汉乾行政警告处分。 ?南湖公园片区及配套用地建设项目。加强对南湖公园片区及配套用地建设项目的监督管理，县城建局责令业主单位提交书面情况说明，并对其进行约谈和通报批评，给予相关责任人XX县房地产综合开发总公司总经理沈少山行政警告处分。同时，采取了三项整改措施:一是终止该项目土地一级开发合同条款，并终止土地挂牌出让净收益的30 % 分成的合同条款，另按合理的回报支付投资人的投资收益。二是403.69亩土地由政府方面统一收购储备挂牌出让，所得土地出让金偿还上述投资款及收益。三是对于项目未约定回购期问题，县房地产综合开发总公司正在施工方协商合同条款变更。 (2)关于有的工程项目以时间紧、要求高为由规避公开招投标问题 ?XX工业园区绿化项目规避招投标问题。县纪委责令XX工业园区分管建设工作的党工委委员杨云飞、土地规划建设局局长沈仕超作出书面检查。目前，工业园区已建立健全园区工程建设项目管理的决策、实施机制，规范建设项目的运作流程，建设发展公司年初按照规划提出项目盘子，制定年度投资计划，明确项目负责人和完成时限，报园区项目工作领导小组审核后再按计划、按程序实施项目，避免随意性。 ?金都工业集中区绿化项目规避招投标问题。金都工业集中区要求市政公司、招投标工程领导小组、财税管理局等多部门联动，组织人员开展工程项目清理。县纪委对时任金都工业集中区市政工程建设公司经理肖华顺进行诫勉谈话，责令作出书面检查。 ?金星乡规避招投标问题。2011年7月，乡政府将总价25万余元的办公楼主楼铝合金窗项目发包给无施工资质的个人，用现金结算并多付2万元，现已收回多付铝合金窗项目款19031.9元。关于2012年10月至2013年2月间，将总造价78.82万元的绿化配套工程分为3个项目实施，以及计生服务所业务用房大楼1台电梯工程(造价22.9万元)未经政府集中采购等问题，金星乡于8月31日召开专题会议，乡党委书记作为党风廉政建设的第一责任人对省委巡视组反馈的问题向班子会作检讨，深刻反省，并制定整改方案，具体到责任人、责任单位，形成专题会议纪要。县纪委对时任金星乡党委书记李保芳进 行党纪立案调查。 ?一些重点工程项目勘察、设计、监理方的选择，没有按规定进行招标，而是采用邀标或比选方式问题。加强县污水厂扩建及管道配套工程、站前广场、连站大道拓宽工程等项目的监督管理，制定工程招投标管理长效机制，确保应招标的工程项目百分之百招标，确保招投标工作的规范性和合法性。 (3)关于部分工程项目随意增加工程量、提高工程造价问题 ?县城投公司擅自同意施工方因取土点改变增加项目工程费用问题。县城投公司及时成立调查组，对巡视组反馈的问题进行调查、核实、梳理，深入分析研判。一是强化BT项目财政审核和政府项目工程审计结算工作。9月17日，县审计局已对该项目进行审计，确保国有资金不流失。二是暂停支付第二、三期70%回购款。三是施工方同意分担业主因取土点变更重新租地、赔青、坟墓迁移等费用110万元。四是对相关责任人进行问责。县纪委对时任城投公司总经理林光荣、副总经理林镇国分别进行党纪立案调查。县城投公司对项目现场负责人沈洪辉进行辞退处理;对项目现场管理人员许松琛、沈晓三、沈森鑫等3人，因现场监管不力问题，进行调离岗位处理，并通报批评。 ?县南环城路及玉峰南路道路工程项目调整中标价问题。县城投公司把该工程相关资料文件及省巡视组对该项目巡视提出的问题一并报送审计部门进行审计，由审计部门根据工程的实施情况进行核定，公司与施工单位的结算最终以审计结算价进行结算。同时，县纪 委对时任城投公司总经理林光荣、副总经理林镇国分别进行党纪立案调查，城投公司对该项目工程部负责人许晓东进行效能告诫，并通报批评。 (4)关于违规用大额现金支付工程款问题 ?桥东镇。2012年1月至2014年8月，桥东镇政府有14个工程项目以收款收据做账。桥东镇要求相关施工单位补开具正式发票入账，目前已补开发票的工程13项，总金额125.1015万元;未补开发票的工程1项，金额1.18万元。鉴于时任党委书记沈瑞强违纪被开除党籍，县纪委对时任镇长沈晓文给予党内警告处分，责令财务人员作出书面检查。 ?深桥镇。2011年3至2014年11月，深桥镇政府有23个2-21万元不等的工程项目以现金结算方式支付，总金额85.39万元，并以收款收据做账。深桥镇要求23个工程项目负责人补开税务发票重新登帐，已全部整改到位。县纪委已责令有关责任人作出书面检查，并将结合有关问题线索进行问责。 (5)关于违规出借国有资金、出租(售)国有资产问题 ?深桥镇违规出借公款问题。经查，深桥镇2007年1月至2014年12月间共出借国有资金32笔给9家民营企业，尚有部分资金未收回。深桥镇加大整改力度，约谈业主，制定催讨计划。县纪委已成立调查组对此问题进行调查核实，并将严肃追究责任。同时，在全县范围内开展财政性资金非公务借款清理专项行动，出台《关于进一步加强规范财政性资金对外借款行为管理意见》，规范财政资金管理。 ?县交通局违规出租挖掘机、交管站站房等国有资产问题。县交通局领导高度重视，立即召开会议研究并作出整改。一是现四都、三角点、太平三处交管站房结欠租金均已入库，原出租不再延续，交管站房原租用者已撤离。二是挖掘机原租用者已于9月3日交回机械及随机附件，租赁协议也随之解除，挖掘机结欠租金已追缴到位，挖掘机已入库管理。三是交通局日前已按规范程序向县国有资产管理部门办理交管站房等国资出租(处置)报批手续的程序。四是对时任人秘股股长沈俊光未能及时报告上述国有资产出租协议到期(或应解除协议)时间，延误单位按规范程序办理公开出租(处置)报批手续时间等问题，县纪委对沈俊光进行党纪立案调查，责令交通局局长张育纯作出书面检查。 ?XX工业园区将新城花园店面低价出售问题。经查阅相关资料，XX工业园区出售的新城花园17间店面中，时任班子成员均无购买，个别领导的亲戚、身边工作人员是否有购买正在进一步核实。 3.少数基层干部在土地征收流转中以权谋私，群众身边的“四风”和腐败问题时有发生 一是严格监督。县委、县政府把查处发生在群众身边的“四风”和腐败问题作为落实党风廉政建设主体责任的重要内容，主要领导切实担负起第一责任人的责任。同时，发挥各职能部门的主体作用，县民政、财政、人社、国土、城建、农业、卫计、税务以及基层执法、监管、公共服务等窗口行业涉及到的部门，既各负其责、主动履职，又加强联动、形成合力，着力整治行业、系统的发生在群众身边的“四 风”和腐败问题。二是严肃执纪。纪检监察机关把发生在群众身边的“四风”和腐败问题列入纪律审查重点，作为纪律处分的重要内容。坚持把纪律挺在前面，抓早抓小、动辄则咎，用纪律管住大多数。大力加强土地廉政风险防控，开展打击非法买卖土地专项整治行动，严肃查处非法倒卖土地行为，去年以来，查处了党员干部非法买卖土地窝串案，涉案56人，立案24人(其中科级8人)，移送司法机关16人，涉案金额460多万元。同时，坚持以零容忍态度，严厉查处医疗领域、惠民资金拨付中侵害群众利益的案件，今年来，查处发生在群众身边的“四风”和腐败问题28件，党政纪立案28件，现已党纪处分25人。其中，医疗卫生领域侵害群众利益的案件4件，惠农强农资金拨付中侵害群众利益的案件10件，基层干部吃拿卡要的案件1件，查处基层行政执法乱作为案件5件。三是严加防范。相继出台《关于建立惠农资金落实情况报告制度的通知》、《关于进一步规范强农惠农资金公开公示制度》、《关于开展涉农资金专项整治行动的实施意见》等文件制度，规范惠农强农资金使用;印发《关于开展严厉打击非法买卖土地专项行动方案》，严肃查处土地流转中侵害群众利益案件。 (二)落实中央八项规定精神和作风建设方面 4.公务用车费用支出偏高问题 一是加强公务用车管理。县委办、政府办联合印发《关于进一步规范公务用车费用支出管理的通知》，严格执行公务用车配备使用管理有关规定，坚持总量控制、规范管理、厉行节约。严格控制车辆经 费预算支出，以前三年的平均数下调10%为基数，科学设定单位公车运行费用限额。严格执行公务用车使用管理制度，督促各单位建立健全派车制度，实行定点维修制度，严禁以收款收据报销车辆维修费用。严格落实公务用车“一车一卡”加油制度，实行定额用油、一车一卡、专卡专用制度，从源头上加强对公务用车燃油费的监控管理。二是开展燃油补贴清退工作。检查发现部分单位存在违规发放交通燃油费补贴，一定程度上导致了我县整体公务用车费用支出偏高问题。为严肃财经纪律，深化落实中央八项规定精神，经县委、县政府研究决定，由县政府办下发《关于清退违规发放交通燃油费补贴的通知》，要求全县各单位自查清退2013年7月1日以来违规发放交通燃油费补贴。截止10月15日，全县共清退违规发放的交通燃油费补贴121.44万元。三是强化公务用车的监督检查。加强对全县公务用车费用支出的全方位监督检查，县委、县政府督查室、县效能办采取巡查、暗访、督办等方式，不打招呼、不定时间、不限地点对全县公务用车油卡使用、定点停放、派车制度等情况进行监督检查。四是加大惩处力度。今年来，共查处违规使用公务用车、违规报支私车费用和违规发放交通燃油费补贴等问题7起13人，如查处了梅岭镇违规发放交通燃油费补贴问题，对梅岭镇原党委书记陈金平、原纪委书记杨立辉进行党纪立案，对时任镇长沈来龙、现任镇长陈三武进行诫勉谈话;县国土资源局秀篆国土所所长陈武元公车私用问题，给予行政警告处分;桥东镇原党委委员XX顺违规报支私车费用问题，给予XX顺党内警告处分。 5.公务接待管理不严、财务报支不规范问题 一是认真核实整改。针对县林业局等10个单位公务接待管理不严、财务报支不规范等问题，县纪委已组织人员进一步调查核实，督促相关单位整改到位，并对违反规定的相关责任单位和责任人严肃追究责任。?关于县林业局公务接待和招商引资接待开支票据不规范问题，经核实，县纪委对县林业局负责食堂接待的人秘财务股股长沈金辉、副股长陈镇林进行诫勉谈话，责令县林业局局长胡平忠作出书面检查。?关于县公安局公务接待和招商引资接待开支票据不规范问题，经核实，对县公安局负责公务接待工作的时任警务保障室主任李小明进行诫勉谈话，责令食堂管理员沈玉龙作出书面检查。?关于XX工业园区公务接待和招商引资接待开支票据不规范问题，经核实，县纪委对园区分管办公室的党工委副书记叶斌进行诫勉谈话，责令园区副主任王雪芳、财税局局长林荣治、经发局局长吴丽萍等7人作出书面检查，责令退缴未注明接待事由、对象、人数标准等内容的已报销票据7张金额计5250元。?关于金星乡同城接待、异地接待问题，经核实，县纪委对分管党政办的时任金星乡副乡长沈宝川进行诫勉谈话，责令金星乡党委书记陈燕贞、财政所所长陈永林、党政办副主任林炎钦等4人作出书面检查。?关于县发改局同城接待、异地接待和用公款购买土特产品问题，责令县发改局副局长许旭松、时任办公室主任叶和泉等3人作出书面检查，责令退缴违规购买土特产品金额计1.15万元。?关于交通局等单位同城接待、异地接待问题，经核实，县纪委对经办人员沈舜平给予党内警告处分、沈彩明进行约谈，责令 县交通局退缴“2015年1至3月异地接待开支”金额计5022元，责令交通局局长张育纯作出书面检查。?关于霞葛镇以收款收据报支接待费和公款购买土特产品问题，经核实，县纪委已责令霞葛镇进行整改，对时任镇长陈敏聪、现任镇长吕自信、时任党政办主任张文培给予党内警告处分，对党委书记沈林松进行诫勉谈话。?关于深桥镇用公款购买土特产品问题，县纪委对深桥镇时任组织委员兼党政办主任吴志斌、工作人员吴激进行约谈，案件在进一步调查中。?关于白洋乡用公款购买土特产品问题，经核实，县纪委对白洋乡时任乡长许仲岚党内严重警告处分，对纪委书记田元斌、分管公务接待工作的时任党委委员林惠丹、时任党政办主任李煜给予党内警告处分，对党委书记沈东生、乡长吕新国进行诫勉谈话，责令白洋乡党委宣传委员黄瑞麟、财政所所长许朝辉等13人作出书面检查，同时，白洋乡党委研究决定将财政所所长许朝辉降职改任财政所副所长，将总务陈志明调离党政办，给予白洋乡党政办通报批评，并撤销党政办“总务”岗位。?关于四都镇公务接待和招商引资接待开支票据不规范和大额办公用品未按规定实行政府采购问题，经核实，县纪委对四都镇分管党政办的党委组织委员沈一娟给予党内警告处分，责令时任镇长蔡祥瑞、党政办主任张文艺等7人作出书面检查。二是健全完善制度。深化落实中央八项规定精神，先后制定《关于进一步加强行政事业单位财务管理的意见》、《XX县推行财务公开工作的实施方案(试行)》、《XX县县直机关会议费管理办法》等文件，进一步规范财务报销，压缩“三公”经费支出;出台《XX县进一步规范公务接待管理意见 的通知》，对公务接待范围、接待标准、审批程序和报销手续作出明确规定。三是加大查处力度。在五一端午、中秋国庆期间，在全县范围内开展违反中央八项规定精神突出问题专项整治活动，由县纪委监察局领导班子带队，抽调乡镇纪委书记、县直纪检组长、财政局、公安局等部门人员，组成5个督查小组，对48个乡镇(区)、县直单位和旅游景点，开展中央八项规定精神落实情况监督检查，重点检查“三公”经费支出等情况，发现疑似线索37条，调查核实4条，转党政纪立案3件。今年来，共查处违反中央八项规定精神问题19起68人，立案调查18人、给予党政纪处分17人，诫勉谈话12人、书面检查37人、责令辞退1人，点名道姓通报4起5人。 6.干部“庸政、懒政、怠政”现象 一是强化干部思想教育。深入学习习近平总书记系列讲话精神，发挥乌山红色革命教育基地作用，加强党员干部的理想信念教育。结合“三严三实”专题教育活动，进一步坚定理想信念，强化党性原则，明确干事创业的行为准则，不断强化党员干部“忠诚、干净、担当”意识。二是深化机关效能建设。贯彻落实《XX县深化“马上就办”行动、优化发展软环境的实施方案》，围绕纪律作风开展督查，针对可能存在的一些干部纪律松懈、庸懒散拖以及群众办事“三难”等现象，综合运用经常性、随机性抽查、明察暗访等形式督查。出台《2015年度绩效考评工作方案》，促进转变作风、高效履职、优化服务。三是完善干部考核评价体系。紧盯年初确定的目标任务，结合省、市“三比一看”、“三个年活动”和“大干六个月”等活动的部署要求，抽 调干部到重点项目、征地拆迁一线锻炼，提高干部担当意识和执行力。修订完善《注重工作实绩推荐选拨干部考评办法》，积极探索干部“能上能下”机制，形成能者上、庸者下、劣者汰的良好用人导向。同时，把监督干部同信任干部、保护干部、激励干部统一起来，支持干部锐意改革、大胆创新，激发干部知难而进、干事创业。 (三)执行政治纪律和政治规矩方面 7.对上级的决策部署监督不力、执行不到位问题 一是抓好党性党风党纪教育，结合党的群众路线教育实践活动和“三严三实”专题教育活动，引导党员干部着力增强宗旨观念、提高实践能力、强化责任意识、树立正确政绩观和利益观、增强党纪观念。二是加强监督检查，确保政令畅通，开展上级党委、政府和县委、政府一系列决策部署贯彻落实情况的监督检查，如印发《关于2015年中秋国庆期间开展中央八项规定精神落实情况监督检查的通知》，不断巩固落实中央八项规定精神成果，严防“四风”问题反弹。三是严肃查处对上级的决策部署监督不力、执行不到位等行为，特别是未能结合本地实际制定贯彻落实中央八项规定精神的具体措施，以招商引资为名、白条开支等形式搞变通、应付等问题，加大问责力度，严肃查处了梅岭镇违规发放交通燃油费补贴问题，林业局等单位公务接待管理不严、财务报支不规范问题，白洋乡、霞葛镇等用公款购买土特产品问题。 (四)选人用人和执行民主集中制方面 8.个别单位存在“近亲繁殖”现象 一是摸清底数，强化整改。经摸排，县法院、公安局、市场监督管理局、交通局、林业局、农机站等6个单位，在同单位工作有亲属关系的公务员或事业(参公)干部共51人，其中违反《公务员回避规定(试行)》的16人。截止10月15日，违反回避规定的16人中，市场监督管理局县管干部存在直接上下级领导关系的1对夫妻和1对兄妹已在巡视期间分别将其中1人调离原单位，其他在同一单位双方属同一领导分管的有亲属关系的12人，均对其中一方进行适当的岗位调整。二是建章立制，源头防范。县人社局参照《公务员法》有关回避的要求，结合本县实际，出台制定岗位和工作回避规定，坚决从制度层面杜绝“近亲繁殖”现象。同时，加大对《干部选拔任用工作条例》、《公务员法》等有关干部政策法规的学习培训力度，督促各级党委和组织人事部门严格按照政策法规办事。 三、持续巩固和深化整改工作成果 经过两个月的集中整改，我县的整改工作取得了一定成效，但县委清醒地认识到，整改工作离省委的要求和干部群众的期待还有一定差距，党风廉政建设仍然任重道远。下一步，县委将严格对照巡视反馈意见要求，举一反三，标本兼治，抓常抓严抓实，坚持不懈抓好整改落实工作，以实际成效取信于民。 一是坚持问题导向抓好专项整治。坚持目标不变、力度不减，对巡视整改工作紧抓不放，督促各级党组织加强对整改工作的领导，坚持问题导向，大力发扬“钉钉子”精神，以“踏石留印、抓铁有痕”的劲头解决突出问题，坚定不移地向老大难问题开刀，做到敢碰硬、 啃“硬骨头”。 二是层层传导压力抓好责任落实。严格落实党委主体责任和纪委监督责任，切实督促各级党委对党风廉政建设负起全面领导责任，特别是抓牢抓实党委主要负责人第一责任人职责;班子其他成员要根据工作分工，对职责范围内的党风廉政建设负主要领导责任，切实履行“一岗双责”，凝聚形成抓整改的强大合力。支持各级纪委聚焦中心任务，加强对党风廉政建设和反腐败工作的监督，切实履行好党内监督职责，确保党风廉政建设责任制落到实处。 三是强化堵塞漏洞抓好建章立制。把显性问题整改与隐性问题查找统一起来，把立行立改与完善长效机制结合起来，以落实整改为契机，进一步建章立制，扎好制度的篱笆，坚持用制度管事管人，深入推进作风建设和反腐败工作，切实以正风肃纪、高压反腐的有力举措，逐步形成不敢腐、不能腐、不想腐的良性体制，促进全县广大干部廉洁从政，汇聚起深化改革发展、建设美丽XX的正能量。 欢迎广大干部群众对巡视整改落实情况进行监督。如有意见建议，请及时向我们反映。联系方式:电话XX;邮政信箱:XX县县委大楼四楼县纪委党风室;电子邮箱: