天麻头风灵胶囊的质量标准研究的论文.doc

天麻头风灵胶囊的质量研究的论文.doc 天麻头风灵胶囊的质量标准研究的论文 【摘要】 目的 建立天麻头风灵胶囊的质量标准。方法 采用高效液 相色谱法测定天麻头风灵胶囊中天麻素的含量。选用kromasil c18 柱(250 mm×4.6 mm,id),以甲醇-0.05%磷酸水(2.5?97.5)为流动相,流 速1.0 ml/min,检测波长220 nm。采用薄层色谱法对天麻头风灵胶囊 进行定性鉴别。结果 天麻素在6.016,96.256 μg/ml范围内,浓度与 峰面积线性关系良好(r=0.999 9),加样回收率为100.02%,相对标准偏 差rsd为2.24%。薄层定性实验方法简便灵敏、专属性强,天麻头风 灵胶囊中4种被鉴别的成分均能显示特征斑点。结论 本方法操作简 便,结果可靠,重现性好,可用于天麻头风灵胶囊的质量控制。 【关键词】 天麻头风灵胶囊;质量标准;高效液相色谱法;薄层 色谱法 abstract:objective to establish a quality control for tianmatoufengling capsule. methods hplc method ination of gastrodine in tianmatoufengling capsule, a kromasil c18 column ethanol 0.05% calcium phosphace (2.5? 97.5) as the mobile phase, and its flol/min. the detection . tlc method atoufengling capsule. results under the used chromatographic condition, tianmatoufengling had fine linear responses (r=0.999 9) in the concentration range of 6.016,96.256 μg/ml, the average recovery ethod used in tlc-qualitative analysis ple and sensitive atoufengling capsule could be detected and all shoethod employed in this study atoufengling capsule. key atoufengling capsule;quality control;hplc;tlc 天麻头风灵胶囊由天麻、川芎、玄参、当归、地黄、槲寄生、野 菊花等10味中药组成,具有平肝潜阳、清眩止痛、补益肝肾、息风 止痉、镇静、镇痛和抗炎作用。illennium 32色谱管理系统。 sartorius bp211d型电子天平;瑞士camag ?型薄层色谱系统。天麻 素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110715- 200212);天麻头 风灵胶囊(自制,批号040613,040614, 040615)。甲醇(色谱纯),磷酸(分 析纯),重蒸馏水(自制)。 2 方法与结果 2.1 薄层色谱鉴别 2.1.1 天麻 取本品10片,研细,加水饱和的正丁醇50 ml,浸泡一夜,超声处 理30 min,滤过,滤液用水30 ml分3次振摇提取,合并水层,浓缩至5 ml。通过d-101大孔树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水15 ml洗脱, 弃去水液,再用10%乙醇40 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。取天麻素对照品,加甲醇制成每1 ml含 1 mg的溶液,作为对照品溶液。取天麻对照药材0.5 g,加甲醇5 ml,超 声处理30 min,滤过,滤液作为对照药材溶液。阴性制剂溶液的制备方法同供试品溶液的制备方法。 照薄层色谱法[2000年版《中国药典》(一部)附录?b][5]试验,分别吸取阴性制剂溶液、对照品溶液、对照药材溶液及供试品溶液各10 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以氯仿-甲醇-冰醋酸(12?4?0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸-乙醇溶液,在105 ?加热至斑点显色清晰,日光下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的棕褐色斑点。阴性制剂无此斑点。 2.1.2 当归、川芎 取本品25片,研细,加乙醚20 ml浸泡1 h,超声处理30 min,滤过,滤液挥干,残渣加氯仿1 ml使溶解,作为供试品溶液。取当归、川芎对照药材各0.5 g,同法制成对照药材溶液。阴性制剂(缺当归、川芎)溶液的制备方法同供试品溶液制备方法。 照薄层色谱法[2000年版《中国药典》(一部)附录?b] [5]试验,吸取缺当归、川芎的阴性制剂、供试品溶液20 μl、当归、川芎对照药材溶液各1 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯(9?1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。同缺当归川芎的阴性制剂无此斑点。 2.1.3 野菊花 取本品制剂10片,研细,加甲醇15 ml,超声处理30 min,取上清液,作为供试品溶液。取野菊花对照药材0.3 g,同法制成对照药材溶液。阴性制剂溶液的制备方法同供试品溶液的制备方法。 照薄层色谱法[2000年版《中国药典》(一部)附录?b][5]试验,吸取阴性制剂溶液、供试品溶液2 μl及对照药材溶液1 μl,分别点于同一硅胶g薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-氯仿-甲醇-水(15?15?6?4?1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性制剂无此斑点。 2.2 天麻素的含量测定 2.2.1 色谱条件和系统适应性试验 色谱柱:kromasil c18反相柱(250 mm×4.6 mm,id);流动相:甲醇-0.05%磷酸水(2.5?97.5);柱温:30 ?;流速:1 ml/min;测定波长:220 nm;进样量:20 μl。在上述色谱条件下测定,天麻素达到基线分离,理论塔板数按天麻素峰计算大于5 000。 2.2.2 对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液的制备 精密称取在80 ?减压干燥1 h的天麻素对照品适量,加甲醇制成每1 ml含25 μg的溶液,即得对照品溶液。取本品20片,研细,取粉 末0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇10 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。取缺天麻的阴性制剂,同供试品溶液的方法制备,即得阴性制剂溶液。 2.2.3 空白干扰试验 照上述色谱条件,取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μl,分别注入色谱仪。供试品色谱图中,在与对照品色谱图相应的位置上,有一相同的色谱峰,而阴性对照溶液在此保留时间无色谱峰出现,故对供试品溶液含量测定无干扰,见图1。 2.2.4 标准曲线及线性范围 取天麻素适量,精密称定,加50%甲醇制成300.8 μg/ml的标准贮备液,从中精密吸取0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 ml分别稀释至10 ml,摇匀,分别吸取20 μl对照品溶液注入液相色谱仪测定。经回归分析,得回归方程: a=38 236c-3 498.9,相关系数r=0.999 9,线性范围6.016,96.256 μg/ml。 2.2.5 进样精密度试验 取对照品溶液20 μl(24.064 μg/ml)注入液相色谱仪测定,连续6次,结果平均值a=914 106, rsd=0.09%。明精密度较好。 2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液(批号040613),每隔2 h精密吸取20 μl注入液相色谱仪,测定样品12 h的稳定性。结果表明,供试品溶液在12 h内稳定,结果rsd=0.63%,表明被测物稳定。 2.2.7 重复性试验 配制供试品溶液(批号040613)共5份,分别吸取20 μl溶液注入液相色谱仪测定,结果平均值为0.469 mg/g,rsd=0.84%,表明本法的重复性较好。 2.2.8 加样回收率试验 取批号040613天麻头风灵分散片,研碎的粉末约0.25 g,精密称定,共6份,分别精密加入300.8 μg/ml天麻素对照品溶液0.32、0.32、0.4、0.4、0.48、0.48 ml,混匀后,分别加入50%甲醇9.68、9.68、9.6、9.6、9.52、9.52 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷再称重,用50%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。分别吸取20 μl溶液注入液相色谱仪测定,结果见表1。表1 加样回收率试验结果(略) 2.2.9 样品含量测定 分别精密吸取供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪中进行测定,结果见表2。根据3批样品检验结果,标准中暂定为每片含天麻以天麻素(c13h18o7)计,不得少于0.20 mg。表2 样品含量测定结果(略) 3 讨论 3.1 检测波长的选择 经对天麻素对照品进行紫外扫描,发现天麻素在270 nm和220 nm处有较大吸收,其中220 nm为最大吸收波长。当检测波长为270 nm时,杂质干扰较小;当检测波长为220 nm时,杂质干扰较大。但综合各种因素考虑决定选用220 nm为检测波长。 3.2 流动相的选择 实验曾分别比较了不同比例的甲醇-水-磷酸流动相的色谱行为,考虑到色谱峰的对称性以及分析时间的合理性,选择甲醇-0.05%磷酸水(2.5?97.5)为流动相,样品分离较佳。 3.3 样品预处理方法的选择 实验考察了超声提取和加热回流提取两种提取方法,结果表明,超声提取效果更好;进一步对超声提取时间进行考察,发现超声处理30 min(工作频率40 khz,超声功率250 w),样品天麻素已基本溶出。实验还比较了不同提取溶剂(甲醇、50%甲醇、流动相和亚沸蒸馏水)和不同提取次数对结果的影响,结果表明水和50%甲醇提取效果相当,结合色谱行为,选用甲醇提取;且超声一次就能达到含量测定要求。 【