归藤活血壮骨胶囊制备及应用

归藤活血壮骨胶囊制备及应用 【摘要】目的归藤活血壮骨胶囊来源于临床经验方,由续断、当归、鸡血藤、赤芍、桃仁、红花、川芎、地黄、泽兰、姜黄、骨碎补等药组成,具有活血消肿,接骨续筋的功效,用于治疗骨折及伤筋早期骨断筋伤、瘀血内阻之症。本研究为该方药制定了制剂的质量。方法采用薄层色谱法对方中各药进行定性鉴别,按药典要求对该制剂进行检查,并建立HPLC法测定制剂中川续断皂苷?含量的方法,制定制剂中川续断皂苷?的含量限度。结果建立的TLC法对诸药定性检测和HPLC法对川续断皂苷?含量测定的质量标准方便可靠。本研究提供了有价值的实验数据。经临床50例病人疗效观察,有效率达96%。 【关键词】归藤活血壮骨胶囊,薄层色谱,高效液相色谱法,质量标准 归藤活血壮骨胶囊是我院经过十余年的临床实践,结合现代医学对骨伤的研究,逐步整理完善而形成的有效方剂。该方以中医基础理论为指导,以辩证论治为基础,以中药相关配伍为原则,结合现代药理研究整合而成。该方由续断、当归、鸡血藤、赤芍、桃仁、红花、川芎、地黄、泽兰、姜黄、骨碎补等中药组成的,为硬胶囊,物为棕色至棕 1 褐色颗粒,味微苦。为保证用药的安全有效,须对其质量进行严格控制,严格按照处方及要求生产。本实验研究了归藤活血壮骨胶囊中各味药材的薄层色谱鉴别方法,制定了制剂的重要组成药味续断的高效液相含量测定方法。经临床多年观察疗效确切值得推广。 1材料 1.1仪器设备 Agilent1200高效液相色谱仪,美国安捷伦,Agilent,科技公司,G1314B紫外检测器,、依利特C18高效液相色谱柱,250mm×4.6mm, 5µm,、JA5003N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)、BT125D型电子天平(赛多利斯科学仪器,北京,有限公司)、RE-52A旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂,、超声波清洗器,天津市恒奥科技发展有限公司, 点样用定量毛细管、双槽展开缸、玻璃喷雾瓶、三用紫外仪 硅胶G薄层色谱板,青岛海洋化工厂, 1.2试剂试药 归藤活血壮骨胶囊样品,自制,批号,090309、090310、090311,。 川续断皂苷?对照品,购自中国药品生物制品检定所,批号111685-200401,、芍药苷对照品,批号, 2 110736-200629,、苦杏仁苷对照品,批号,820-200002,、红花对照药材,批号,120907-200609,、川芎对照药材,批号,120918-200608,,续断药材,购自聊城市利民药业有限公司,、乙腈,色谱纯,美国Fisher试剂公司,均购自中国药品生物制品检定所。 所用其他化学试剂均为分析纯。 2制备工艺 2.1处方 续断 当归鸡血藤 赤芍 红花 地黄 桃仁 泽兰 川芎 姜黄骨碎补 2.2制法取以上11味中药加水煎煮二次,第一次加10倍量水煎煮2小时,第二次加8倍量水煎煮1.5小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至流浸膏,提取物中加入,倍量糊精,以适量95%乙醇为润湿剂,制成软材,过22目筛进行制粒,将湿颗粒于70?干燥30min,取出整粒,填充胶囊。 3质量控制 3.1性状 本品为胶囊剂,内容物为黄棕色至棕褐色的粉末,气微香。 3.2鉴别 3.2.1取本品内容物6g,加乙醇20ml,超声处理10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法,《中国药典》2005年 3 版一部附录? B,试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶,薄层板上,以三氯甲烷,乙酸乙酯,甲醇,甲酸,40,5,10,0.2,为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5,香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。[1] 3.2.2取本品内容物2g,研细,加乙醇10ml,超声处理20min,滤过,滤液作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法,2005版药典一部附录?B,试验,吸取上述两种溶液各5µl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷,乙酸乙酯,乙醇,2?1?2,为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10,硫酸乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。[2] 3.2.3取本品内容物3g,加80,丙酮溶液10ml,密塞,超声处理10分钟,滤过, 滤液作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g,加80,丙酮溶液5ml,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法,2000版药典一部附录? B,试验,吸取上述二种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,以乙酸乙酯,甲酸,水,甲醇,7,2,3,0.4,为展开剂,展开,取出,晾干。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。[3] 4 3.2.4取本品内容物4g,研细,加乙醚20ml,超声处理20min,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。另取川芎对照药材2g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法,2005版药典一部附录? B,试验,吸取上述两种溶液各5µl,分别点于同一硅胶G板上,以正己烷,乙酸乙酯,9?1,为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯,365nm,下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。[4] 3.3含量测定 续断系归藤活血壮骨胶囊中的主药,续断的主要成分为川续断皂苷?,且有标准对照品,因此归藤活血壮骨胶囊的含量测定以测定川续断皂苷?的含量为定量指标较为合理。其方法为,以川续断皂苷?为对照品,以归藤活血壮骨胶囊为供试品,另取缺续断的空白阴性制剂,同法制成空白阴性溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20µl注入液相色谱仪,测定,即得。[5] 精密度试验精密吸取胶囊内容物溶液连续进样6次,测得川续断皂苷?的峰面积积分值,计算得川续断皂苷?峰面积RSD值为1.63,。结果表明精密度良好。 稳定性试验同一供试品溶液10h内每隔2h进样测定一次,测得川续断皂苷?的峰面积积分值,川续断皂苷?峰面积RSD值为1.92,。结果表明样品液在10h内稳定性良好。 5 重复性试验取同种待测胶囊内容物粉末制备供试溶液,平行操作6份,测定川续断皂苷?峰面积,计算其校正值,川续断皂苷?校正峰面积RSD值为2.49,。结果表明重复性良好。 加样回收率测定采用加样回收法。取已知含量的胶囊内容物粉末5份,精密称定,每份约0.55g,分别加入川续断皂苷?对照品溶液适量,制备供试溶液,测川续断皂苷?含量,计算加样回收率,平均为97.8%,5份药品RSD为2.57%。结果表明本实验回收率良好。 阴性对照试验 取缺续断的阴性制剂依法制备供试品溶液,进样,阴性对照对川续断皂苷?测定没有影响。 样品测定 取归藤活血壮骨胶囊三批,分别按上文所述方法条件操作,以外标法计算川续断皂苷?含量。三批样品测定结果基本一致,将该三批样品结果的平均值下降20,,暂定本品每粒含续断以川续断皂苷?,C47H76O18,计,不得少于120mg。 结果表明,该含量测定方法可以准确,简便、快速测定出归藤活血壮骨胶囊中川续断皂苷?的含量,是控制该制剂主要有效成分含量的较好的方法。 4临床观察 4.1病例选择, 6 归藤活血壮骨胶囊主要选用活血,消肿止痛,壮骨续筋等中药有机组方而成。适用于骨折,伤筋后局部肿胀疼痛,皮肤青紫,功能受限,面色萎黄,舌质紫暗或有瘀斑,脉细弦或涩等瘀血内阻之证的患者。本组总结病例50例,男39例,女11例。年龄11-67岁。 4.2用药方法,归藤活血壮骨胶囊内服,4粒/次,3次/日,每15天为一疗程。 4.3观察指标 患者局部症状,肿胀及疼痛的变化。 4.4疗效评价 显效,半月内局部肿胀,疼痛等症状完全消失。 有效,半月内局部肿胀,疼痛等症状明显减轻。 无效,半月内局部肿胀,疼痛等症状无改善。 4.5结果 50例中显效48例,占96%,有效1例占2%,无效1例占2%。 5讨论 本实验中赤芍等药材的TCL鉴别试验显示,阴性无干扰,方法具有专属性。制剂中续断为主药,其主要活性成分为川续断皂苷?,故选定为定量测定指标。HPLC检测方法简便,灵敏度高,重复性好,可作为本品的质量控制标准。 制剂中所用续断药材川续断皂苷?含量为2.30%,符合 7 中国药典2005年版不小于2.0%的,成品中川续断皂苷?的转移率约为91.5%,在生产制备过程中损失较小。因此该制剂的制备工艺比较合理。 经临床50例疗效观察,总有效率达96%,显示临床疗效确切,值得推广。 参考文献 [1]中国药典,一部[S]2005,28,64. [2]尤献民,邹桂欣,张彗影.乳康平颗粒剂中赤芍、当归及黄芪的薄层鉴别[J]时珍国医国药,1997,04: 52. [3] 次旦扎西 ,刘松青,林彩.脑伤泰颗粒剂中红花和桃仁的薄层色谱鉴别[J]中国药业,2003,12,9,,43. [4]赵丽恋,夏新华,川芎醇提工艺研究,中成药,2002,24,3,,173,174. [5]谭洪根,林生,高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷?的含量[J],中国中药杂志,2006,31(9),727. 8