归芪生血颗粒质量标准研究

归芪生血颗粒质量研究 归芪生血颗粒质量标准研究 【摘要】 目的建立归芪生血颗粒(黄芪、枸杞子、火麻仁、当归、五味子等)质量标准。采用薄层色谱法对颗粒中的黄芪、枸杞子、火麻仁、当归、五味子进行了定性鉴别;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定了制剂中黄芪甲苷的含量。结果薄层斑点清晰，黄芪甲苷在0.500 1,10.002 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.83%，RSD= 1.13 %。结论方法简便，准确，可供本品质量控制。 【关键词】 归芪生血颗粒; 薄层色谱; 高效液相色谱-蒸发光散射检测器; 黄芪甲苷 Study on Quality Standard for Guiqishengxue Granules Abstract: ObjectiveTo establish the quality control standard of Guiqishengxue Granules(Radix Astragali, Fructus Lycii, Fructus Cannabis, Radix Angelicae Sinenis, Fructus Schisandra-e, etc.). Methods Radix Astragali, Fructus Lycii, Fructus Cannabis, Radix Angelicae Si-nenis, Fructus Schisandrae were identified by TLC. The content of Astragaloside IV was determined by HPLC-ELSD. ResultsThe TLC spots developed was fairly clear. The Astragaloside IV showed good linear relationship at a range of 0.500 1,10.002 μg. The average recovery was 98.83% with RSD was 1.13%. ConclusionThe method is simple, accurate and can be applied to the control of the products effectively. Key words: Guiqishengxue Granules; TLC; HPLC-ELSD; Astragaloside IV 归芪生血颗粒主要由黄芪、枸杞子、生地、天冬、火麻仁、当归、桃仁、红花、五味子等9味中药组成。具有健脾益肾，调畅气血的作用，适用于脾肾不足、气血亏虚、肌肤失养所致颜面皮肤干黄，弹性降低，皮肤松弛等症。为了有效控制药物质量，对归芪生血颗粒中黄芪、枸杞子、火麻仁、当归、五味子进行定性研究，采用HPLC,ELSD法对黄芪的主要成分黄芪甲苷进行含量测定，以期更好地控制该药物的质量。 1 仪器与试药 仪器: 岛津LC-10AT，7725i定量进样阀，岛津C-R7Ae型数字处理机，法国SEDEX 55型蒸发光散射检测器(ELSD);对照品黄芪甲苷(含量测定用)，枸杞、火麻仁、当归、五味子对照药材(以上对照品和对照药材均购于中国药品生物制品检定所);使用的化学试剂均为纯，硅胶G(青岛海洋化工厂)，自制硅胶板(10 cm×10 cm×0.6 mm);试验样品归芪生血颗粒(自制);阴性样品依处方除去被检药材按制备工艺制成。 2 方法与结果 2.1 定性鉴别 2. 1.1 黄芪的鉴别取本品20 g，研细，加温水50 ml使溶解，放冷，离心，取上清液，加乙醚提取3次，20 ml/次，合并乙醚液，另器收集;挥尽水层中乙醚，加水饱和的正丁醇提取3次，20 ml/次，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的1%NaOH溶液洗涤3次，20 ml/次，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，30 ml/次，正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪阴性样品20 g，同法制成阴性对照溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2017年版?部附录VIB试验， 吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl,对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(10?20?11?5)10?下层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105?加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图1。 2. 1.2 枸杞子的鉴别取本品10 g，研细，加热水50 ml使溶解，放冷，离心，取上清液用醋酸乙酯40 ml振摇提取，提取液浓缩至约 1.5 ml，作为供试品溶液。另取枸杞子阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取枸杞子对照药材0.5 g，加水35 ml，煮沸15 min，放冷，滤过，滤液用醋酸乙酯15 ml振摇提取，提取液浓缩至约1 ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2017年版?部附录VIB试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(3?2?0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图2。 图1 黄芪的鉴别(略) 图2 枸杞子的鉴别(略) 2. 1.3 火麻仁的鉴别取火麻仁对照药材0.5 g，加醋酸乙酯20ml，超声提取30 min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2017年版?部附录VIB试验，吸取定性分析2.2项下供试品溶液20 μl，对照药材溶液、阴性对照溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF-254薄层板上，以环己烷-丙酮(23?3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105?加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图3。 2. 1.4 当归的鉴别取定性分析2.1项下另器收集的乙醚液，自然挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归阴性样品，同法制成阴性对照溶液。再取当归对照药材1 g，加乙醚20 ml，超声提取15 min，滤过，滤液自然挥干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2017年版?部附录VIB试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯(9?1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图4。 2. 1.5 五味子的鉴别 取本品20 g，加氯仿100 ml，回流提取 1.5 h，滤过，滤液浓缩至约1 ml，作为供试品溶液。另取五味子阴性样品20 g，同法制成阴性对照溶液。再取五味子对照药材0.5 g，加氯仿100 ml，回流提取 1.5h，滤过，滤液浓缩至约1 ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2017年版?部附录VIB试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF-254薄层板上，以石 油醚(30,60?)-甲酸乙酯-甲酸(15?5?1)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在105?加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品在相应位置无此斑点。见图5。 图3 火麻仁的鉴别(略) 图4 当归的鉴别(略) 图5 五味子的鉴别(略) 2.2 定量分析 2.2.1 色谱条件美国Phenomenex公司LUNA 5u C18 (2)色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流动相采用甲醇-水(75?25)，流速为 1.0 ml/min，ELSD检测器漂移管温度为40?，载气(氮气)流速为2.0bar。