叶绿素荧光叶室

叶绿素荧光叶室 第二十七章 叶绿素荧光叶室 6400-40荧光叶室是LI-6400建立在LED基础之上的用于荧光测量和光源控制的一个附件。这一章主要介绍如何安装和使用荧光叶室。P.27-16中的操作概要提供了LCF和LI-6400使用过程中最主要的信息。如果用户缺少实际操作经验，可以首先按照本使用第三章中LI-6400的基本操作步骤进行实验，然后再按照P.27-36中的步骤进行使用荧光叶室的基本实验。 第一部分 荧光基本理论 一、什么是荧光, 当一个叶绿素分子吸收光量子后，光量子的整个能量被传递到叶绿素分子中的原子价电子中，从而使这些电子被激发。这些被激发的电子又以很快的速度返回到基础能量状态。叶绿素分子所吸收的光能以三种形式释放:1)荧光F;2)热量H;3)光化学光P，可以将这种关系表示为: F、H、P各自在被吸收的量子能量的总和中所占的比例之和为1，P也被称为量子产量或量子效率。当突然增加叶片表面的光照强度时，光化学光P将降低，而热量H和荧光F将增加。在饱和光照强度下，随着光照强度的进一步增加，光化学光P将不在增加，所以P将是0。当这种情况发生时，F和H将达到各自的最大值，即F和H。如果假设所有的非活化能都转变成热量和荧光，方程(27-1)mm 将变成: 同时假设热量H和非激活的荧光F之间的比值不变，因此 联合方程27-3和方程27-4可以得到 在饱和光和非饱和光条件下对荧光作两次测量，就可以通过方程27-5得到热量H，同时通过方程27-1得到光化学P。 如果非饱和光为完全黑暗，并且叶片已经完全适应了周围的黑暗环境，方程27-6可以变成下面的形式: 在方程27-7中，Fo是“最小荧光”或完全经过暗适应的荧光，Pdark是经过暗适应的叶片，所吸收的量子中用于光化学反应中的比值，通常将该值写为Fv/Fm，对大多数植物而言，Fv/Fm为0.8左右。 作为对比，如果非饱和光不是0，并且叶片完全适应了光照环境(光合作用速率稳定)。方程27-6的形式则变成: 在方程27-8中，Fs是稳态荧光，Fm?为饱和闪光条件下的最大荧光，Plight是经过光适应的叶片，所吸收的量子中用于光化学反应中的比值，通常将该值写为通常写为PS?或?F/ Fm?。 一个经常用到的与方程7-8相似的关系式为: 该关系式代表光照条件下氧化的(开放的)PS?反应中心所捕获的能量效率， Fo?为经过短暂黑暗条件的、光适应叶片的最小荧光。 量子产量也可以通过气体交换的测量得到，如方程27-10: -2-1在方程27-10中，代表暗同化速率(µmolms)，I为瞬时的光通量密度Adark -2-1(µmolms)，α是叶片对光的吸收系数Adark与暗呼吸速率的大小相同，但leaf 符号相反。 -2-1驱动PS?的实际量子流量(µmolms)可以通过对荧光的测量而计算出来。可以称之为电子传递速度(ETR)，计算公式为: 在方程27-11中，f代表所吸收的量子中被PS?利用的比例，通常情况下。C3植物的f为0.5，而C4植物的则为0.4。 光化学猝灭的计算公式为: 光化学淬灭中主要包括光合作用和光呼吸，并且倾向于在低光照条件下保持最大，因为此是叶片光能利用效率最大。荧光的非光化学猝灭q主要包括热量散N 失等，其计算公式为: 高光照条件下，q最高，这可能反映了植物的一种自我保护机制，目的是为了N 避免类囊体膜被过度激发。非光化学淬灭的另外一个计算公式为: 二、什么是6400-40荧光叶室, LCF是LI-6400的一个建立在LED基础上的荧光/光源附件，它包括各种各样的LED光源(3个蓝光，1个远红光和2个红色调制测量光)。下面是关于6400-40LCF如何工作的概述。 1、测量荧光 LCF利用两个红色调制LEDs(其中心波长大约为630nm，见图27-2)和一个探测器来测量荧光。LEDs以0.25、1、10或20KHZ的频率(由用户选择)进行调制(开或关)。称这种调制过的红光为“测量光”。瞬时光照强度的变化对叶片光合速率的影响可以忽略，而且调制LEDs对荧光信号的影响也很小，但是因为这种荧光信号信号的变化非常有规律，所以可以被检测并通过LCF内的线路被解调制。探测器对光源进行过滤，目的是探测到715nm处光照(PS?荧光带)，而且输送到LI-6400中的非调制信号与荧光信号的振动大小成正比。 为什么荧光调制频率的大小不同,这里有一个 trade-off(平衡、交替使用)效应:最低频率条件与高频率条件相比，调制测量光所贡献的光合有效辐射很小，因为LEDs的开放频率为1秒钟250次。当测量暗适应的叶片的最小荧光时(方程27-7中的Fo)，测量光的强度不引起叶片的光合作用非常重要。对250HZ而言，每秒钟只能对荧光作250次测量，由于最后平均荧光时的样本数量有限，所以将引起荧光计算的相对误差。相反，在饱和闪光条件下，并不关心测量光束对光合作用的贡献，因此可以利用20KHZ的调制频率，这样每秒将有20,000个测 量结果，从而使最后荧光信号的变异较小。 LCF有一软件可以用来选择荧光信号的平均(过滤)频率。可选择的频率包括0.5、1、5、10、20、100、200HZ。多数情况下，可以利用0.5或1HZ，但是 在饱和光条件下，当荧光信号变化很快时，推荐使用20或50HZ的频率。2、饱和闪光 最大荧光指光系统在光饱和条件下的荧光大小。这是荧光测定仪的关键组成部分。LCF通过27个红色LEDs(中心波长在630nm，见图27-2b)获得最大光 -2-1照强度(>7000μmol photons m s)。在饱和闪光过程中，通过安装在LCF内的一个经过校正的光照探头检测光合有效辐射的大小。 3、光化学光 光化学是指LCF中提供的用于驱动光合作用的光。在LCF中，用于提供光化学光的LED和用于饱和闪光的LED相同，但同时增加了3个蓝色LEDs(470nm)。作为光源。LCF的功能和6400-02B红蓝光源相同，但LCF对红光 -2和蓝光的控制相对独立。LCF中蓝光量子流量的最大值为200μmol photons m -1s，因此蓝光在饱和光照中所占的比例大约为饱和太阳光照的10%。可以用LCF内部的光照探头控制叶室内的光合有效辐射的大小以达到特定的目的值。 4、快速暗适应 在测量一个光适应叶片的最小荧光时，主要包括远红光的LEDs时关闭光化学光(中心波长为740nm，见图27-2C)。远红光可以即刻驱动PS?，目的是吸收PS?中的电子。 5、LEDs的状态指示 在连接LCF的37针的连接 器上，包括4种LEDs的指标灯 (MSR、BLU、RED、FR)。当 应用LCF内的任何一个LEDs时， 37针的连接器上对应的LEDs的 指标灯将闪光(图27-3)。 第二部分 LCF的安装 LI6400-40LCF要求下面两个中的任何一个: , 5.0版本的软件(LPL 和OPEN) , 4.0版本的软件和6MB的内存 为了检查仪器内存是否安装了LI-6400的5.0以前的版本，进入Filer中，选择K键进入Disk，然后选择S键。接着选择任何一个Disks(Sys、User等)，在选择Enter键。显示屏幕中将出现已经利用的和还可利用的内存空间大小。 如果Used+Available的总和大约为200万字节，如图27-4中显示，那么该仪器适合于安装OPNE5.0版本的软件。如果Used+Available的总和大约为524,000字节，那么该仪器的内存太小，必须通过下面两种方法中的一种对其进行更新。 , 更新到版本5.0。从LI-COR公司订购编号为64500-915的配件(该方法非常 好。因为用户将得到200MHz的处理器、128M的RAM、64M的闪存，因 此仪器的运行速度非常快)。 , 更新为更大的内存板(从LI-COR公司订购编号为6400-906的配件)。 一、硬 件 在该过程中，应该关闭LI-6400或使LI-6400处于休眠状态。 1 在bundle中安装cable 有两种方法，一种是利用LCF配件包中的velcro ties将LCF电缆和LI-6400的电缆捆绑在一起(图25-5a)。如果将长期利用LCF，最好将LCF的cable插入到bundle中(图25-5b)。后一种花费的时间较长。但当长期应用LCF时非常有意义。 2 去除IRGA器头部的上部和下部叶室 利用LI-6400和LCF工具包中的3/32六角hex将固定上部和下部叶室的长的螺丝拆除。不再连接叶室上部的光照探头和叶室下部的叶片温度探头(图27-6)。 3 连接LCF叶室的下面部分 叶室底部的3个O形圈一定要放置好，并且将其连接到IRGA分析器头部， 接着安装叶片温度探头(图27-7)。 4 连接LCF的上面部分 确认O形圈放置在应有的位置，并且连接LCF的主体部分。 5 连接cables 在IRGA分析器头部插入小的4针的连接器，并且将15针的LCF连接器与它的cable相连接，将这个cable另一端的37针连接器插入到LI-6400的操作平台上。 二、软 件 为了以后应用的方便，必须创建一个荧光测定仪的配置文件。 , 建立一个荧光测定仪配置文件 1 进入安装菜单 在OPEN4.0主界面下，f2(Config Menu)?“Installation Menu” ?Enter 2 选择“6400-40荧光测定仪” 选择“6400-40 fluorometer”?Enter?出现原始显示界面(图27-9)?Enter 3 选择阔叶或针叶叶室, 接下来的步骤将选择“阔叶或针叶”叶室(图27-10)。如果选择阔叶叶室，叶片温度探头将被直接用来测量叶片温度。LCF的界面层导度表(P27-74中的LCF界面层导度)将被用来计算作为叶面积函数的界面层。 如果选择针叶叶室，界面层将被假定为常数，并通过能量平衡方程计算得到叶片温度。用户需要将叶室中的温度探头放置在略低于叶片下表面的位置，以测量针叶附近的空气温度。计算得到的温度将在显示屏幕h行中以变量“EBTleaf”的形式出现，而变量Tleaf则是针叶附近的空气温度。在本使用手册第十七章的“利用能量平衡”中有关于能量平衡方法的详细介绍。 4 观察配置文件 LI-6400的安装程序将让用户查看或编辑已经存在的默认配置文件(图27-11)。接着选择保存按钮(f2)。 5 命名配置文件 用户可以利用仪器默认的文件名或将仪器默认的文件名改变成自己所希望的文件名。对针叶叶室而言，默认的配置文件名为“Fluorometer EB”而不是“Default Fluorometer”(图27-12)，选择Enter键或f5进行相应的操作。用户在这里定义的文件名将与配置清单或者当用户重新回到配置文件中时的文件名相同(图27-13)。 6 退出配置对话窗口 Quit(f5)?Enter?Escape?Config Menu 7 选择LCF配置文件 为了应用LCF配置文件，Config Menu?Reset to User Config?从一系列配置文件中选 择“Default Fluorometer”或“Fluorometer EB”或用户自己命名的文件名(图27-13)。 第三部分 操 作 摘 要 图27-14中显示了与LCF相关的、在新测量模式下的屏幕显示内容和功能键的变化。 一、作为光源的LCF 注 意 点 一旦LI-6400被配置为运转LCF，下面所有描述的光源控制选择都将可用。只有在5.0版本中，如果用户将6400-40定义为光源(通过P8-4中的光源控制工具)，用户将可以选择将LCF用作荧光仪或仅仅是作为一个光源。如果用户选择了后者，在新测量模式下只有光源控制是可以利用的，而所有与荧光仪有关的控制工具(level8、level9和level0功能键)将被隐藏。 警 告 不要像6400-02Red/Blue光源那样，在光源控制组中对LCF进行操作和配 置。这样将会使LEDs发光，但是非内在的光探头测量将会产生反馈效应。LCF将会进行用户所不知道的操作，在完全光照条件下，并且保持的时间将延长。这样将会很快的降低最大饱和闪光的潜在强度大小。 LCF中对红光和蓝光强度大小的控制相当独立，可以通过指定蓝光的强度大 -2-1s)或指定蓝光在所有光照强度中所占的百分比来进行操作。LI-6400小(µmolm 中传统的光源控制组(level2，f5)同样适用于LCF。另外，在LCF中增加了立即打开和关闭光源的功能键(Actinic ON/OFF，level9、f4)，同时在LCF中有不经过实际打开光源而预先设定所期望的光化学强度值的功能键(Define Actinic，level8、f3)。 当选择LCF作为光源时，光源控制组(图27-15)与P17-18中描述的标准光源控制组有些细微差别(图27-15)。 图27-15中的5种光源选择的具体含义在表27-1中有详细描述。在这5种光源选择中，P、F和C都有两个选项。用户可以通过一个空格或逗号将两个目标值分开。如果只输入了一个值，则指第一个目标值(总光照强度或红光的光照强度)。如果在一个目标值的前面有一个逗号，则是指第二个目标值(蓝光的光照强度)(表27-2)。 通过外部的探头或用户自定义通道可以得到Tracking Option(T)的目标值。正常情况下，用户将选择外部的光量子探头作为目标值，但是如果用户希望光照强度值比周围的光照强度值高2倍，那么用户将需要建立一个计算和Track该变量的变量。Tracking模式以蓝光所占的比例来设置光源，而且用户需要定义蓝光所占的百分比。 1、测 量 荧 光 打开荧光的测量光后(level9，f1)，原初的荧光信号将在显示屏幕的m行中以变量F的名称出现。当LCF叶室为空或测量光关闭时，F应该为0，否则应该对仪器进行调零(见P27-61中的调整荧光信号的零点)。典型的荧光信号F的最大值大约为8000。 2、饱 和 闪 光 引起饱和闪光的途径有如下几个(图27-17)。如果叶片经过了暗适应，用户希望得到Fm(暗适应叶片的最大荧光)，选择Do Fm或Do Fo Fm(level0，f2或f3)。如果叶片经过了光适应，用户希望得到Fm?(光适应叶片的最大荧光)，选择Do Fs Fm?或Do Fs Fm?Fo?(level0，f3或f4)。如果仅仅为了引起一个强闪光而没有计划得到的值，则选择Flash(level9，f2)。 警 告 LCF的饱和闪光非常的亮。如果直接观察LEDs，将会伤害眼睛。 3、暗 脉 冲 暗脉冲(短暂的暗适应)的目的测量光适应叶片的Fo?。图27-18显示了暗脉冲的时间参数。图27-19显示了引起LI6400-40暗脉冲的方法。 4、查看强闪光和暗脉冲的具体内容 进入View Fsh/Dsk(level0，f5)中，用户可以查看最近的强闪光或暗脉冲的具体内容。在软件版本4.0中，通过View Flash(或F或B)查看上一次闪光过程中荧光大小或通过View Dark(软件版本4.0中为D)来查看上一次暗脉冲过程中的荧光大小。 在5.0版本的软件中，用户可以将最近进行强闪光(或暗脉冲)时的数据保存到文件中。仪器将自动为用户命名文件名并保存在目录“/User/LCF”中。文件名中包括了强闪光的数量和时间。如: 一个典型的强闪光文件的保存形式如图27-21所显示。 5、查看已经保存的强闪光文件 当一个强闪光(或暗脉冲)文件被保存后(通过S选择)，可以通过LCF校正菜单中的“-View Flash File”程序查看其中的内容，这个程序将提示用户利用标准的文件对话框进行，并且让用户做出Flr、PAR或者两者都有的图形(图27-21)。这个操作在一个循环下完成，因此利用该循环来查看一系列的、经过强闪光的存储文件非常容易。 6、显示内容摘要 表27-3中概括了经过“Std Flr Disp”配置后，在新测量模式下的显示内容。“Std Flr Disp”定义下的默认的显示组分别为: 表27-3 “Std Flr Disp”增加的显示内容 标记 含 义 ID, g Prss_KPa ParIn_μm %Blue ParOutμm %Blue 蓝色光化学光在内部ParIn_μm中所占的百分比 -81 M F dF/dt FlrCV_% FlrEvent F 在连续测量下，荧光的强度大小 -80 dF/dt 过去20个读数中，荧光信号每分钟的变化率 -98 FlrCV_% 过去20个读数中，荧光信号的变异系数 -97 FlrEvent 表明所进行的前个行为或所设置的前一个变量 -91 n Fo Fm Fv/Fm Fo 黑暗条件下的最小荧光。通过Do Fo或Do Fo Fm(level0，f1或f3)得到 -86 Fm 黑暗条件下的最大荧光。通过Do Fm或Do FoFm(level0，f2或f3)得到 -88 Fv/Fm 黑暗条件下可变荧光与最大荧光的比值(见P27-3的方程27-7) 4202 o Fo? Fm? Fv?/Fm? Fs Fo? 光照下的最小荧光。通过Do Fo?或Do Fs Fm?Fo?(level0，f3或f4)得到 -87 Fm? 光照下的最大荧光。通过Do Fs Fm?或Do Fs Fm?Fo?(level0，f3或f4)-89 得到 Fv?/Fm? 光照条件下可变荧光与最大荧光的比值(见P27-4的方程27-9) Fs 稳态荧光强度。该值通过Do Fs Fm?或Do Fs Fm?Fo?(level0，f3或f4)得4211 到 P PhiPS2 ETR qP qN PhiPS2 PS?效率。见P27-3的方程27-8 4212 ETR 电子传递速率。见P27-4的方程27-11 4223 qP 光化学猝灭。见P27-5的方程27-12 4216 qN 非光化学猝灭。见P27-5的方程27-13 4220 q Adark LeafAbs PS2/1 PhiCO 2 -2-1Adark 暗光合速率(μmol m s)(<0，则是呼吸)。通过Prompt All(level3，4213 f5)得到 LeafAbs 叶片的吸收系数。通过蓝光的百分比计算和用户输入的蓝光、红光的吸收4207 值计算得到。P27-72的方程27-15 PS2/1 光系统的分配因子。通过通过Prompt All(level3，f5)得到。指P27-4的4222 方程27-11中的f PhiCO 见P27-4的方程27-10 4215 2 r F M:KHZ HZ Gn F 连续测量的荧光强度 -80 M:KHZ -92 测量光束的参数:强度大小，调制、filter和gain。见P27-34的表27-6 HZ Gn S FlrMax F:Int Blu KHZ HZ FlrMax 前一个饱和闪光中的最大荧光 -82 F:Int Blu 饱和闪光的参数:持续时间、强度、蓝光、调制和filter。P27-34的表27-7 -93 KHZ HZ t FlrMin D:Dur Far Bfr Aft KHZ HZ FlrMin 前一个暗脉冲中的最小荧光 -95 D:Dur Far Bfr 暗脉冲参数(P27-35的表27-8):持续时间、 -94 Aft KHZ HZ 暗脉冲前的时间、暗脉冲后的时间、调制和filter 显示屏幕中增加的其它变量 -2-1FPeak_μm 前一个饱和闪光中产生的最大光照强度(μmol m s) -83 FCnt 从电源打开后的饱和闪光数量 -84 测量光强度为0时获得的荧光信号。该值作为Offset Fzero -85 计算实际的荧光值。见P27-61的“荧光信号零点” 最后Fs时的ParIn_μm值。用来保持电子传递计算的变化， -96 ParIn,Fs 因为在Fs再次测量前，ParIn_μm发生相应变化。 BlueAbs 460nm处的叶片吸收。用户可以输入常数 4205 RedAbs 640 nm处的叶片吸收。用户可以输入常数 4206 PARAbs 吸收的PAR。ParIn_μm*LeafAbs 4208 NPQ 另一个非光化学猝灭。P27-5的方程27-14 4221 注:ID<0，指系统变量;ID>0，指用户变量。 7、功能键摘要 表27-4概括了当光源为LI6400-40LCF时，新测量模式下功能键的具体含义。 表27-4 新测量模式下的LCF功能键 标记 含义 8Flr QuikPik Flr Editor Define Actinic Flr Adjust Rcrding OFF Flr 出现一系列保存荧光设置的文件。选择其中的一个应用于文件中 QuikPik Flr Editor 查看、修改和保存等测量光、饱和闪光和暗脉冲的设置 Define 在没有打开LEDs的条件下，设置光化学光。 Actinic 见P27-17中的“LCF作为一个光源” Flr Adjust 在不间断测量的条件下，改变测量光、饱和闪光、暗脉冲的设置 Rcrding 将荧光开/关。该记录不依赖于正常的 ON/OFF 数据记录(level1，f1)。见P27-29中的荧光记录。 9 Meas is ON Flash Dark Pulse Actinic is OFF FarRed is OFF Meas is ON/OFF 测量光开/关 Flash 进行一个饱和闪光，但仅仅更新FlrMax Dark Pulse 进行一个常规的暗脉冲，但并不改变Fo或Fo? Actinic 光化学光开/关 Far Red Is ON/OFF 远红光开/关 O Do Fo? Do Fs Do Fs Fm? Do FsFm?Fo? View Fsh/Drk Do Fo? 进行一个暗脉冲，并将Fo?改变为测定值，接着保存Fo?(如果数据文件打开) Do Fs 将当前的F改变为Fs的测定值并保存(如果记录文件打开) Do Fs 将当前的F改变为Fs的测定值，进行饱和闪光 Fm? 得到Fm?并且保存(如果记录文件打开) Do Fs 将当前的F改变为Fs的测定值，进行饱和闪光得到Fm?， Fm?Fo? 然后进行暗脉冲得到Fo?并保存(如果记录文件已经打开) View 让用户查看或保存上一次的闪光、闪光过程中的ParIn或暗脉冲。 Viewing 见P27-22中的Fsh/Drk Flash and Dark Pulse Details。 0 Do Fo Do Fm Do Fo Fm Do Fo 将当前的F改变为Fo，并保存(如果记录文件已经打开) Do Fm 进行饱和闪光，改变Fm，并保存(如果记录文件已经打开) Do 将当前的F改变为Fo，进行饱和闪光， Fo Fm 改变Fm，并保存(如果记录文件已经打开) 8、记录的有关问题 8. 1正常的数据记录 LI-6400的数据记录可以概括为下面的三种方式: 1)通过level1，f1或者level5，f1(AutoProgram)打开一个数据记录文件;2)用户可以自定义保存在记录文件中的参数(见P9-7中的“决定记录中的参数”);3)在AutoProgram条件下自动记录或通过level1，f1手动记录。 当安装了LCF叶室后，增加了以下两种数据记录的方法: 1、增加了4个新的记录功能键 如果已经打开了一个记录文件，level0下所有的“Do”功能键都可以用来记 录数据。例如Do Fo Fm将像level1，f1(Log)一样记录一个实验数据，但 是当记录了Fo后，一起进行一次饱和闪光，接着再记录Fm。如果用户想知 道当仪器发生饱和闪光或暗脉冲后，气体交换速率的变化以及两者之间多少 有意义的值可以同时记录，用户可以自己阅读P27-73中的“同时测量气体 交换和荧光”。 2、荧光发生事件过程中的记录标记 当打开一个记录文件时，任何荧光测量事件都将在记录中增加一个标记，无 论是自动记录还是手动记录。表27-5概括说明了这些荧光事件。 图27-50显示了记录文件中对数据记录格式的一个实例。 8.2 荧 光 记 录 在实验过程中，随着时间的变化来记录荧光非常方便。通过Rcrding On/Off (level 5，f5)可以控制荧光记录的开/关。当第一次打开荧光记录时，仪器将提示用户输入一个目的文件名。在记录进行过程中，文件中将记录原始的荧光信号和时间。在新的测量模式下，记录数据的时间间隔一般为1秒或2秒。但在饱和强闪光或部分的暗脉冲过程中时间间隔为0.05秒。在新的测量模式下，当仪器提示用户从操作键盘输入相关的信息时，如开始一个自动记录程序或改变叶片面积，在目的文件的数据记录中都将有间隔。 9、改变荧光叶室的控制参数 6400-40荧光叶室有很多的控制参数，如测量光的强度、强闪光的强度和暗脉冲的时间等。表27-6详细介绍了这些参数的具体含义。 1、测量光 用户可以控制测量光束的强度大小和调制频率。通过用户自定义 的时间来平均从叶片返回的荧光信号 2、强闪光 仪器通过红色光化学LEDs完成饱和闪光过程。用户可以自定义 闪光的强度大小、闪光时间、荧光调制频率和滤波器的的大小。 3、暗脉冲 对经过光适应的叶片，为了测量Fo?，可以通过提供一个打断光 化学反应进程的短暂的黑暗时间来实现。图27-18中显示了用户自定义 的暗脉冲时间和测量参数。 用户可以通过以下几个途径从操作键盘调整荧光控制参数 Flr Editor 通过测量界面下的level8，f2进入Flr Editor(图27-23)。在一个对话框内可以完成三组荧光测量参数中任何一组的编辑。只有当选择了OK以后所有参数的改变才会生效。所有的参数设置可以保存在一个文件中，同时可以查看和编辑以前保存的荧光参数设置。 Flr QuikPik 通过level8，f2可以进入Flr QuikPik后，将显示一系列的荧光参数文件(用户通过Flr Editor而创建的)，而且用户可以选择其中的任何一个。 Flr Adjust 通过level8，f4可以进入到Flr Adjust(图27-24)。Flr Adjust的最大优点是可以不打断荧光测量数据的收集而调整荧光的测量参数。缺点是数据的收集和计算正在进行，所以操作键盘的反应不太灵敏。必须注意在进入Flr Adjust之前，将m行调整为显示屏幕的第一行，这样会看到荧光参数的改变对测量结果的影响，同时通过f4(Charts)可以反复查看荧光强度随时间的变化图形。 表27-6 荧光测量参数 编辑的标记 含 义 Msr Intensity两个蓝色测量LEDs的光照强度。典型的值为5。用户可以输入如3.3的数(0-10)(Int) 值，没有必要integers。有效的resolution是0.1. Msr Modulation正常的调制频率(也就是说不是在饱和闪光或暗脉冲中)。(0.25、1、10或(KHZ) 20KHZ) Msr Filter(HZ) 正常测量条件下的平均时间(也就是说不是在饱和闪光或暗脉冲中)设定 的时间长度(0.5、1、5、10、20、50、100、200HZ)。典型的设置为1。 Gain(Gn) 荧光信号的放大系数(10、20、50或100)。典型的设置为10。 表27-7 荧光的饱和脉冲参数 编辑的标记 含 义 Flash Duration(S)饱和闪光的时间。该值的范围在0.2-2.0之间。 (Dur) Flash Intensity饱和闪光的强度。典型情况下，当设置为10时对应的的强度为6000或更(0-10)(Int) 多(这将被测量并在u行中显示为“FPeak_μm) Blue LEDs(Blu) 饱和闪光中蓝色光化学光的设置。“Off”代表蓝光关闭，“NoChange”不改 变蓝光的强度，MaxOn代表将蓝光完全打开。 Msr Modulation饱和闪光中的荧光调制信号。典型的设置为20KHZ。 (KHZ) Msr Filter(HZ) 饱和闪光中的平均时间。典型的设置为20HZ。 表27-8 荧光的暗脉冲参数 编辑的标记 含 义 Dark Duration(S)(Dur) 暗脉冲的时间。该值的典型设置为<5秒。 -2-1Far Intensity(0-10)(Far) 远红光的强度(当设置为10时，典型的大小为5(μmol m s) Far red Pretime(S)(Bfr) 远红光的时间设置。见P27-21的图27-18 Far red Posttime(S)(Afr) Msr Modulation(KHZ) 暗脉冲中的荧光调制信号。 Msr Filter(HZ) 暗脉冲中的平均时间。典型的设置为1HZ。 第四部分 基 本 实 验 下面是利用LCF进行实验的一些实例，其中前三个实验仅仅关于荧光，而后两个实验则是关于荧光和气体交换的同时测量。在做前三个实验之前，请用户确认LCF的功能正常，如P27-66中“基本功能检测”描写的那样。 一、荧光实验 这些实验包括一些基本的荧光测量，如确定暗适应和光适应叶片的量子效率等。通过这三个实验，用户可以详细的了解LCF荧光测定仪的使用步骤。 1、测量Fv/Fm Fv/Fm是PS?反应中心的最大量子效率。这个比例通过参数Fo和Fm得到。Fo是经过暗适应的植物叶片，在PS?原初电子受体开放(QA全部氧化)条件下的荧光水平。Fm是当植物叶片受到饱和闪光激发后的最大荧光水平，如所有的电子受体都“关闭”等(QA全部还原)。Fm和Fo之差即为可变荧光Fv。Fv/Fm的正常范围为0.75~0.85之间，该比值的大小依赖于叶片的健康状况、叶龄和前处理的条件。 1.1暗适应的叶片 最好的暗适应方法是将叶片在黑暗中放置一个晚上。然而一般来说在测量Fv/Fm之前使叶片在黑暗条件下至少适应20min也是足够的。 1.2设置原初的荧光参数 通过level8，f2或f4，确认LCF的参数设置如表27-9中的一样。 1.3记录 如果用户愿意，通过level1，f1打开和命名存储测量数据的目的文件。 1.4在黑暗的LCF中夹入第一个叶片 通过level9，f1打开测量光束并且通过level9，f4和f5关闭光化学光和远红光，检测m显示行中荧光信号F。在几秒内，F应该达到稳定。观察m行中dF/dT和/或Flr-CV%，以此确认仪器的稳定性。一般来说，当dF/dT<5 或Flr-CV%<1时，便可以认为F是稳定的。如果F不稳定，那么测量光的强度应该降低，而且调制频率应该很小(0.25 KHZ)，应该将测量光的强度设置的足够高，以便测量到荧光信号，但同时又不能高的以驱动PS?的光合作用。 1.5 Do Fo Fm 当F稳定后，通过(level0，f1)选择Do Fo Fm。在饱和强闪光之前和之后LEDs的状态指示灯将闪光。如果打开了一个目的存储文件，将会听到仪器记录测量数据的响声。注意Fo、Fm、Fv/Fm都显示在屏幕的n行中。如果Fv/Fm不在0.8左右，可能的原因是暗适应时间不够或者是LCF的设置参数不对。 1.6 查看强闪光的具体细节 通过level0，f5(View fsh/drk)并接着选择F来查看强闪光的具体细节(图7-20)。在强闪光中，在设置时间内以20HZ收集的详细数据将显示出来。如果叶片经过了足够的暗适应，通过强闪光的具体细节很容易看出LCF的设置是否合适。图27-6显示了好的和不好的强闪光图形。在P27-58中的“Optimum Flash Intensity”中有关于判断强闪光设置是否合适的详细内容。 1.7 重复其它的叶片样本 选择其它的叶片进行重复实验，目的是比较经过胁迫的不同植物和不同健康状态的测量结果之间的差别(例如水分或温度胁迫)。 , 问题:胁迫增加或减少了Fv/Fm,PS?对环境胁迫如温度、干旱和辐射 等非常敏感。胁迫将引起Fv/Fm的降低。影响荧光测量结果的因素主要 包括叶龄、叶片健康状况和环境因子条件等。 2、确定PS?的效率 PhiPS2(也称为?F/Fm?)指PS?所吸收的光量子中用于光化学反应的比例。通过对光适应叶片的测量而得到(方程27-8)，PhiPS2主要通过Fs和Fm?两个的计算方程得到。Fs指稳态荧光，而Fm?经过饱和强闪光的光适应叶片的最大荧光产量，参见Genty et al.(1989)。 2.1 选择经过光适应的叶片 选择至少经过20分钟在所希望的光照强度下适应的叶片。对这个实验的 第一部分而言，可能需要相同叶龄和相似光照条件的几个叶片。在实验 的最后，用户可以再实验其它光照水平的叶片。 2.2 设置LCF的参数 通过level8，f2(Flr Editor)或level8，f4(Flr Adjust)来设置测量光和 强闪光的参数(表27-10)，同时将光化学光的强度调整到叶片周围的水 平并且打开(level2，f5)。 2.3打开一个存储文件 2.4夹入第一个叶片，并使其平衡 等待一段时间直到m显示行中F稳定，观察dF/dt或FlrCV-%的变化。如 果用户所利用的光化学光与叶片所适应的光照强度不同，可以需要适应 20min或更长时间，目的是为了使叶片适应新的光照水平强度。2.5 Do Fs Fm? 一旦m显示行中的F稳定，通过level0，f2(Do Fs Fm?)进行饱和闪光 或减少任何氧化的原初电子受体。Fs Fm?在O显示行，PhiPS2在P显示 行中。PhiPS2和实验,1中的Fv/Fm相比较其大小如何,(PhiPS2应该 比Fv/Fm更小)。在下面有关于这方面的解释。 2.6 通过level0，f5(View Fsh/Drk)查看饱和强闪光的具体细节 光适应叶片饱和强闪光的具体细节和图27-26中A图相似，但是其振幅 较小，而信号的变化可能更明显。如果饱和强闪光的图形更像曲线B， 那么用户应该重新设置植物材料的LCF参数。 2.7 选择相似叶龄和光照强度条件的其它叶片，重复步骤3到步骤5。 2.8 实验不同的光照强度 -2-1-2比较光照强度较高(2000μmol m s)和光照强度较低(100μmol m -1s)叶片的PS?的量子产量不同。 , 在低光照条件下，PS?的量子产量通常较高，因为叶片所吸收的光能中 有较大的比例被用于光化学反应中;而在高光照强度条件下，因为叶片 所吸收能量中的很大比例通过非光化学过程而散失，所以经过高光照强 度光适应的叶片的?F/Fm?较低。 3、确定Fv?/Fm?和猝灭系数 在这个实验中，将解释另外三个有用的荧光参数。Fv?/Fm?(方程27-9)指在光照条件下氧化(开放)PS?反应中心的能量捕获效率。在光下有两个减少荧光水平的参数，qP和qN(方程27-12和方程27-13)，它们之间是相互竞争的过程。很多学科都会用到这些参数，但是后两者主要在植物胁迫生理的研究中作为一个普遍的指示指标。 所有这三个参数都要用到Fo?，即光适应叶片在黑暗条件下的最小荧光。确定Fo?的方法包括1)让样品暗适应直到所有的PS?中心被氧化(暗适应时间通常为20min或更长);2)利用远红光激发PS?，并且迫使电子从PS?流向(drain)PS?(图27-28)。对远红光而言，完成这个过程只需要几秒钟的时间。LCF利用第二种方法来确定Fo?。在图27-18中关于暗脉冲时间参数的详细说明。 3.1选择一些植物 在这个实验中需要一些经过暗适应和光适应的叶片。 3.2设置LCF参数如实验1 除了需要设置表27-9中的参数外，这个实验需要计算Fo和Fo?。为了计算Fo?，设置如图27-11中的暗脉冲参数。 3.3、夹入第一个实验叶片 关闭光化学光，并且打开测量光，直到显示屏幕m行中的F稳定(例如|dF/dT|<5)。 3.4测量Fv/Fm 通过level0，f1(Do Fo Fm)测量Fo、Fm。Fo将立即显示为当前的荧光测定值，然后给出一个强闪光，在强闪光的过程将测定Fm。在强闪光以后，数据将被记录，在n行中检查Fv/Fm是否合理，最后通过level0，f5查看强闪光的具体细节。 3.5打开光化学光并且使其叶片平衡 设置光化学光的大小到中午平均的光合有效辐射水平。在进行下一个步骤之前，使叶片在新的光照强度下适应1小时。如果用户想查看植物是否已经适应了新的光照强度，查看F的稳定性。 3.6 Do Fs Fm? Fo? 通过level0，f4(Do Fs Fm? Fo?)将完成下面的过程:记录Fs，进行一个强闪光，接着记录Fm?，然后进行暗脉冲过程，记录Fo?。当完成以上操作后(大约需要12秒)，查看强闪光的具体细节，并且在显示屏幕中的O行中检查Fs Fm?和Fo?。经过光适应的强闪光的图形应该类似于图27-26中的A图。 3.7查看暗脉冲的具体细节 通过查看荧光信号在暗脉冲期间是否水平来检查暗脉冲的设置是否合适(图27-30)。 3.8比较Fv/Fm和Fv?/Fm? 查看显示屏幕O行中的Fv?/Fm?的大小。问题:Fv?/Fm?和Fv/Fm(实验,1)相比较，大小如何,答案应该是Fv?/Fm?8。在“叶绿素荧光参考资料”中有关于PhiPS2/PhiCO的更多信息。 2 通过f3(View Data)观察回归直线的斜率和截距，接着选择C来计算直线的斜率。在图27-35显示的数据中，Y轴截距是-0.0234，直接的斜率为11.0(在P12-14中的曲线拟合中有关于斜率和截距的更详细信息)。 第五部分 荧光自动记录程序 一、标准荧光提示语言 这些提示语言对三个荧光自动记录程序而言，并且组成了用户被提问问题的第一组(表27-14) 二、Flr A-Ci曲线 “Flr A-Ci曲线”主要用来完成一个A-Ci曲线，与P.9-21中的“A-Ci曲线”相似。在完成每个记录的同时，将进行荧光测量。所用到的提示语言在表27-15中。 三、Flr的动力学 “Flr动力学”指简单循环的时间。每个循环都有一个等待时间。可以选择设置仪器的匹配与否以及不同的荧光事件(Do Fs Fm或Do Fs Fm Fo?)。提示语言在表27-16中。 四、Flr光响应曲线 “Flr光响应曲线”在完成一个光相应曲线的同时并且进行荧光测量，其提示语言在表27-17中。 五、Flr循环 “Flr循环”是用来作重复荧光测量的简单程序，其提示语言在表27-18中。 第六部分LCF的校正条目 通过Calib Menu中的“-light Source Calibration Menu”可以进入荧光校正菜单。当LCF安装以后，选择这个条目以进入下面的子菜单。 一、“光化学控制的校正” 该校正过程将会产生红光和蓝光的控制电压与对应的量子流量之间的关系，这种关系是光化学光大小控制的基础，并且应用于计算后面的%Blue(在g显示行中)。该过程一旦开始将分别产生红色LEDs和蓝色LEDs的控制参数(图27-37)。 当校正过程结束后，校正结果将被显示在屏幕上，用户可以查看利用校正结果而作出的图形(图27-38)。接下来仪器将提问用户是否应用该校正结果。 如果选择Y，这些校正数据将被保存在名为“/user/configs/fluor”的文件中，并且该校正结果将被激活并应用在以后实际的测量中。 二、光化学控制图形 该图形显示当前红光控制信号和蓝光控制信号与对应的叶室中量子流量的关系。典型光化学控制图形如图27-38中所显示。 若选择escape键，将结束光化学控制图形的查看，。若想查看图形的实际数据，则应选择V，而不是escape(图27-39)。 三、最合适的强闪光大小 该程序将用来确定测量过程中最合适强闪光的强度大小(图27-40)。程序将提示用户输入一系列的强闪光强度和每次强闪光后的恢复时间。当在叶室中夹入了具有代表性的、经过光适应的叶片后，用户可以运行该自动程序。在程序的最后，在屏幕上将显示Fmax和强闪强度大小之间的图形。在理想条件下，最合适的强闪光强度的大小指产生最大荧光测定值的最小的强闪光强度。 一旦该程序正在运行，屏幕的显示内容将与图27-41中的相似。 当仪器完成用户所要求的一系列强闪光大小后，程序将提示用户“Plot this(Y/N),”。如果选择Y，将在屏幕上显示如图27-42所示意图形，在该图形中Fmax是强闪光强度大小的函数。 四、最合适的测量光大小 该程序主要用来帮助用户确定测量Fo的最合适的测量光强度大小，也就是没有诱发光合作用的最大的光照强度。程序将提示用户输入一系列的测量光强度(图27-43)。 在每次输入测量光的大小后，也要输入测量光关闭时的恢复时间。在每个光照强度持续的时间内，程序将自动收集荧光数据F，然后确定dF/dt(标记为斜率)，在程序最后，程序将为用户提供一个作为测量光强度大小函数的斜率图。 一旦程序正在运行，屏幕的显示内容将包括测量光的强度大小(Meas)、平均荧光强度F和dF/dt(斜率)(图27-44)。在恢复时间内，Meas将显示为“Off”和恢复时间还剩余的时间多少。 在程序最后，屏幕上将显示作为测量光强度大小函数的dF/dt的图形(图27-45)。 五、“调整荧光信号的零点” 该过程将调整LCF荧光信号的零点。在该操作过程中，叶室没有必要为空(图27-46)。 六、“查看厂家的校正资料” 每个LCF都有一个专门的校正资料。该资料显示了叶室中的光探头信号和对对应量子流量之间的关系。实际上，校正资料中包含两个校正因素，其一针对“红色LEDs”，其二针对针对“蓝色LEDs”。两者在工厂中都被测量过并且将测量资料保存在了LCF的内存中，目的是为了保证LCFs和操作平台之间数据的自由交换，而不用寻找校正过程中途径。该校正资料和LCF保存在一起。 “查看厂家校正”的程序将允许用户查看厂家的校正值，甚至去改变这些值，但实际上厂家并不推荐用户改变这些校正值(图27-49)。 七、“查看强闪光文件” 该程序允许用户对仪器中已经存在的强闪光文件进行重新作图，该过程主要通过一个循环完成，并且可以让用户在新测量模式或P27-58中描写的最合适闪光大小的程序中提取已经保存过的文件。在P27-22中有关于“View Flash and Dark Pulse Details”的详细介绍。 第 七 部 分LCF的常见问题 一、“LCF控制组”程序 在LCF中，解决常见问题的程序在“LCF控制组程序中。该程序位于欢迎菜单下的“诊断和检测菜单”下(图27-48)。 LCF控制组程序如图27-49中。LCF探测器得到的真实时间下荧光和PAR也被显示。在每个变量显示内容的最后是当前所有的最基本控制参数值。通过选择“??”可以对这些设定的值进行调整。已经被改变的区域被高度显示。通过“??”可以移动到不同的区域。 1、“原初荧光强度” 原初荧光强度是LCF的原始荧光读数，该值的大小在-5000-+5000之间。原初荧光强度的mv信号的通道20。 2、“Offset” Offset值可以用来调整荧光信号，通常为-2900左右，该值通过原初荧光信号减去最后的荧光信号而得到。 3、“最后的荧光信号” 最后的荧光信号代表新测量模式下的荧光强度，该值是最基本的荧光信号，其大小通常为0-8000之间。 4、“ParIn_ mv” “ParIn_ mv”指LCF量子探头的mv信号。其输入通道为23，变化范围为0~5000mv(这是红光和蓝光校正常数<0的原因，见下面的“ParIn_μm”) 5、“ParIn_μm” ParIn_μm指LCF量子探头测量的PAR。用来将“ParIn_ mv”转化成“ParIn_μm”的校正因子保存在LCF感应器的头部。为了看到这些值，可以选择Press V，进入“_View Factory Cal”中(P27-61中有详细描述)。 6、“LCF:ON/OFF” “LCF:ON/OFF”用来控制LCF的开/关，同时也可以控制LCF风扇的开/关。如果用户想交换一个LCF，可以用这个控制程序，在不连接之前关闭LCF，在重新连接之后，用这个控制程序重新打开LCF。 7、“Mod:ON/OFF” “Mod:ON/OFF”用来控制测量光的调制开关。当处于Off时，测量光束的强度大小>0，两个蓝色测量LEDs将比调制开关处于On状态时表现的更亮。 8、“PdGn:1或5” PdGn:1或5指“ParIn_ mv”测量中光电二极管的扩大值。正常情况下，将该参数设定为5。在闪光过程中。Open程序自动将其设定为1，目的是为了减少信号的波动。如果用户不断的启动该程序，“ParIn_ mv”和“ParIn_μm”将大约以因子5的幅度变化。 9、“Meas:0-10” “Meas:0-10”用来控制测量光束的强度。该值越高，两个测量LEDs越亮。如 果只测量一个样品，“Flr Raw”和“Final F”的值将和该值的大小成正比。 10、“Blue:0-10” “Blue:0-10”指蓝色光化学LEDs的强度大小。当为10时(并且红色=10)， -2-1ParIn_μm的大小在100μmol ms左右。 11、“Red:0-10” “Red:0-10”指红色光化学LEDs的强度大小。当为4时，ParIn_μm的大小将 -2-1大于2000μmol ms左右。用户可以将该值一直升高到10，但不要在10下保持几秒钟，这不是一个检验最大输出的最好方法，因为随着LEDs的升温，输出将会稳步下降。如果红色LEDs在10下放置的时间太长，将会减少其使用寿命。 12、“FarRed:0-10” “FarRed:0-10”指远红光LEDs的光照强度大小。虽然它的强度很小，但用户 -2-1仍然可以看到。在完全输出条件下(10)时，典型的最大光照强度<10μmol ms。 13、“Freq:0.25、1、10、20KHZ”用来选择测量光束的调制频率。 14、“Filter:0.5、1、5、10、20、50、100、200HZ”用来选择原初荧光信号的平均带宽。该值越高，变化的反应越快，但伴随升温的误差。 15、“Gain:10、20、50、100”指原初荧光信号的增益倍数。一般情况下选择10。在20条件下，原初荧光信号将增加为10下的2倍，但同时误差大小也提高2倍。 二、LCF基本功能检测 如上面所描述，LCF控制组可以用来作简单的功能检测。 1、LCF ON/OFF:使LCF开和关。当关时，风扇应该停止转动;当开时，风扇 应该开始工作。 2、Mod ON/OFF:当LCF On，Mod On同时Meas为3.0时，绿色的MSR状态 指示灯应该闪光。将Mod开和关，观察LCF的两个红色测量LEDs。当Mod 关闭时，两个LEDs应更亮;当Mod开放时，两个LEDs应更暗，而绿色的 MSR状态指示灯也应该保持打开状态。 3、 Freq的设置 当Mod On时，不断的改变Freq的参数设置。用户应该看到当两种LEDs改 变时的亮度。Freq的频率越高，LEDs越亮。 4、 调整荧光信号的零点 打开Mod，并且将Meas设置为0。“最后荧光”应该为0(?4)。如果需要， 用户可以通过选择Z来进行实验。 5、 检查荧光反应 将LCF参数设置为“Meas ON3、Mod ON，Filter 0.5、Gain 10”。将LCF工 具包中粉红色的荧光标准测量片放入叶室。荧光读数应该为300或400，最 大的荧光波动大约为2或3。如果仪器未校准或荧光标准测量片没有反应， 则说明该荧光仪工作不正常。 6、 检查数字的Filtering 将Filter改变为200(利用向下的箭头从0.5改变为200)。因为因子10的原 因，最大的误差将增加。将Filter重新改变为0.5。 7、 检查蓝光 将蓝光从0增加为2。检查LEDs中的三个蓝色光化学是否打开，接下来将其 -2-1ParIn_μm应该大约为150或200μmol ms，最后再改变为0。 增加到10。 8、 检查红光 将红光改变为1，观察红光是否已经打开(要么所有的都打开，要么所有的 都关闭)。关闭红色光源(警告:没有什么障碍阻止用户将红光一直增加到 10，但如果直接观察，将对眼睛有伤害。将红光设置在高的光照水平奖缩短 起寿命。 9、 远红光检查 将远红光打开增加到10。观察远红光是否以已经发光，然后关闭。 第八部分 LCF参考资料 一、LCF配置文件的详细内容 LCF配置文件的详细内容包括: , 光源为6400-40LCF:当光源为6400-40LCF时(与sun+sky或LI6400-02B 红蓝光源相对应)，为了控制荧光叶室，在新测量模式下将增加三个新水 平的功能键。在P27-27中的“功能键概述中“有详细介绍，而且在校正 菜单中的“光源校正菜单”中将出现一个专门用于校正6400-40LCF的 子菜单。在P27-24中“显示内容”中有具体内容。 , 计算菜单为默认的FLR.LPL:这个计算菜单增加了一系列关于荧光的计 算。参见P27-28中“保存参数的内容”。 , 显示内容为标准Flr显示:该显示在标准的显示内容中增加了一系列的 显示行，而显示内容是用户自定义的“默认FLR.LPL”和OPEN4.0定义 的荧光系统变量(在P14-1中有关于OPEN系统变量的内容，而在P15-1 中有用户自定义变量的内容)。 , 保存形式为标准Flr格式:在保存数据时，用户需定义要记录的条目。 参见P27-28中的“保存考虑”。 , BLCond为“Sys/Lib/BLCTable_LCF”:LCF的界面层导度要略高于标准 叶室。该信息保存在“Sys/Lib/BLCTable_LCF”中。在P27-73中有了关 于“LCF界面层导度”的详细介绍。 , 面积=2.0:如果叶片没有覆盖荧光叶室的圆形垫圈，则需要用户在新测 量模式下的level3，f1中输入正确的叶面积。 , Flr Program为标准荧光设置 包括荧光测量的最初的荧光测定仪设置、饱和闪光和暗脉冲。从User/Configs/FlrProgram中可以保存和修改每组的荧光参数设置(见P27-31中的改变控制参数)。文件Std Flr Settings是仪器默认的，当然用户也可以进行自定义。 二、程序命令 表23-20中列出的命令均可以在LPL程序中应用，目的是为了完成与荧光相关的工作。控制命令在P25-18中的“荧光叶室控制”和P25-18中的“LCF控制参数”中有详细介绍。 表27-20 荧光命令 命 令 含 义 对应的功能键 FMeas_On 打开测量光束 f1 level 9 FMeas_Off 关闭测量光束 Do Flash 进行饱和闪光 f2 level9 Do Dark 进行暗脉冲 f3 level9 进行饱和闪光，设置Fm，并 F2 level 0(当光化学关闭时) Do Fm 计算用户变量，然后保存 Do Fm? 进行饱和闪光，设置Fm?，并保存 F0 level0(当光化学光打开时) Do Fo Fm 设置Fo，接着“Do Fm?” f3 level0(当光化学光关闭时) 设置Fs，进行饱和闪光，设置Fm?，计f3 level0(当光化学光打开时) Do Fs Fm? 算用户变量，然后保存 进行暗脉冲，设置Fo?，计算用户变量，F1 level0(当光化学光打开时) Do Fo? 然后保存 设置Fs，进行饱和闪光，设置Fm?，接F4 level0(当光化学光打开时) Do FsFmFo? 着暗脉冲，设置Fo?，计算并保存 Set Zero 利用当前的荧光信号作为以后的Offset none Set Fs 将Fs设置为当前的F F2 level 0(当光化学关闭时) Set Fo 将Fo设置为当前的F F0 level0(当光化学光打开时) 将Fm设置为最近强闪光过程中的最大 Set Fm 荧光值 将Fm设置为最近饱和闪光中的最大荧它们没有相对应的功能键，但可Set Fm_Prime 光值 作为部分常规功能键中完成 Set Fo_Prime 将Fo设置为最近暗脉冲的最小荧光值 打开光化学光，利用当前的模式和目标 Actinic_On 值 f4 level9 Actinic_Off 关闭光化学光 打开远红光并将其设定为当前的目标 FarRed_On 值(远红光的目标值) f5 level0 FarRed_Off 关闭远红光的光源 Flr 打开荧光记录(利用当前的荧光记录的None RecordingOn 文件名，并将记录添加到该文件中) Flr 关闭当前的荧光记录文件 RecordingOff 提示用户选择新的文件名保存荧光记 FlrRecoringAsk 录，如果新的文件名已经，将新的记录F5 level8 增加到该文件中 二、荧光计算程序 默认的荧光计算菜单被命名为“Std Flr Comp”，如下面的 将两个计算程序联系起来非常必要(该功能在OPEN4.0新增加)。第一个计算程 序“Default”在图15-9中，而第二个“Flr Only”程序中增加的荧光变量则列在下面。 三、叶片的吸收系数 在标准荧光计算程序中，叶片吸收系数是蓝色光源所占比例的函数，因此必须定义两个用户常数(Red Abs和Blue Abs)，并通过方程27-15计算LeafAbs变量， 其中α为有效的叶片吸收系数;αblue和αred分别是蓝光和红光的吸收系数。表27-21中列出了一些吸收系数的实例(表27-21)，可以看出蓝光趋向于比红光的高。通过LED的S(λ)和α(λ)的积分除以S(λ)的积分而得到。 叶片吸收变量主要用来计算ETR(方程27-11)和ΦCO。 2 四、LCF界面层导度 LCF界面层导度保存在文件“Sys/Lib/BlcTable_LCF”，具体内容在下面: P.14-18的图14-3是关于BLC表格形式的解释。 五、同时测量气体交换和荧光 “同时测量气体交换和荧光”提出了一个问题:当荧光事件发生时(饱和闪光或暗脉冲)，气体交换的测量发生了什么,显然，闪光或几秒钟的黑暗并不能使稳定的光合作用不受影响，那么这些可能的相互作用如何被仪器所接纳呢,基本的荧光测量来自LCF中原始的、真实时间的mv信号，在显示屏幕中的m行可以看到该信号被标记为变量F，同时还被气体分析仪和其它信号所测量，目的是为了测量气体交换。在荧光测量的过程中，所有气体交换的测量停止。在荧光测量事件的最后，进行最后的计算。如果保存文件被激活，所有的气体交换和荧光计算数据将被记录到目的存储文件中。 , 实例:Do Fs Fm?(level0，f3) 这个按键(或在AutoProgram中的相关命令)用来得到稳定的荧光值、稳定的气体交换参数，进行饱和闪光并且在保存的文件中添加一个记录数据。这个事件是如何发生的, 1、添加Fs:将系统变量Fs(O显示行)添加为当前的F值。 2、 正常的荧光事件停止 “正常的荧光事件停止”指每一秒钟更新新的原始读数和系统变量每2秒计 算用户变量。 除了原始荧光和“Par_μm”的值。直到Do Fs Fm?结束时，所有的原始读数 才会被更新。 3、 饱和闪光 系统变量Fm?(O显示行)将变为强闪光过程中的最大荧光值。 4、 计算和保持 如果保存文件打开(不是P27-29的荧光记录，而是正常的数据保存文件)， 在数据保存到文件中之前，将进行用户设定的计算。这个过程将更新所有与 荧光相关的变量，例如PhiPS2，计算清单中的每个条目都将被计算，包括与 气体交换相关的值，但是气体交换并没有变化，因为从步骤2开始最新的气 体交换就没有发生变化。 5、正常测量事件的更新 仪器正常的读数和计算将被更新。 图27-50显示了荧光事件中所记录的样本数据。在该例子中，第一个观察通 过暗适应叶片，接着Do Fo Fm，目的是为了得到最小荧光。然后做一个强闪 光，得到最大的荧光数据Fm。注意所有这些行为的每一步在保存问件中都有 一个标记，目的是表明所发生的事件。气体交换数据(如光合速率-0.73)反 映了该事件的发生比荧光事件的发生早。