冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究

冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究 冷浸法提取丹参脂溶性部位工艺研究 作者: 林忠泽，刘东辉，关世侠【摘要】 【目的】探讨冷浸法提取丹参脂溶性部位的最佳工艺条件。【方法】采用高效液相色谱(HPLC)法为测定方法，以丹参酮?A提取量为指标，考察不同浓度乙醇和粉碎对丹参酮?A提取率的影响，并用正交试验法进一步优选提取条件。【结果】最佳提取工艺条件为采用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次(每次3 h)，在这种条件下，可获得较高的丹参酮?A提取率。【结论】此工艺条件简单、稳定，提取率高。 【关键词】 丹参/生产与制备;丹参/化学;丹参酮?A/;色谱法，高压液相;正交试验丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效[1]。现代医学认为，丹参具有扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，防止心肌缺血和心肌梗死，加快微循环血流，促进毛细血管网开放，抑制心肌收缩，减少能量消耗，扩张血管，降低胆固醇、血脂，抑制凝血，激活纤溶，稳定红细胞膜，提高缺氧耐受力，增加肝脏血流量，保护肝损伤细胞，抗肝纤维化，抑制中枢神经系统以及消炎抗菌等作用。其脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用。目前提取丹参脂溶性成分的方法主要有乙醇回流法和超临界CO2萃取法。丹参酮?A是丹参脂溶性主要成分之一，丹参酮?A对热敏感，在提取制备过程中容易被破坏，超临界CO2萃取法成本较高。冷浸提取法工艺简单，可室温下操作且成本低。本文对冷浸法提取丹参中的脂溶性部位工艺进行系统研究，旨在优选最佳提取工艺条件，现报道如下。 1仪器和试药 LC 10AT高效液相色谱仪(日本岛津);SPD 10A紫外检测器(日本岛津);N2017工作站;丹参酮?A对照品购自中国药品生物制品检定所(批号: 0766 201711);丹参购自山东药材市场，鉴定人为广州中医药大学中药学院关世侠副教授;甲醇为色谱纯，购自SIGMA公司;纯水以双蒸法自制。 2方法与结果 2 1对照品溶液的制备取丹参酮?A对照品约10 mg，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;精密量取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 2 2色谱条件色谱柱: Kromasil C18柱(250 mm×4 6 mm);流动相: 甲醇—水(体积比为75?25);流速: 1 mL/mim;检测波长: 270 nm。在此条件下测定丹参酮?A对照品及丹参提取物。 2 3曲线分别吸取对照溶液2 5、5 0、7 5、10 0、15 0、20 0 μL，注入液相色谱仪。以丹参酮?A进样量(X)对峰面积(Y)进行线性拟合，丹参酮?A回归方程为Y=4×106X，r=0 999 4。结果明: 丹参酮?A在0 039 2~0 313 6 μg范围内线性关系良好。 2 4溶剂乙醇浓度选择取8份丹参粉末(过3号筛)，每份约0 3 g，精密称定后将每2份分成1组，分别精密加入10 mL体积分数为65%、75%、85%、95%的乙 醇，冷浸5 h，滤过，收集续滤液，精密量取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5 μL注入液相色谱仪进行测定。计算药材提取物中丹参酮?A含量: p丹参酮?A=m丹参酮?A(g)/m药材(g)×100%。 表1结果显示，体积分数85%乙醇提取丹参酮?A含量比体积分数95%乙醇提取丹参酮?A含量低12 5%,故本实验选择体积分数95%乙醇作为提取溶剂。 2 5粉碎提取试验取同一批丹参药材，一份粉碎(过3号筛)，一份切碎，再分别称取3份，每份50 g，加8倍量体积分数95%乙醇冷浸过夜，滤过，精密吸取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5 μL注入液相色谱仪测定。结果见表2。两组间比较无显着性差异(P0 05)。所以从节省能源上考虑，丹参药材不必粉碎成粉末，只需切碎后进行投料。 2 6正交试验选用体积分数95%乙醇作溶剂，取丹参50 g，共9份，按正交条件进行试验，结果见表 3、表4表1溶剂乙醇浓度选择试验结果表2粉碎提取试验结果表3因素水平表 2 7方差分析将正交试验结果进行方差分析。表5结果显示，A(乙醇用量)、B(冷浸次数)、C(冷浸时间)影响冷浸提取效果的因素顺序为: BCA，B因素对提取有显着性影响，A因素和C因素对提取无显着性影响，考虑到节省能源和时间以有利于工业生产，因此确定提取工艺为A2B2C2，即用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h。 2 8工艺验证试验为考察上述优选提取工艺的稳定性，取丹参3份，每份50 g，按该工艺条件即药材用8倍量体积分数95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h，分别测定丹参酮?A提取量。结果见表6。按正交实验优先的最佳工艺进行验证试验，3次结果都处于较高水平，这说明该提取工艺是稳定可行的。表4正交水平表表5正交方差分析表6工艺验证试验结果。