[精品]柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法

[精品]柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法 柠檬酸缓冲液煮沸抗原修复法 常见问答集 - 石蜡组织切片抗原热修复方法 1.适用范围:适合于中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果比高压修复法差。 2.仪器设备:电炉(600W)、烧杯(1000ml)等。 3.所需试剂:0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0?0.1. 4.操作步骤: (1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。 (2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液于烧杯中，放在电炉上加热直至沸腾;将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，继续煮20分钟;烧杯离开火源冷却至室温，才能从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3')。 (3)按迈新公司有关试剂盒的操作步骤执行。 5.注意事项: (1)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防pH值改变而导致掉片 。 (2)煮好后必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。 (3)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine (4)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。 柠檬酸缓冲液微波抗原修复法 常见问答集 - 石蜡组织切片抗原热修复方法 1.适用范围:适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果比高温高压修复差但比直接水煮好。 2.仪器设备:微波炉(700-800w)。 3.所需试剂:0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0?0.1 4.操作步骤: (1)常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。 (2)取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(缓冲液量不得<500ml)于微波盒中，微波加热直至沸腾;将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲 液中，中高档或中档继续微波处理15-20分钟;取出微波盒冷却至室温，从缓冲液 中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分 钟(2×3')。 (3)按迈新公司有关试剂盒的操作步骤执行。 5.注意事项: (1)微波时间长短的控制很重要，从组织切片放入沸腾的缓冲液到微波结束的总时间 控制在15-20分钟为好。 (2)必须使用耐高温塑料切片架，不能使用不锈钢或铜架。 (3)微波过程中，如果缓冲液蒸发而量减少，无法浸泡到组织片，应该适当加上一些蒸馏水，以保证组织片都能浸泡在缓冲液中，继续微波。 (4)微波结束后必须等缓冲液冷却后，才能把切片取出。 (5)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine (6)缓冲液的量(>500ml)，必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能 反复 使用。 石蜡组织切片抗原酶消化修复方法 胰蛋白酶(Trypsin)试剂盒使用方法 常见问答集 - 石蜡组织切片抗原酶消化修复方法 2.适用范围:适用于部分中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，胰酶消化可以 大大增强免疫组化染色结果。 3.产品形式:液体。本试剂盒含有2种试剂--胰酶浓缩剂(4x)与胰酶稀释剂，3ml/12ml包装。 4.使用方法: (1)切片脱蜡、水化;PBS冲洗3×3' (2)阻断内源性过氧化物酶活性(也可以在消化处理后进行阻断)。 (3)用PBS冲洗数次。 (4)于试管中加入一滴的胰酶浓缩剂和三滴的稀释剂(1:3)，混匀。 (5)在组织切片上滴加100μl(两滴)混匀的酶试剂。 (6)37?孵育15-20分钟。 (7)PBS洗涤3×3'。 (8)洗涤后按正常免疫组化染色步骤进行。 5.注意事项: (1)玻片必须经防脱片处理。 (2)胰酶试剂盒4-8?冰箱保存，避免冰冻。 胃蛋白酶(Pepsin)使用方法 常见问答集 - 石蜡组织切片抗原酶消化修复方法 2、适用范围:胃蛋白酶消化可大大增强福尔马林固定、石蜡包埋组织的免疫组化 染色效果。 3、产品形式:本产品为即用型，6ml包装。 4、使用方法: (1)切片脱蜡、水化。 (2)阻断内源性过氧化物酶活性(也可以在消化处理后进行)。 (3)用PBS冲洗3×3'。 (4)在组织切片上滴加1-2滴(50-100μl)的胃蛋白酶。 (5)37?孵育15-20分钟。 (6)PBS冲洗3×3'。 (7)洗涤后按正常免疫组化染色步骤进行。 5、注意事项: (1)玻片必须经防脱片处理。 (2)胃酶4-8?冰箱保存，避免冰冻。 液体DAB酶底物显色试剂盒使用方法 常见问答集 - 免疫组化显色方法 2.适用范围:本试剂盒适用于辣根过氧化酶(HRP)系统的免疫组化染色如PAP、ABC和SP等。 3.产品形式:液体。含: A: 缓冲液(20x) 3.0ml/15ml B: 底物H2O2(20x) 3.0ml/15ml C: DAB显色剂(20x) 3.0ml/15ml 4.使用方法:在小试管中加0.85ml蒸馏水，按顺序加A、B、C试剂各50μl(1-2滴)混匀，即成1ml的DAB显色液，若出现沉淀可过滤后使用。配制好的溶液避光存放, 30分钟内有效。染色结果为棕色。室温下染色时间约3-5分钟，可以在显微镜下根据颜色的发展掌握染色时间。 5.注意事项: (1)本试剂盒仅适合于研究用;使用过程中请勿将试剂沾到皮肤或衣物上。 (2)本试剂盒4-8?避光保存。 液体AEC酶底物试剂盒使用方法 常见问答集 - 免疫组化显色方法 2.适用范围:本试剂盒适用于辣根过氧化酶(HRP)系统的免疫组化染色如PAP、ABC和SP等。 3.产品形式:液体。含: A:缓冲液(20x) 3.0 ml B:底物H2O2 (20x) 3.0 ml C:AEC显色剂(20x) 3.0 ml 4.使用方法:在小试管中加0.85ml蒸馏水，按顺序加A、B、C试剂各50μl(1-2滴)混匀，即成1ml的AEC显色液，若出现沉淀可过滤后使用。配制好的溶液避光存放，30分钟内有效，染色结果为红色。室温下染色时间约8-20分钟，可以在显微镜下根据颜色的发展掌握染色时间。 5.注意事项: (1)本试剂盒仅适合于研究用;使用过程中请勿将试剂沾到皮肤或衣物上。 (2)本试剂盒4-8?避光保存。 BCIP/NBT显色液使用方法 常见问答集 - 免疫组化显色方法 2、适用范围:该试剂为即用型，用于碱性磷酸酶标记的显色。 3、产品形式:液体，即用型，6.0/15/60ml包装。 4、使用方法:使用时滴1-2滴于组织片上，室温下染色5-10分钟，结果染为蓝黑色。 5、注意事项:本试剂4-8?避光保存。