[word doc]熊果酸的镇静催眠作用研究

[word doc]熊果酸的镇静催眠作用研究 熊果酸的镇静催眠作用研究 安徽农业科学,JournalofAnhuiA.Sci.2010,38(25):13584—13585责任编辑章炼红责任校对况玲玲 熊果酸的镇静催眠作用研究 王莹,黄莉莉,李廷利(1.大理学院,云南大理67100o;2.黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040) 摘要采用足底电刺激法剥夺大鼠睡眠8h,腹腔注射熊果酸4h后将大鼠断头处死,取其大脑皮质,海马及下丘脑处脑组织匀浆制备上 清,测定大鼠脑组织匀浆中IL18,I’NF-Ot和NO的含量.结果明,睡眠剥夺大鼠给予熊果酸后,其各脑区内NO含量显着增加,IL-1p 和TNF0【的含量变化不明显.说明熊果酸的镇静催眠作用与NO对睡眠的调节有关,IL—lIS和TNF一0【作为NO的上游事件,可能参与了 熊果酸对睡眠的调节作用. 关键词睡眠剥夺:熊果酸;睡眠调节因子 中图分类号O629.61文献标识码A文章编号0I5l7—661l(2010)25—13584—02 ResearchonSedativeandHypnosisFunctionofUrsolicAcid ?rANGYjngetal(DaliUniversity,Dali,Yunnan671000) AbstractTheratwasdeprivedofsleepfor8hbyusingfootplateeleetricalstimu lationmethod,thenitwaskilledbydecapitationafter4h sinceintraperitonealinjectionofursolicacid;thebraintissuehomogenatesweretakenfromitscerebralcodex,hippocampusandhypothalamus forpreparingsupernatantsandthentheconten~ofIL一 aandNOinthemweredetermined.Theresultsindicatedtllatafterthe1b.TNF— sleep— deredratwasgivenwithursolicacid.theNOcontentswereincreasedsignificantlyandthecontentsofIL-1bandTNF—ahadnoobvious changeinvariousencephalieregions.ItwasdemonstratedthatthesedativeandhypnosisfunctionofursolicacidwasrelatedtOregulationfunc— tionofNOonsleep:asupstreamoccurrenceofN0,IL-1bandTNF.amightparticipateintheregulationfunctionofursolicacidonsleep. KeywordsSleepdeprivation;Ursolicacid;Sleepregulatoryfactor 熊果酸又名乌苏酸,乌索酸,属非极性五环三萜类化合 物,其植物资源分布广泛.据报道,熊果酸具有中枢镇静作 用…,可拮抗谷氨酸的神经毒性.给小鼠灌胃熊果酸50 mg/kg,可明显减少其自发活动,并延长阈上剂量苯巴比妥钠 诱导的小鼠睡眠时间.另有试验证明熊果酸可通过激活 转录因子NF.KB促进小鼠静息巨噬细胞TNF-a,iNOS基因 表达,从而促进巨噬细胞释放TNF—Or.和NO,而TNF-0【,NO 为重要的睡眠调节因子.笔者通过研究熊果酸对睡眠剥夺 大鼠脑内IL.113,TNF.和NO含量的影响,探讨了熊果酸的 镇静催眠作用机理. l与 1.1材料 1.1.1试验动物.Wister大鼠,雄性,体重(230?20)g,黑 龙江中医药大学实验动物中心提供,许可证号:黑动字第 POOl01006. 1.1.2药品与试剂.熊果酸(宝鸡仁寿药业有限公司,纯 度>98%,批号:RS—uA2006o810);一氧化氮试剂盒(南京建 成生物工程研究所,批号:20070601,20071001);碘[1251]肿 瘤坏死因子一d放射免疫分析药盒(北京普尔伟业生物科技 有限公司,批号:07l101);碘[1251]白细胞介素一1B放射免疫 分析药盒(北京普尔伟业生物科技有限公司,批号:071101); 戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司生产,批号:Lot. No.WS20060401). 1.1.3仪器.GC.1500型放射免疫计数器(北京顺杰欣 隆科技有限公司);日立KY2000半自动生化仪(天津开元医 疗设备有限公司);大鼠失眠刺激器(哈尔滨电工仪表研究 所);KDC-40低速离心机(科大创新股份有限公司中佳分 公司). 1.2方法将动物饲养在通风,避光,电磁屏蔽环境内,采 作者简介王莹(1981一),女,黑龙江哈尔滨人,助教,从事治疗失眠的 药物研究.通讯作者,博士,教授. 收稿日期2010~5-14 用自动定时光控系统对其生活环境实行每天12h的明暗光 照周期处理,环境温度(22?2)?,相对湿度45%,50%.取 20只试验动物随机分成空白对照组,模型组和模型+给药 组,每组10只.试验当日,足底电刺激法剥夺模型组和”模 型+给药”组大鼠睡眠,睡眠剥夺时间为8:00,l6:00,空白 对照组仍饲养在正常明暗交替环境中.大鼠采用腹腔注 给药方式,于下午16:00开始给药,熊果酸给药剂量44.8 mg/kg,3组大鼠给药体积均为10ml/kg,给药4h后将大鼠 断头处死,立即剥离脑组织,取大脑前额叶皮质,海马,下丘 脑,分离的脑组织用分析天平精确称量,按质量比1:9加冰的 生理盐水,用玻璃匀浆器手工匀浆后3000r/min离心l5 min,取上清,用Griess法测定NO的的含量,放免法测定大鼠 脑组织匀浆中IL_1B和TNF.0l含量. 1.3数据处理试验数据采用SPSS13.0FORWIND0WS 软件进行处理,分别进行单因素方差分析(one-wayANO- VA),并用LSD或DunnettT3法进行两两比较. 2结果与分析 试验结果表明,模型组与空白组相比,大鼠大脑皮质,海 马和下丘脑NO水平均有升高趋势,但变化不明显.熊果酸 组与空白组和模型组相比,大鼠各脑区内NO含量明显增加 (P<0.05).模型组与空白组相比,大鼠各脑区IL.1B和 TNF.的含量变化不明显.熊果酸组与空白组和模型组相 比大鼠各脑区中IL.1B和TNF—的含量变化不明显(表1). 3讨论 IL一1B和TNF-仪是研究较为透彻的睡眠调节因子,向脑 室内注入IL-IB或TNF-a可增加NREM睡眠,抑制其中之一 可抑制自发睡眠和睡眠剥夺后的睡眠反弹.睡眠剥夺后脑 内IL-18和TNF-OL水平升高可诱导下游事件如NO,GHRH, NGF和NF-KB等水平的变化.据报道,NO在细胞因子调 节生理性睡眠过程中起到桥梁作用,NO至少部分介导了 TNF-0【对NREM的正调节作用,睡眠剥夺可引起机体对 NO需要的增加,而增加的NO作为信使分子,可引起一系列 38卷25期王莹等熊果酸的镇静催眠作用研究13585 的连锁反应,导致促进睡眠因子的产生和积累,这些因子积累到一定程度后可引起睡眠?. 表1睡眠剥夺大鼠腹腔注射熊果酸4h后各脑区内NO,IL?111和TNF-含量的变化 Table1ThelevelsofNO,ILd11andTNF-duringthefirst4hafterursolicacidin jectiom 注:表示与空白组差异显着;#表示与模型组差异显着. Note:indicatessignificantdifferencefromtheblankgroup;#indicatessignifi cantdifferencefrommodelgroup. 该试验结果显示,足底电刺激法剥夺大鼠睡眠后,大鼠各一步研究. 脑区的NO,IL-113和TNF-Ot水平并无显着变化,因为此方法参考文献 只剥夺了大鼠的快动眼睡眠时相,而短暂的小睡可部分抵抗 这种刺激对大鼠机体的影响.给予熊果酸后,大鼠脑内的 NO含量明显增加,而IL一1B和TNF-0【水平略有升高的趋势 但变化并不明显,推测熊果酸镇静催眠的作用可能与NO调 节睡眠的作用直接相关.NO水平的上升可能与睡眠调节因 子IL一1B和TNF-有关,但三者水平的变化并不同步,试验证 明TNF一0【可促使nNOS磷酸化,从而抑制nNOS的活性,而 这种抑制又可通过负反馈作用促进nNOS基因的表达,使NO 含量增加.正因为存在这种负反馈调节机制,IL一1B和TNF. 作为NO的上游事件,两者水平升高可能出现在NO之前, 有关IL一1B和TNF.仅与熊果酸镇静催眠作用的相关性有待进 [1]韩喻美.中药对兴奋性递质谷氨酸的影响[J].江西医学院,1996,36 (1):13一l5. [2]cHATr0PADHYAYD,ARUNACHAIAMG,MANDALSC,eta1.CNSa C— tivityofthemethanolextractofMallot~peltatus(Geist)MuellArg.1eg:an ethnomedicineofOnge[J].JournalofEthnopharmacology,2O03,85:99— 105. [3]颜玲,陈会敏.熊果酸的免疫学活性[J].湖北民族学院,2O05,22 (1):1. [4]王春艳,赵忠新.细胞因子与睡眠/剥夺的研究进展[J].脑与神经疾病 杂志,2OO5,12(2):154—157. 15】CHENLC,PINGTAISHI,M伽JA,eta1.Theroleofnitricoxidesyn— thasesinthesleepresponsestotumornecrosisfactor-or[J1.Brain,Behav. ior,andImmunity,2O04,18(4):390—398. [6]隋月林,李吉勇,胡庆,等.一氧化氮与睡眠剥夺关系的研究进展[J].医 学综述,2OO6,12(18):1136—1137. (上接第13583页) 24487296120 发酵时间Fementationtime?h 图7发酵时间对产酶的影响 Fig.7EffectoftimeonGODproduction MgSO0.7s/L,碳酸钙3.5g/L,发酵初始pH值6,温度28 ?,经过72h发酵,产生葡萄糖氧化酶的活性可达1.31 ixmol/L,较未优化有明显提高. 参考文献 [1]张树政酶制剂工业[M].北京:科学出版社,1998:671-692. [2]王树庆,刘秀华.葡萄糖氧化酶及其在食品工业上的应用[J].食品 初始pfl值Ini.t1.atpHvaIu~ 图8发酵初始pH值对产酶的影响 Fig.8EffectofpHonGODproduction 科技,2001(3):30-31. [3]刘志皋.食品添加剂基础[M].北京:中国轻工业出版社,1999:22. [4]吴时敏.葡萄糖氧化酶菌株筛选及其产酶条件研究[J].荆门大学学 报,1994(1):41—45. [5]SEMASHKOTV,MIKHAILOVARV,LOBANOLAG.Growth.charact[ 标签:快照]