3蔬菜中维生素C含量的测定

3蔬菜中维生素C含量的测定 3C ---分光光度计法 抗坏血酸（维生素C）是广泛存在于新鲜水果、蔬菜及许多生物体的一种种重要维生素，作为一种 高活性物体，他参与很多新陈代谢过程。近几年来在植物衰老和逆境等自由及伤害理论的研究，维生素 C作为生物体对自由及产生伤寒的相应保护系统成员之一，更引起人们的研究兴趣。因此对其含量的测 定，即可作为抗衰老及抗逆性的重要生理指标，同时对鉴别果蔬品质优劣，选育都具有重要意义。 维生素C已被抗坏血酸氧化酶破坏，草酸、盐酸、硫酸及偏磷酸均了作为阻抑剂而增加维生素C在提取液中的稳定性。故在有硫酸及偏磷酸存在的条件下，钼酸铵与维生素C反映生成蓝色络合物。在一定浓度范围（2-32μg/ml）内服用比尔定律.并且不受提取液中还原糖及其他常见的还原性物质的干 扰,因而专一性好,反映迅速.在温度对显色有影响,且颜色深度随时间延长加深,因此显色温度和放置时间要求一致. 1、材料 新鲜果实、蔬菜及植物根、茎叶等试材。 ２、仪器 磁力搅拌器、离心机、分光光度计、天平、研钵、100ｍｌ具塞三角瓶、50ｍｌ量筒、 100ｍｌ离心管、25ml具塞高刻度试管9个、100ml容量瓶、移液管。 ３、试剂 (1)５％钼酸铵水溶液 (2)草酸（0.05mol?L-1-1）-EDTA(0.2mmol?L)溶液:取草酸6.3g和EDTA-二钠0.75用蒸馏水溶解成1升. (3)硫酸(1:19) (4)偏磷酸-乙酸溶液:取片状或新粉碎的棒状偏磷酸3g，加1:5冰乙酸40ml，溶解后，加水稀释至100ml,必要时过滤。此试剂在冰箱可保存3天，最好现用现配。 (5)表准维生素C溶液:精确称取维生素C100mg，加适量草酸-EDTA溶液溶解,并定容于100ml容量瓶，摇匀。此维生素C溶液浓度为1mg?ml-1，现用现配。 1、 制被标准曲线 吸取标准维生素C溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml，分别放入25ml具塞试管中，加草酸-EDTA溶液至5ml，依次各加偏磷酸-乙酸溶液0.5ml，1：19硫酸1ml，摇匀。再加入钼酸铵溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀。于30?水浴放置15分钟。以零管为调零点，用1cm比色皿于760nm波长侧光密度，以维生素C量作横坐标，光密度值作纵坐标，绘制标准曲线。 2、样品中维生素C含量的测定 精确称取样品5-10g于研钵中，加少量草酸-EDTA溶液，研磨至匀浆，至100ml具塞三角瓶中，加草酸-EDTA50ml（包括研磨时加入量），于磁力搅拌器上搅拌20分钟，放置半小时，倒入100ml离心管中，以每分钟4000转离心15分钟。取上清液1-5ml（视维生素C的含量而定）于20ml具塞试管中，加草酸-EDTA 5ml。以下按标准曲线项操作。加钼酸铵后如溶液变浑浊，待显色15分钟后，再以4000转/分离心20分钟。取上清液于760nm波长测光敏度。 根据测定液的光密度查标准曲线，求出相应的的维生素C毫克数，然后按下式计算样品中维生素C -1的含量，以每百克鲜样含维生素C的毫克数（mgVc?100gFW）表示： 维生素C含量=C?Vt*100 W?Vm 公式中，C为测定液中维生素C的含量（mg）；V为提取液总体积（ml）；W为样品中（g）；Vm为T 测定体积（ml）。 参考文献：植物生理研究技术实验指导， 沈阳农业大学植物生理教研室 2004年10月