蛋白酶体抑制剂MG

蛋白酶体抑制剂MG 经典 博硕论文 硕 士 论 文论文审阅认定 书……………………………………………………………………,,论文声明……………………………………………………………………………,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文??，心缩略词表?,缩略词肿瘤坏死因子相关凋亡配;(,,,氨基端激酶泛素(蛋白酶体通路蛋白酶,半胱氨酰天冬氨酸特异性,,(,(,抑制蛋白核转录因子(,,,磷酸盐缓冲液流式细胞术二甲基亚砜四甲基噻唑蓝中文全称,,,抑制蛋白英文全称体蛋依赖性激酶家族硼替佐米徐 白激酶活性的周期蛋白,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 州医学院硕士学位论文,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,？,,,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,(,,,,,,,,,,,,,,,,,—,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,;, ,,,,,,,,、,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,，,,(,,,,,,,,,,;(,,,,,,,,,,,;,,,,,;,;,,,—,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文间两两比较也有统计学意义僻,(,,)。,细胞凋亡,,诱导,,蛋白酶体抑制剂,,,,及其机制研究中文摘要,,,、,组电泳条带灰度值逐渐降低，与对照,组相比差异均具有统计学意义，组,,,核蛋白在各组,,,,,细胞中均有表达，实验,、,、结论,(蛋白酶体抑制剂能够抑制,,,,,细胞增长，诱导,,,,,细胞凋亡。,(可以活化,,,,,细胞中,,,,,,,,的活性。,(可以下调,,,,,细胞中,,(,,,的,组明显增加(,,,(,,)，但是,,，(,,,,,,与,,,(,,,,,,组相比差异没有统计学意细胞凋亡率为(,,(,,?,(,,),。,(实验,、,、,、,组,,,,,,,,的活性较对照亡率与,,(,,,呈浓度依赖性，,,,,,,,,,,,(,,,作用于,,,,,细胞,,小时以后,。,(实验,、,、,、,组细胞凋亡率较对照,组明显增加(户,,(,,)，细胞凋,,,,,,,,,,(,,,作用于,,,,,细胞,,小时以后细胞增值抑制率为(,,(,,?,(,,)较对照,组明显增加(,,,(,,)，随着,,(,,,浓度的增加，其抑制率逐渐升高，结果,(实验,、,、,、,组均可明显抑制,,,,,细胞增殖，其增值抑制率,,,核蛋白的表达。亡率，比色法测定细胞中,,,,,,,,的活性，采用,,,,,,,,,,,,法检测细胞,,(,(,唑蓝(,,,)法检测细胞活力，应用,,,,,,,—,和,，双染细胞流式法检测细胞凋,、,(,、,、,,和,,,,,,,,,，在相同的时间点(,,,)收集细胞，通过四甲基偶氮为,(对照组)、,、,、,和,,组，其细胞培养液中,,,,,,的药物终浓度分别为分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂,,(,,,处理,,,,,细胞，实验分亡作用，并且从,,,,,,,,及,,,,,,,,,方面探讨其在致凋亡中的作用。目的观察蛋白酶体抑制剂,,(,,,对淋巴细胞白血病细胞株,,,,,的致凋义(,,,(,,)。,(, ,,,,表达。, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文关键词蛋白酶体抑制剂,,,,,,徐?州医学, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,,，(,,,,,,(,铷(,,)(,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,;,,,,,,,,,(,,,,,,((,,(,,,:,(,,),,,,(,,(,,士,(, ,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,一,,,，,,,,,,)，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,;,;,,;,,,,,,,,,,(,、,,一,,,,,,(,,)(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,一,,,,,,,(,,,(,,,,,,(,、,、,,、,,肛,,,,)(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,、,(,、,、,,、,,“,,,,,)(,,,,,,,,徐州医学院硕士学位论文,,,,,;,,,)(,,,,,)，,,,,,,,,,(,, ，,,,,,,,(,,,(, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,;,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,(,;,,,,,,,,,,;,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,),,,,,,;,,,,,,，,,,,,,,,,(;,,,;,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,;,,,，,,,,,,,,,，,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,(,(,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,?—,,,,,,,??,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,? ,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,，,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，?,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文前言严重并发症(如移植物抗宿主病,,,,)的发生率也很耐圳，这些均限制了干细胞胞内蛋白质的降解大部分是通过泛素(蛋白酶体通路(,,,)完成的【,,，参与细胞程。研究表明:凋亡调控相关的,,,,,,,,、,,,,,,,,,、,;,(,家族、凋亡抑制因子泛素,蛋白酶体途径(,,,？,,,,,选择性降解的重要途径之一，参与了许多蛋白质水解调控的生理过程〔,，,,。真核细转录、蛋白质降解、蛋白质稳定、受体胞吞、细胞凋亡和应激反应等多种生理过,,,,，,,,)是生物体内进行蛋白质,,,处理超过,,,的细胞内蛋白质，是蛋白质降解的重要机制【,,】。蛋白酶体在降等在细胞内的降解均与, ,,有关【,，,,，提示,,,在细胞凋亡调节中发挥重要作用。药物，成为当今白血病研究的热点。解这些蛋白质中发挥着核心作用。近年的研究发现多数肿瘤细胞中，泛素、蛋白在着复发、多药耐药或难治愈的问，如何从根本上改善白血病的治疗效果和预白血病已成为有望可以治愈的恶性肿瘤之一。但现在大部分白血病病人仍普遍存已有部分白血病病人可以完全治愈或长期无病生存(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,)，部分白血病的发病机制己基本明确，通过靶向治疗研究及临床新药应用的进展，移植的广泛应用。近年来随着免疫学、分子生物学、基因组学等学科的研究进展，后、提高长期无病生存率是目前临床医学研究的重点。探索一种安全有效的化疗细胞供者;此外，异基因干细胞移植费用较昂贵，而且移植相关死亡率和移植后的异基因干细胞移植是目前白血病较好的治疗方法，但它首先需要与患者匹配的干病复发而死亡【,捌。自体干细胞移植由于其复发率较高，在白血病方面应用不恪,籽』颊叨运淠芑竦媒细叩幕航饴剩蟛糠只颊叱,捎诨撇???趸蚣苍嘉贰福保巴颉,壳鞍籽〉闹饕瘟剖侄问腔坪驮煅上赴浦玻贫远裥灾琢龅模担ァ,谖夜籽〉哪攴??试嘉础担保巴颍饴愿哂诠冢籽?且焕喑,难现匚:θ死嘟】档脑煅低扯裥灾琢觯渥芊??收夹熘菀窖г核妒垦宦畚模穑颍铮簦澹幔螅铮恚澹螅?经典论文 博硕论文 硕 士 论 文重要的治疗靶削?】。蛋白酶体(,,,,,,,,,,)是一种由多个亚单位组成的,,,依赖,,(,,,的抗肿瘤作用，并从,,,,,,,,的活化及,,(,，,水平探讨其致凋亡的机制。研究显示蛋白酶体抑制剂,,(,,,对多种肿瘤细胞(,,(,,，,,,,，,,,,(,，肝癌可促使细胞凋亡。目前,,(,,,被认为是很有发展前途的抗肿瘤药物之一。体外包括许多负责细胞增殖和凋亡信号传导的蛋白，因此,,(,,,通过抑制、阻断,,,，胞株的研究少见报道。本试验以淋巴细胞白血病细胞株,,,,,为研究对象，深入研究细胞,,,,,，胃癌细胞,,,(,,,,等)具有诱导凋亡作用，但对淋巴细胞白血病细抑制剂，它能阻止,,,蛋白酶体对泛素化靶蛋白的降解、抑制,,,蛋白酶体中类白酶家族活性而促进凋亡。,,(,,,是一种有效、可逆的醛基肽类特异性蛋白酶体和等和肿瘤抑制蛋白的含量，诱导死亡受体合成，以及诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋糜蛋白酶(;,,,,,,,,,,,—,,,,，,,,,)活性，从而阻断,,,。因为,,,水解的底物制泛素一蛋白酶体在细胞内的生物活性来调节细胞周期，促进细胞凋亡。目前已知蛋白酶体抑制剂是一种新发现的具有发展前景的肿瘤治疗药物【,,】，它通过抑影响细胞生理学过程。的多肽。蛋白酶体抑制剂通过抑匍〕,,,蛋白酶体对泛素化靶蛋白的水解作用，从而性，进入,,,亚单位的筒状结构内被多次切割，最后降解形成,””,,个氨基酸残基泛素化后，先被,,,蛋白酶体的,,,亚单位识别，随后泛素化靶蛋白脱泛素链和变一个,,,核心蛋白酶体和两个,,,调节复合体结合而成。在,,,中，各种靶蛋白性蛋白水解酶复合体，因其沉降系数为,,,，故又称,,,蛋白酶体。,,,蛋白酶体由蛋白酶体抑制剂的功能包括提高细胞周期相关蛋白如细胞周期依赖激酶抑制剂以长并诱导其凋亡。因此对于有关增殖性疾病，尤指癌症的治疗中，蛋白酶体成为一个,,,通路发挥了较正常细胞中更为重要的作用，此过程的异常可影响肿瘤细胞的生量增加。这些结果提示，与肿瘤细胞周期调控和生长有关的蛋白质的降解调控中，酶体呈高度丰富的表达，而且在正常细胞的恶变 过程中，泛素、蛋白酶体的表达徐州医学院硕士学位论文, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文材料和方法,材料(,,?冰箱,(,主要仪器美国,,,,,,公司,,,发光液,,,恒温培养箱小鼠急性淋巴细胞白血病细胞株,,,,,细胞，购自医学科学院上海细胞库,(,细胞株,,,,培养液胎牛血清,(,主要试剂碧云天生物公司倒置显微镜二甲基亚砜杭州四季青生物公司美, 国,,,;,公司,,,,,,,,活性检测试剂盒超净工作台,孔、,,孔细胞培养板,,,，,,,,，凋亡检测试剂盒强蛋白裂解液蛋白定量试剂盒兔抗小鼠,,,,，,,,,单克隆抗体核蛋白提取试剂盒,,,,,,,,,,,,公司美国,,,,;,公司,,,,,公司凯基公司徐州医学院硕士学位论文,,,,;,公司,,,日本,,,,,,,公司,,,,,,,,,,公司,,,,,美匡，日本,,,,,公司,,,;,,,,公司吴江净化设备厂,,,,,,,,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,方法,组(对照组):以等量的培养基代替干预药物;实验组分为,、,、,、,组，,(,技术路线,,,,时后用于以下实验。各组细胞培养液中,,(,,,的药物终浓度分别为,(,、,、,,和,,,,,,,,，药物作用,(,实验分组稀释，根据需要稀释,,(,,,至终浓度为,(,、,、,,和,,,,,,,,。,,、,,、,,,和,,,,,,,,,母液，避光保存，置(,,。,备用。实验时用培养基将药物,,(,,,购,,,,,,,,,公司，先用,,,,,,,溶解，再将其配制成药物浓度分别为,,的配制参考相关文献报道和预实验结果，实验分组如下:数在,,,以上时进行实验。合阶段传代培养，取传代后处于对数生长期的细胞，,(,,台吩蓝染色鉴定活细胞?、体积分数为,,的,,,、饱和湿度的培养箱中培养，当细胞处于,,,至,,,的混,,,,,细胞悬浮培养于含,,,的灭火胎牛血清的,,,,,,,,培养基中，置于,,,(,细胞培养流式细胞仪美国,,,,,,美国,,,(,,,公司移液枪北京医用离心机厂,,(,,,型电子天平北京医疗设备厂目甸博小笃日,青岛海尔公司低温高速离心机酶标仪恒温水浴箱,,,(,,台式离心机,?冰箱,,,,,,,,,公司,,,,,,,,,公司,,(,徐州医学院硕士学位论文,,;,,,,,,公司,(,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文卜 州医学院硕士学位论文徐,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文, 订溶液(,,生长抑制率(呦,,((各药物浓度组,值,对照组,值)×,,,,,(,，,,结合液和,,,,的,，。(,)离心弃上清后，加入,,,，,,(,)室温(,,—,,。,)避光孵育,,,,,。,(,，,,混匀。,(,，,,结合液和,,,的,,,,,,,(,)混匀后随即进行流式细胞仪检测。流式细胞数据由,,,,,,,(,软件系统分析。,二甲基亚砜，置摇床上低速振荡,,(,)收集细胞离心，,,,重悬细胞，取,—,,万重悬的细胞离心弃上清，加入,,,),,的培养基，每个剂量设六个复孔。不同浓度的,,,,,,(终浓度为,(,、,、,,和,,,,,,,,)，对照组给予相同体积(,)每孔加入,(,,,细胞悬液，另外设只加培养液的调零孔，实验组分别加入,(,,,(,)收集对数生长期,,,,,细胞，调节细胞悬液浓度为,,,个,,,，接种于,孔板上。,(,流式细胞术(,,,)检测各组,,,,,细胞凋亡变化(,)收集对数生长期,,,,,细胞，调节细胞悬液浓度为,,,,,,,,，接种于,,孔板上。,次。(,)用酶标仪(波长,,,,,)测定 各孔的吸光值，计算细胞生长抑制率。实验重复,,,，使结晶物充分溶解。,,,,,,,,活性变化的测定(,)每孔加入,,,,,,,离心，，,、心吸去培养孔内上清液((,)每孔加入,,,斗,细胞悬液，另外设只加培养液的调零孔，实验组分另,,,，,,,,,,,,,，即,(,,,,,)，继续培养,上。(,)每孔加入,,(,)置,,”,，,,,,,的培养箱中孵育,,小时，倒置显微镜下观察。的培养基，，每个剂量设六个复孔。不同浓度的,,,,,,(终浓度为,(,、,、,,和,,,,,,,,)，对照组给予相同体积(,)收集对数生长期,,,,,细胞，调节细胞悬液浓度为,×,,,,,,，接种子,,孔板,,,法检测各组,,,,,细胞生长抑制率徐州医学院硕士学位论文,，,,,,,,,,,(,,,,,,,,,(,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,;(,,,,—,,,(,,,)后混匀。的培养基，每个剂量设六个复孔。不同浓度的,,(,,,(终浓度为,(,、,、,,和,,,,,,,,)，对照组给予相同体积,,,,检测各组,,(,,,,,核蛋白的表达(,)每孔加入,(,,,细胞悬液，另外设只加培养液的调零孔，实验组分别加入,(,,,(,)收集对数生长期,,,,,细胞，调节细胞悬液浓度为,,,个,,,，接种于,孔板上。,,,,检测各组,,(,，,,,,核蛋白的表达,,,,,,,(,)每孔加入,,,,,,,细胞悬液，另外设只加培养液的调零孔，实验组分别加入,,，,,,生的吸光度。,催化产生的,,,产,(样品的,,,,扣除空白对照的,,,,，即为样品中;,,,,,,以适当延长孵育时间，甚至可以孵育过夜。不同浓度的,,,,,,(终浓度为,(,、,、,,和,,,,,,,,,)，对照组给予相同体积,(加入,;，,,,,,—,,,(,,,)后混匀，注意避免在混匀时产生气泡。,,。,孵育,,(,,,分钟。发现颜色变化比较明显时即可测定,,,,。如果颜色变化不明显，可避免在混匀时产生气泡。随后再力〔，,,，,,,,,注意:在设置反应体系时先加检测缓冲液，再加待测样品，适当混匀，注意(,),,,,,,,实验组依次加入,,,,检测缓冲液、,,,,上清、,,,,,;—,,,,,,,,(,,,)后混匀;对照组依次加入,,,,检测缓冲液、,,,上清、,,,,,(如下设置反应体系:,(取出,,,和适量的,;,,,,,—,,,(,,,)，置于冰浴上备用。,的酶活性(,)立即测定,,,,,,,,,，,,,—,,，,,,,离心,,,,,分钟。入裂解液，重悬沉淀，冰浴裂解,,,,,。,,,洗涤一次。同前吸尽上清后，按照每,,,万细胞加入,,,，,,,裂解液的比例加,”,离心,,,,收集细胞，小心吸除上清，同时确保尽量没有细胞被吸除，的培养基，，每个剂量设六个复孔。(,),”,,,—,,,,(,,,(,,,)。徐州医学院硕士学位论文(,),,,,,(, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,(吸取离心后的上清上清液，留取少量部分用作蛋白浓度测定，一(收集蛋白样品(,,,,;,,收集完以上蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个的纸巾晾干。总蛋白样品。,,,,(,,,(,)缓冲液二(配胶,(首先培养悬浮白血病细胞，待其长满培养瓶后，将培养液连同细胞吸入离心管，离心弃掉培养液上清(,(离心管加入,,,,,强烈解液，置冰上裂解,,分钟，,(,,分钟后,”,, ,,,,,,,,,,(转,分)离心,,,,,，此时分层(双蒸水,,,,量(,块板),,,,量(,块板)分离胶的配制(,,,) 总蛋白提取:一定要将玻璃板洗净，最后用,,,,,冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净,(剩余的部分加入,,,上,用,,,蛋白浓度测定试剂盒(碧云天)进行蛋白浓度的测定。使用最常用的碧云天生产的,,,,,,,及，,(,,,，)细胞裂解液，裂解悬浮细胞提取,，,)(美国公司产品(蛋白样品的蛋白浓度。使用碧云天生产的,,,,,,,及，,细胞裂解液提取蛋白，使,,,,,,,,,,,)步骤:具体操作见书((,,(,,,?,,;,,,,核蛋白提取:细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒，(,,,,;,公司，美国)。至此蛋白提取完毕，可分装待用(,,,,;,(,,样缓冲液)，,,,。,煮,,,,，使蛋白变性，徐州医学院硕士学位论文,(,,,(,,,,(,,,,(,,,,,,,,,,,,,;，,,,,,,,,(,,,,,(,,,,(,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,;，,,,,,,,,,,上,,,,,,,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,(,,“,,,,,,跑过分离胶后，即在溴酚蓝进入下的电流强度进行稳流电泳，等,,,,,,,,(之后电泳，电泳时通常在上层胶时使用低电压恒压电泳，即电泳开始用,,,三(电泳,(通常电泳时溴酚蓝到达胶的底端处附近即可停止电泳，即在目的蛋白泳动至预染,,,,,,(美国公司产品)，,,,,,,上样量为,,,，第一孔位,,,,,,，之后的,、,、,(所有蛋白样品调至等质量后上样(本实验选择上样量为,,,,)，蛋白,,,,,为层胶时使用高电压恒压电泳，电压改为,,,,。(,,,的,,,最好现配现用)水)冲洗胶孔两遍以去除残胶。之后灌浓缩胶，灌好浓缩胶后插入梳子，,,拔除梳子，拨出梳子后用,,,,,(双蒸置片刻控净，或者滤纸吸干。切记，勿动。)，,,。,,小时待胶凝固，待胶凝后将封胶液倒掉，将玻璃板倒立放先配分离胶，灌好分离胶后封胶(封胶:灌入,,,的分离胶后应立即封胶，封胶后分离胶及浓缩胶均可事先配好(,,,,,最后加外),、,、,孔分别上不同处理的细胞提取后的蛋白。,,，山,,山浓缩胶的配制(,,),,,双蒸水,,(,块板),,,量(,块板),,,(,,,(,)缓冲液, ,过硫酸铵(,,,),,,,,(最后加),山上层加酒精水封，,,,,,,，时待胶凝固,,,, ,过硫酸铵(,,,),,,,,徐州医学院硕士学位论文,山,(,,,(,,,,,(,,,,,(,,,,,(,,,,“,,(,,,,(,,,,,,,,,,,,“,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文电泳结束前,,分钟左右戴上手套开始准备:移液中。(必要时可先用丽春红染色观察蛋白条带转膜效率，再用去离子水,,,,将丽春脂牛奶,,,,液)中，摇床上缓慢摇荡,小时。将膜从电转槽中取出，去离子水与,,,,稍加漂洗，浸没于封闭液(,,光明牌脱五(封闭及杂交封闭转,,,,,。膜上，胶上一层为另一滤纸挚，盖好电转槽盖子，注意膜在正极一侧。恒流,,,,,，玻棒逐出气泡，剪去滤纸与膜的过多部分，以防止短路。之后将胶平铺于,,,,,(转膜:先铺一层滤纸垫，之上铺,,,,膜，滴加少许电转液驱赶气泡，注意用范围更广些的胶，左上切角，在转移液中稍稍浸泡。,(取胶:将电泳完的胶取下，根据,,,,,,的大小进行比对，保留,,(,,,,分子量的半湿式转膜装置。毛细作用自然吸水后再完全浸入水中,,,,,以排除气泡。同时将滤纸垫也浸入转,(浸泡,,,,膜:将,,,,膜平铺于甲醇里激活,,秒，之后加入转膜缓冲液，靠结合一抗:一抗的准备:本实验使用的一抗为:,, ,,—,,,?;,,,,(,,,,四(转膜,,,蛋白分子量为:,,,,，故本实验摸索的转膜条件为:,,,,,，本实验时,,—,，,膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转距胶下缘,,,,以上结束。在,,,,,,,实验中选用,,,,膜(使用,,;,,公司产品，美国)。使用,,,(,,,本实验此步骤使用,,,(,,,的电泳装置。徐州医学院硕士学位论文红洗脱后封闭),,,,,。,,,,,,,,,,,„ 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文,统计分析采用统计学软件,,,,,间比较采用,检验，多组资料问比较采用单因素方差分析(,,,(,,,,,,,,)，,,,(,,剂均为该实验室提供。本部分实验在南京医科大学附属第一医院卫生部活体肝移植实验室完成，所用试晾干，进行分析与扫描。,(,统计分析软件处理数据，所有数值采用石?,表示，两组浸入显影液中,,,,,,，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净本)，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光(本实验曝光,,,,)。取出胶片立即完全至可见淡绿色荧光条带，固定于暗室中的压片盒中，迅速盖上胶片(,,,,,，日子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，放于杂交袋中，滴加,、,混合液,,,,,,，熄灯将,、,发光液按比例稀释混合(本实验用,、,液的量各为,,,，(,,)。膜用去离,,,(,,,发光法:一般使用辣根过氧化物酶,,,(,,,发光法。六(发光鉴定光明牌脱脂奶粉即为封闭液，抗体稀释也用此液),,,,加入,,(封闭液与抗体溶剂均为含,,脱脂奶粉的,,,,，临用时取,,,,,洗涤:二抗孵育结束后，用,,,,漂洗膜后再浸洗三次，每次,(,,,,,,。例为,:,,,,，,,?摇床上轻摇一小时。，,;()，稀释比结合二抗:根据一抗来源选择合适的二抗，本实验使用的二抗为:,,,,,,,,,,,洗涤:一抗孵育结束后，用,,,,漂洗膜后再浸洗三次，每次,(,,,,,。,,;,,,,,,,，,,,,,,,，,,，,,,,,)，本实验一抗稀释比例为,,,,,，即,,,牛奶里,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,加,,,抗体。将转好的膜装入封有稀释抗体的杂交袋中，,”,冰箱中过夜。徐州医学院硕士学位论文,,,,,,,,,,(,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, 经典论文 博硕论文 硕 士 论 文表示差异有统计学意义。 经典论文 博硕论文 硕 士 论 .