【doc】枕中健脑液益智作用的实验研究

【doc】枕中健脑液益智作用的实验研究 枕中健脑液益智作用的实验研究 ? 38? 成都中医药大学 JournalofChengduUniversityofTCM 2003年6月第26卷第2期 Jun.2003,Vo1.26,No.2 枕中健脑液益智作用的实验研究 张宏彭成邓清秀陶云平赵纪岚周奇志张廷模胡坦莲 (成都中医药大学,四川成都610075) 摘要:目的通过研究枕中健脑液对正常大鼠,小鼠及记忆障碍动物模型学习记忆行为以及对记 忆障碍模型动物脑内神经递质和胆碱酯酶的影响,初步探讨其益智作用机理.方法采用跳台试验和Y一 迷宫试验,测定正常动物和记忆获得,记忆巩固,记忆再现障碍模型动物的记忆过程,采用荧光光度法和 Ellman法分别测量脑组织神经递质和胆碱酯酶.结果服用枕中健脑液的实验小鼠其跳台试验的错误次 数,以及大鼠Y一迷宫试验的潜伏期和错误次数,均少于相关对照组(P<0.05);服用枕中健脑液的记 忆获得障碍小鼠和记忆再现障碍小鼠,其跳台试验的潜伏期长于相关对照组(P<0.05或(P<0.01), 其错误次数小于相关对照组(P<0.01).服用枕中健脑液的记忆巩固障碍大鼠,其Y一迷宫试验的潜伏 期和错误次数均低于相关对照组(P<0.05或(P<0.01).服用枕中健脑液的大鼠脑组织胆碱酶活性低 于相关对照组(P<0.05),其NE和DA含量高于相关对照组(P<0.01).结论枕中健脑液具有提高实 验动物学习记忆能力,改善记忆获得,记忆巩固和记忆再现3个阶段功能失调的作用,其机理可能与调节 乙酰胆碱的合成一释放一分解过程及增加NE和NA的含量有关. 关键词:枕中健脑液;益智;实验研究 中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1004,0668(2003)02.0038.03 枕中健脑液是我校已故着名中医药学专家凌一 揆教授根据古代名方”孔圣枕中丹”加减变化而来. 孔圣枕中丹载于<备急千金要方>卷十四,由龟甲,龙 骨,远志,菖蒲四味药物组成,原着谓”常服令人大 聪”,<医部全录>述该方专治健忘.凌教授根据健忘 的基本病机,结合自己的多年临床实践,在孔圣枕中 丹的基础上去龙骨,加人参等组成枕中健脑液.经 重庆市中医院等3家医院临床观察证明,枕中健脑 液能提高青少年学习记忆能力,治疗中老年健忘,其 有效率达88.2%J.为进一步验证该药的疗效,探 寻该药的作用机理,我们选择了与学习和记忆有关 的部分指标,对该药进行了药理药效学的实验研究, 现将结果报告如下. l材料与方法 1.1实验材料 1.1.1实验药物 (1)受试药物:枕中健脑液浸膏,由成都中医药 大学药学院谢秀琼教授提供,研究批号:980904,每 mL含原生药4g.试验设3个剂量组:2,4,8g原生 药/kg体重(分别相当于每日临床剂量的5,10,20 倍).配制方法:取枕中健脑液浸膏100mL,加蒸馏 水300mL,混匀即得100%的药液供大剂量用,按 比例稀释成50%和25%的药液供中剂量和小剂量 使用. (2)阳性对照药物:银可络,由深圳海王药业有 限公司生产.试验时给药剂量为23.04mg/kg(相当 于临床日服剂量的20倍).配制方法:取银可络72 片,用蒸馏水配制成240mL银可络药液(每mL含 银杏叶总黄酮2.88rng)备用. 喜得镇,由瑞士山德士药厂,国营天津华津制药 厂联合生产.试验时给药剂量为2.4mg/kg(相当于 临床日服剂量的20倍).配制方法:取喜得镇10 片,用蒸馏水的制成200mL喜得镇药液备用. 1.1.2实验动物 昆明种小鼠,雌雄各半,体重20?2g,动物质量 合格证号:川实动管质(97)第7号.SD大鼠,雌雄 各半,体重185?20g,动物质量合格证号:川实动管 质(97)第8号.由成都中医药大学实验动物研究中 心提供,检疫后备用. 1.2实验方法 根据枕中健脑液的功能主治【lJ,选用正常动 物,疾病动物模型和恰当的实验方法[2-7】. 1.2.1小鼠跳台试验 取昆明种小鼠50只,随机分成阴性对照组(N :10),阳性对照组(N:10),枕中健脑液高剂量组 (N:10),枕中健脑液中剂量组(N=10),枕中健脑 液低剂量组(N:10).按组分别灌胃蒸馏水,银可 络药液,100%枕中健脑药液,50%枕中健脑药液, 基金项目:四川省科技厅重点资助项目 作者简介:张宏,男,1969年9月生,在读博士研究生;彭成,男,1964年4 月生,教授,博士生导师;研究方向:疾 病动物模型与中药复方药理研究. \ 墓 第2期张宏等枕中健脑液益智作用的实验研究?39? 25%枕中健脑药液8mL/kg.d,连续15d.第15d, 动物给药lh后,按相关文献法作跳台实验,对照观 察各实验组5min内的错误次数. 1.2.2大鼠Y一迷宫试验 取SD大鼠50只,分组及给药同上,连续给药 40d.第40d,动物给药1h后,将其放人MG一2迷 宫(江苏张家港三兴工艺五金厂生产),按相关文献 法Y一迷宫实验,对照观察各组大鼠第1次从非安 全期进入安全期的潜伏期时间,以及测试期内的错 误次数. 1.2.3记忆障碍模型 (1)小鼠记忆获得障碍模型:取昆明种小鼠60 只,随机分成空白对照组(N=10),记忆获得障碍模 型组(N=10),阳性对照组(N=10),枕中健脑液高 剂量组(N=10),枕中健脑液中剂量组(N:10),枕 中健脑液低剂量组(N=10).除空白对照组外,其 余各组分别灌胃蒸馏水,喜得镇药液,100%枕中健 脑药液,50%枕中健脑药液,25%枕中健脑药液8 mI/kg.d,连续15d.末次给药1h后,腹腔注射东 莨菪碱(广州明兴制药厂生产,批号971207)5mg/ kg,30min后对小鼠进行跳台训练5rain.24h后测 试小鼠第1次跳下橡皮垫的潜伏期和5min内的错 误次数.一 (2)大鼠记忆巩固障碍模型:取SD大鼠60只, 分组给药方法同上,连续给药40d.末次给药1h 后,对大鼠进行Y一迷宫训练10次.训练结束时, 立即皮下注射亚硝酸钠(成都化学试剂厂生产,批号 971224)120mg/kg.24h后测定大鼠第1次从非安 全区进入安全区的潜伏期,以及10次内进入非安全 区的错误次数. (3)小鼠记忆再现缺失模型:取昆明种小鼠60 只,分组给药方法同上,连续给药15d.末次给药 lh后,对小鼠进行跳台训练五rain.24h后,复测潜 伏期和错误次数前30min,给小鼠灌胃30%的医用 乙醇10mL/kg.测试小鼠第1次跳下橡皮垫的潜 伏期和5min内的错误次数. 1.3对大鼠脑组织胆碱酯酶和神经递质的影响 取SD大鼠60只,分组给药方法同上,连续给 药40d.第40d,除空白对照组外,模型组和各给药 组给药1h后,皮下注射亚硝酸钠(成都化学试剂厂 生产,批号971224)120mg/kg.24h后处死动物,取 脑组织.用干净滤纸吸去脑组织表面的水分及血液, 精确称重后,用玻璃匀浆器制备脑匀浆.改良Ell— man法[8J测定脑组织ACHE的活力,荧光分光光度 法9测定脑组织中去甲肾上腺素(NE),多巴胺 (DA),5羟色胺(5一HT)的含量. 2实验结果 2.1对小鼠学习成绩的影响 各实验组小鼠连续以枕中健脑药液灌胃,于第 15d,给药1h后,行跳台实验,得5min内错误次数 的结果:阴性对照组为7.80?4.21;阳性对照组为 4.20?2.49;中剂量组为4.70?2.00高剂量组为 3.80?2.39.高,中剂量组与阴性对照组之差异有 统计学意义(P<0.05). 2.2对大鼠学习成绩的影响 各实验组大鼠连续灌胃40d,行Y一迷宫实验, 得潜伏期和错误次数的结果为:阴性对照组27.50 ?9.06秒,5.50?2.22次/10次;阳性对照组17.60 ?9.15秒,3.00?1.15次/10次;高剂量组18.00? 8.15秒,3.00?2.49次/10次.高剂量组与阴性对 照组相比,其两项指标之差异有统计学意义(P< 0.05),与阳性对照组之差,则无统计学意义(P> 0.O5) 2.3对记忆障碍模型的影响 2.3.1对小鼠记忆获得障碍模型的影响(表1) 表1枕中健脑液对小鼠记忆获得障碍模型的影响(;?sl 与空白对照组比较*P<0.05,-I[*P<0.01;与模型组 比较?P<0.05.zx/’,p<0.01 2.3.2对大鼠记忆巩固障碍模型的影响(表3) 表2枕中健脑液对大曩记忆巩固障碍模塑的影响l;?s) 与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.0l;与模型组 比较?P<O,05,??P<0.01 2.3.3对小鼠记忆再现缺失模型的影响(表3) 表3枕中健脑液对小鼠记忆再现缺失模型影响(;?sJ 与空白对照组比较**尸<0.01;与模型组比较ZXAp Q:Q 2.4对大鼠脑组织胆碱酯酶和神经递质的影响(表 4) ? 40?成都中医药大学2003年第26卷 与空白对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与模型组比较?P<0.05,??P<0.01;与阳性对照组比较oP<0.05, QQQ:Q 3讨论 由小鼠跳台试验可见:枕中健脑液高,中剂量组 小鼠在实验中的错误次数少于阴性对照组(P< 0.05).从大鼠Y一迷宫试验可见:枕中健脑液高剂 量组大鼠进入安全区的潜做时间和错误次数均少于 阴性对照组(P<0.05),前述各组大,小鼠与阳性对 照组相比,其差异则无统计学意义(P>0.05).说 明一定剂量的枕中健脑液能提高正常小鼠和大鼠的 记忆能力,其作用强度与银可络相似.从表1可见: 枕中健脑液高,中剂量组记忆获得障碍小鼠,跳台试 验的潜伏期和错误次数,均低于模型对照组(P< 0.01).从表2可见:枕中健脑液高,中剂量记忆巩 固障碍组大鼠Y一迷宫试验的潜伏期和错误次数, 均短于或少于模型对照组(P<0.05或P<0.05), 低剂量组大鼠的错误次数亦少于模型对照组(P< 0.01).从表3可见,枕中健脑液各剂量组记忆再现 缺失小鼠,跳台实验的潜伏期和错误次数均低于模 型对照组(尸<0.01).上述结果说明,枕中健脑药 液能改善记忆获得障碍小鼠,记忆巩固障碍大鼠,记 忆再现障碍小鼠的学习记忆能力,其作用强度与喜 得镇相似.由此可以推测,枕中健脑液对学习记忆 的作用是通过影响记忆的获得,巩固和再现等各个 环节来实现的. 从表4可见,枕中健脑液高剂量组大鼠脑组织 中的胆碱酯酶活性低于模型对照组(P<0.05),各 剂量组大鼠脑组织中NE和DA含量均高于模型对 照组(P<0.01),其5一}rr含量也有高于模型对照 组的趋势,但其差异则无统计学意义(P>0.05). 上述结果说明,枕中健脑液能增加记忆障碍模型大 鼠脑组织NE,DA含量,降低胆碱酯酶活性,对5一 HT亦有促进其升高的趋势,促进记忆障碍模型大 鼠脑神经递质,胆碱酯酶恢复到正常水平.其作用 机理可能是作用于乙酰胆碱的合成一释放一分解过 程以及增加脑内NE,DA,5一}rr的含量,从而调节 脑的高级活动. 参考文献 1谢秀琼.中药新药制剂开发与应用[M].北京:人民卫生 出版社,1994.407. 2中华人民共和国卫生部.新药(西药)临床前研究指导原 则汇编[S].1994.43. 3徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京:人民 卫生出版社,1991.659. 4陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版 社.1994.738. 5马志义,王秉文,刘冬平.补脑丸对动物学习记忆的影响 [J].中药新药与临床药理,1998,9(1):35. 6吴正治.唐春艳,卢汉平.天泰?号对实验性老年痴呆益 智作用及机理探讨[J].中药新药与临床药理,1999,10 (1):31. 7戴新民,张尊祥,傅中先.楮实对小鼠学习和记忆的促进 作用[J].中药药理与临床,1997,13(5):27. 8倪正新.脑胆碱酯酶Ellman测定法的改良[J].南通医 学院,1990,10(3):239. 9中医研究院针灸经络研究所生化组.脑中5一HT, 5HIAA,NE,DA的同时提取和荧光分光光度测定[J]. 中医药研究参考,1975,(7):38. (收稿日期:2003一O1.11)