[机械/制造]气血和胶囊

[机械/制造]气血和胶囊 乙肝扶正胶囊 微生物限度验证资料 生产单位:兰州伟慈制药有限责任公司 实验单位:兰州伟慈制药有限责任公司 实验人: 质量部长: 实验日期:2008年12月21日-2009年1月29日 乙肝扶正胶囊微生物限度方法验证资料 1、样品: 气血和胶囊: 兰州伟慈制药有限责任公司生产; 批 号: 20080601; 规 格: 0.25g/粒。 物料代码: C12 2、仪器设备: 高压蒸气灭菌器(计量合格) 上海佳胜-YXQ-SG46-280SA 电子天平 常熟双杰 T1000 细菌培养箱 上海佳胜SPX-250B 霉菌培养箱 上海佳胜MJ-250B 3、实验用培养基:(由北京三药科技开发公司生产) 营养琼脂培养基 批号 041019 玫瑰红钠琼脂培养基 批号 051102 营养肉汤培养基 批号 040105 胆盐乳糖培养基 批号 041103 改良马丁培养基 批号 040915 麦康凯琼脂培养基 批号 041103 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 批号 060210 乳糖胆盐发酵培养基 批号 060518 4、稀释液:PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 5、试验用菌种: 大肠埃希菌【CMCC(B)44102】 金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】 枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】 白色念珠菌【CMCC(F)98001】 黑曲霉【CMCC(F)98003】 6、菌液制备:取以上各菌株第二代的新鲜培养物，接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌至营养肉汤培养基中，35?培养24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，25?培养48小时;以上培养物(黑曲霉取浓菌液1ml)均用0.9%无菌氯化钠制 成50-100CFU/ml菌悬液，结果见1。 7、供试液制备:取供试品10g，加稀释液100ml，制备成1:10供试液，再用10倍稀释法制成1:100的供试液。 8、方法验证试验 8.1.1平皿法 (方法验证分为试验组、供试品对照组、菌液组共三组)验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。 (1) 实验组:取上述供试液(1:10稀释级)1ml和50-100cfu试验菌，进行霉菌及酵母菌 数测定;取上述供试液(1:100稀释级)1ml和50-100cfu试验菌，进行细菌数测定; 结果见表1。 (2) 供试品对照组:取量供试液，按菌落计数法测定供试品本底菌数。结果见表1。 (3) 菌液组:测定所加的试验菌数。结果见表1。 标准规定:实验组的菌回收率均应不低于70%。 8.1.2培养基稀释法 取1:100稀释级的供试液，采用0.5ml/皿加入试验菌，金黄色葡萄球菌50-100cfu，同平皿法进行试验，结果见表2。 表1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证(平皿法)实验结果 实验结果 实实验组菌数 供试品对照组菌数 菌液组菌数 回 验收 平 平 平 平板数 平板数 平板数 次率 均 均 均 1 2 1 2 1 2 菌株名称 数 (%) 数 数 数 1 95 100 97.5 4 6 5 104 102 103 94.7 枯草芽孢杆菌 2 110 104 107 3 5 4 120 119 119.5 89.2 3 86 78 82 4 4 4 85 80 82.5 94.5 1 98 87 92.5 4 6 5 114 101 107.5 81.4 金黄色葡萄球菌 2 68 65 66.5 3 5 4 95 93 94 66.5 3 71 81 76 4 4 4 88 97 92.5 77.8 1 98 105 101.5 4 6 5 98 102 100 96.5 大肠埃希菌 2 113 105 109 3 5 4 111 119 115 91.3 3 84 88 86 4 4 4 85 84 84.5 97.0 1 99 93 96 0 0 0 102 104 103 93.2 白色念珠菌 2 103 108 105.5 0 0 0 106 108 107 98.6 3 83 77 80 0 0 0 92 89 90.5 88.4 1 49 53 51 0 0 0 55 54 54.5 93.6 黑曲霉 2 61 59 60 0 0 0 65 73 69 87.0 3 52 53 52.5 0 0 0 55 53 54 97.2 表1结果:可采用1:10稀释级常规法(平皿法)进行霉菌数及酵母菌数检查，不可采用常规法1:100稀释级(平皿法)进行细菌数检查。 表2培养基稀释法1:100稀释级(0.5mll/皿)验证实验结果 实验结果 实实验组菌数 供试品对照组菌数 菌液组菌数 回 验收 平 平 平 平板数 平板数 平板数 次率 均 均 均 1 2 1 2 1 2 菌株名称 数 (%) 数 数 数 1 105 110 107.5 1 2 1.5 114 101 107.5 98.6 金黄色葡萄球菌 2 90 90 90 3 0 1.5 105 113 109 81.2 ) (0.5ml/皿3 87 82 84.5 1 1 1 90 93 91.5 91.3 表2结果:可采用培养基稀释法1:100稀释级(0.5ml/皿)进行细菌数检查。 8.2.控制菌检查(验证时试验分为试验组与阴性对照组) 取1:10的供试液10ml，加入到相应的增菌培养基中，依据该品种项下微生物限度标准中规定的控制菌进行检查，验证实验可与供试品的控制菌检查同时进行。结果见表3。 表3 控制菌检查方法验证结果表 试验组结果(+) 阴性对照组结果(—) 组别 接种菌 分离平板及生化试验 菌株接种菌 阴性对照组结果 数量 名称 数量 培养基 分离 分离 生化试验 培养基 生化试验 菌株名称 CFU CFU 平板 平板 MUG MUG 金 BL 麦康凯 BL 麦康凯 靛基质 靛基质 黄 大肠埃希菌 + — 色 浊 见疑似菌落 浊 无菌落生长 + — 葡 100 107 萄 乳糖发乳糖发乳糖胆盐 麦康凯 乳糖胆盐 麦康凯 球 酵管 酵管 大肠埃希菌 菌 (大肠菌群) 产酸、未产酸、 未产酸、产酸产气 见疑似菌落 无菌落生长 产气 产气 产气 注:+ 各培养基有菌生长 — 各培养基无菌生长 标准规定:试验组应检出试验菌;阴性对照不得检出菌。 表4结果:可采用常规法进行控制菌检查。 9.实验结果: 结论:本品按《中国药典2005年版一部》附录“微生物限度检查法”方法学要求验证，可采用常规法进行霉菌数及酵母菌数检查。可采用1:100稀释级(0.5ml/皿即每1ml加2皿)进行细菌数检查。可采用常规法进行控制菌检查。