淋球菌的青霉素耐药性

淋球菌的青霉素耐药性 淋球菌的青霉素耐药性 6 搿枷耐角雹孳馑 J1)emaatolaf'andV?h.2000.Vel22.ho :3]陈忠年,杜心符妇产科病理学.上册.上海:上海科学技术 :b咂牡,】984,28 4]』汉睡学院病理教研宰,rf—fh医学院病理学教研组外科府理 学.F册武汉:湖北凡民出皈社,1983.11341136 f6, 淋球菌的青霉素耐药性7 邓艳(贵阳医学院附属医院皮肤科.贵州贵阳55?04_' '——, [5]林挺.范晓琼,陈玉云38例脂谥性角化病的临床与病理分 析临床皮肤科杂志1998.27(4):238 (收稿日期:】998一II一20- 7 文章编号:1002—131B【01—0016—03中图分类号:R378.16R978.1I文献标识码:A 奈瑟氏琳球菌是淋病及其相关疾病如尿道炎,子宫颈 炎输卵管炎等的病1泉菌….由于淋病能造成永久性不育和 宫外孕等严重后果,所以该病是威胁公众健康的重要疾病之 一 :1944年采用青霉素治疗后,其发病率曾一度下降.但 60年代后.该病在西疗国家又迅速增多.其主要的一个原因 即耐药菌株,特别是PPNG(p删ci11ir?吕e—pr0dLIcingNeisse6a goncJ~)的不断出现.近来的研究明.已有5o%的分 离株带有青霉素耐药质粒.目前已知,除了质粒介导的淋球 菌产B一内酰胺酶的耐药性以外,还有因染色体突变所致的 低水平的青霉素耐药栋13柚J.本文仅就琳球菌耐药菌株的检 测,耐药株形成机理及治疗,预防研究综述如下: 1PPNG菌株的方法 11传统及我国现在多采用临床标本分离,培养病原菌后 再作检测 1.1.1药敏法以倍比稀释法制备不同药物浓度的液体或琼 脂培养基.然后接种定量的淋球菌,定量测定抗菌药物(即 青霉素)对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC).该法可定量测定 药物的M]C.指标客观,明显,可以很好反映该药物的浓度 趋势.便于不同时间和地区的比较.多用于流行病学调 查?一 1.12碘量法用PH6.0的磷酸缓冲液配制6o0otc/~a的青 霉素液,将淋球菌在其中制成浓厚菌悬液,37?水浴后加人 I%口J溶性淀粉0.05和0.3%碘液002.I.1.观察颜色变化, lI)分钟黄色完全消退的菌株为PPNG菌株,不消退者为非 PPNG菌林周莹等(1993)用碘量法检查的l0株PI:~G菌株 和砷株非PPNG菌株用头抱硝噻吩进一步检测,其结果完全 一 致...且该方法相对比较便宜,被WHO推荐为检测PPNG 的法 II3产'色头孢菌素洼将一滴头孢硝噻吩溶液滴于灭菌滤 纸将3—5个淋球菌菌落接种其上.观察纸片的颜色变 化.30秒内由黄变红者为阳性.变色为阴性.该法简单, 方便,是国外目前较为普遍采用的方法J.但头孢硝噻吩价 格昂贵,在我国普遍推广还较困难. 12舯年代以后,国外学者使用多种非培养技术,可直接 Il凡泌尿生殖道快速检测出PPN'G菌株: I21荧光斑点试验()以氨苄青霉素作为基质制备荧 光终端产物用来检测标本中p一内酰胺酶的活性.Taylo~等 (1985)在泰国用Fs'r快速检测出患淋病的男性尿道渗出渡中 的PP'~G:作者共检查了确认为淋球菌性尿道炎的猫倒男 性.其中101侧分离到PPNG.此101例中有92例Fs'r阳性 (阳性率91%).与产色头孢菌素试验结果一致.作者认为用 糟r检测PPNG是一种快速,省钱的敏感方法'. I22DNA杂交法ne等(1985)用DNA杂交法检查男 性尿道炎病人体内分出的淋球菌非洲及亚洲菌株.作者将淋 球菌26MDa隐蔽性质粒及大肠杆菌4.4MDa日一内酰胺酶质 粒用P标记,分别作为直接检测男性患者尿道渗出液中淋 球菌的I)NA探针及一内酰胺酶质粒的探针.并与培养法及 产色头孢菌素试验作比较.结果,隐蔽质粒DNA探针的敏感 性和特异性分别为99%和93%,而一内酰胺酶探针分别为 91%和96%[. 1.23化学发光核酸法San&ez—Pescador等(1989)舟绍 两种快速化学发光核酸法(TEM—T法及TEM—INH法)可 在4h内检出耐青霉素的淋球菌,尤其是后法适用于大量标 本检测.作者将化学发光'IEM—INH法磷标记斑点吸印法 及比色的B一内酰胺酶活性测定的敏感法进行比较.试验结 果表明,化学发光法较斑点吸印法敏感5倍+较kwik—Lac 法敏感100倍.故作者认为化学发光TEM—INI-I法为检测耐 药淋球菌的最理想方法... 1.2.4PADAC试验Herve等(1989)利用基质PADAC(吡 啶—-2—偶氯化合物一P一二甲胺头孢菌素)苣接从男性尿道 渗出渡中检测PPNG.作者共检查丁68份标本5I1性者38 份,阴性者30份,所得结果与培养分离的菌原一致.PADAC 试验敏感性为100%,特异性为96%: 2PPNG形成的机理 淋球菌质粒按其分子量大小一般分为三种:(1) 24.5MI)(39.21&)质粒,又称接合质粒或传递质粒(2) 45MD(7.21&)或4.4—4.7MD(71—7.51&)和32—34MD (5.1,54kb)质粒,又称耐药(PC)质粒,能编码TEbl一1 型p一内酰胺酶基因相关的R因子而形成对青霉素的耐药性. (3)2.6MD(4.21&)质粒,又称隐蔽性质粒,存在于印一 口一 竹%,综一 0 皮呋病与性病2OOO年第22卷第1期l7 100%的淋球菌分离株中其功能尚不完全清楚. 淋球菌Pc质粒的转移可通过接合的方法将其耐药性基 因在菌株问传递但淋球菌Pc质粒并非传递性质粒,其传 递则需要传递因子的借助才能实现.研究证明,淋球菌的 245ND原生性质粒具有性因子的活性,能动员PC"质粒高效 地在淋菌间传递完成接台传递过程.适宜条件下,约10% 含24.5ND原生质粒的细菌可作为接合作用的供体菌.在 245T',tI)原生质粒的动员下,淋球菌PC"质粒的接合过程受到 F因素的影响:(1)PG的浓度.当选择培养基内的青霉素 浓度>0.t2r,e,/mi时,Pc质粒接合效率明显下降.(2)亲代 cell的浓度.若受供菌浓度(3OOxIC..FV)不变,约有10% 的供体菌转移Pcr质粒至受体菌,对于相当低浓度的供体菌, 其每个供体菌转移Pc质粒的效率亦应降低.(3)亲代cell 生长期.淋球菌eel1的过夜培养或非振荡培养,其Pc质粒 转移的效率可下降100倍或更大.(4)细胞外膜结构的影响. 凡供体菌或受体菌中有一方为不透明菌落表型,即外膜含热 变蛋白质(蛋白II)者,其Pc质粒转移效率将降低5—10 倍.若供体菌与受体菌均为不透明菌落时,则Pc质粒转移 效率降低会更多ll. 淋球菌PC"质粒的转移除通过接合的方式将其耐药性基 因在荫株间传递外,也可通过转化.但前者传递Pc质粒的 机率较后者更大|_=关于淋球荫Pc质粒以转化方式转移青 霉素耐药基因已有不少研究报道?'JSjo一般认为淋球菌 P(:质粒DNA转化效率是非常低的,大约要比染色体DNA的 转化低lOtlO倍.tawen等(1977)将青霉索敏感的不产B一内 酰胺酶,但对壮观霉索和利福平有一定耐药性的淋球菌作为 受体菌与作为供体荫的带Pc质粒的淋球菌.在滤膜上通过 菌体cell相互接触,可使受体荫变成青霉索耐药株l.亦有 人研究发现,对青霉索敏感的淋球菌在一定的条件下,通过 吸取外源性DNA,而自身转变为青霉素耐药株一即自身转 化 对淋球菌获得性质粒的来源及编码产生B一内酰胺酶的 研究认为,Pc质粒与2.61VID隐蔽性质粒或24.5/~H)接合质粒 无明显同源性.但两种Pc质粒在分子特征上有许多相似之 处.它们均带有4o%的转座氪苄青霉索耐药性序列Tn2,此 转座子带有编码T?_B_I内酰胺酶的结构基因;蜊^一DNA 多核苷酸序列研究表明,它们之间DNA序列的同源性为 70%,并且这两种Pc质粒与产B一内酰胺酶的流感,副流感 和杜克雷嗜血扦菌Pc质粒密切相关.现已证明,软性下疳 病原体一杜克雷嗜血扦菌具有与淋球菌几乎同样的Pc质粒, 副流感嗜血杆菌分离株含淋球菌质粒同样大小的471VIDPC 质粒,这些嗜血杆菌Pc质粒可接合转人淋球菌,24.5帅的 共轭质粒能有效地启动淋球菌Pc质粒,不仅在淋球荫与嗜 血扦菌属之间能转移Pc质粒,而且亦能转人许多不同 属__2】_.已经发现这些质粒均可转人大肠扦菌.我们的实 验亦证宴了这一点.这就可解释为什么自1976年后PPNc 菌株持续不断增加和流行. 3染色体介导的膏霉素耐药性 淋球菌染色体分子量980MIla,可编码约5OOO个基因, 仅为大肠杆菌基因组的1/3J.现代在已确认并深人研究发 现琳球菌上有多个与P抗性有关的遗传位点,主要是p吼^, n灯和penB,它们引起对青霉素和其它抗生素的低水平耐 药.pe改变青霉素结台蛋白2(PBP2)降低其与青霉素 的亲和力.mtz和唧B可能通过改变外膜通道蛋白(蛋白 盯)和其它成分,从而产生对青霉素和其它抗生索的低水平 耐药.单独发生penA突变只会使对Pc的MIC升8倍如 同时发生mtz和penB突变,则各位点间会持叠加效应l4一. 流行病学调查显示,染色体介导的药物抗性在程度【:有 明显的地区差异.如自东亚分离的青霉素抗性菌株抗性常较 高(MIC/>O5ug/I.).一般认为,这与特定地区抗生素的滥用 程度正相关【. 4~G淋病的治疗和预防 对PPNc病人我们可选用目前对淋球菌敏感性较高的壮 观霉索(2g)或头孢三嗪(250mg)肌注,剂量一定要足够, 治疗要彻底J.对每一个病人最好都能先做药敏试验,选择 敏感药物治疗.对耐药菌株还可作质粒消除,消除其耐药质 粒,回复成青霉素敏感菌株再作治疗. 所有淋病病人症状消失后均要作培养,最好多做几次, 在耐药淋病泛发的当代更需如此.末次服药后至少隔7一l4 天后再作培养.还需注意的是耐药淋病患者的性伴侣均需作 流行病学调查和治疗以防进一步传播和发生并发症:应告 诫病人合理使用避孕套在很大程度上起保护作用,可舫止生 殖器感染的获得和传播. 当然,要降低PPNG流行的趋势,重点在于对高危人群 (5TD患者和无症状携带者)的控制.除了.诊断,治疗及追踪 调查外,还必须对他们进行必要的健康教育.: [参考文献] [I]M1RS():C-~axrhoea[?9】ntheseriesMajorpr0blfmin Dd0I一ABook(consttllinged)]L椰donSamlde~,l77 【2]BtitiganBEetNJNed,1985,312:1683 (3]swI蛐JdEd%Jal】y—tr~lsiueddiseaseMcgElsBook 0HnB?1984,187. 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