紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的
和全氟壬酸对大鼠肝脏免疫
学校代码: ,,,,, 学 号;,,,,,,,, 硕士学位论文紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的机制和全氟壬酸对大鼠肝脏免疫毒性的研究 所在院校: 医药生物技术研究所 姓 名 : 邹珊珊 指导教师: 何琪杨教授 导师小组: 何琪杨教授戴家银教授 学科专业: 微生物与生化药学 研究方向: 药理与环境毒理 完成日期: 二零一一年五月 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人已经发
或撰写过的研究成果,也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的
。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论事作者签名:锕勿吁签字日期: 沙,,年,月,日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解墨量塞迹塑医堂瞳有关保存、使用学位论文的
。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权,匕塞逊塑医堂院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:彳妒彩岭每畸 导师签名: 捆泼糨签字日期:矽,,年,月歹日 签字日期:矽,,年』,』一日北京协和医学院硕士论文 目录 目录 中文摘
要……………………………………………………………………………(, ,,,仃(,;
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语…………………………………………………………………………(, 一中药紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的机制………………………………(, ,研究背景概述……………………………………………………………………, ,研究目的………………………………………………………………………((, , ,材料与方法……………………………………………………………………((,, ,(,药
品…………………………………………………………………………………………………, , ,(,主要仪
器……………………………………………………………………, , ,(,试剂与抗体…………………………………………………………………,, ,(,细胞培养……………………………………………………………………,, ,(, ,,,法检测细胞增殖抑制………………………………………………。,, ,(,流式细胞仪检测罗丹明,,,的积累………………………………………,, ,(,流式细胞仪检测细胞周期…………………………………………………,, ,(,流式细胞仪测定活性氧自由基……………………………………………,, ,(, ,,,,,, ,,,
,………………………………………………………………………………………,, ,(,,数据分析……………………………………………………………………,, ,实验结果………………………………………………………………………((, , ,(,人乳腺癌,,,(,,,,,耐药细胞和人口腔上皮癌,,,,,,耐药细胞的耐药 特征,, ,(, ,,对人乳腺癌细胞以及人口腔上皮癌细胞的生长抑制
作用…………,, ,(, ,,对人乳腺癌细胞以及人口腔上皮癌细胞的细胞周期影响…………,, ,(, ,,对人乳腺癌耐药细胞以及人口腔上皮癌耐药细胞的耐药性检测…,, ,(,流式细胞仪测定活性氧自由
基……………………………………………, , ,(, ,,与,,,合用的增效作用……………………………………………((,, ,(, ,,药物作用的凋亡通路…………………………………………………,, ,(, ,,降低,,,,,,,,,细胞中的,(,,的表达……………………………,,北京协和医学院硕士论文 目录 ,讨
论………………………………………………………………………………………………………(,, ,结
论……………………………………………………………………………………………………((,, 二,,,舵,细胞介导,,,,对大鼠肝脏免疫毒性的研究……………………(,, ,研究背景概
((,, ,研究思述…………………………………………………………………
路………………………………………………………………………((,, ,材料与方法……………………………………………………………………((,, ,(,主要仪器……………………………………………………………………,, ,(,主要试剂……………………………………………………………………,, ,(,分离和
,(,实验动培养细胞用相关溶液………………………………………………,,
物……………………………………………………………………,, ,(,实验处理……………………………………………………………………,, ,(,肝脏匀浆液细胞因子检测…………………………………………………,, ,(,原位灌流分离法分离原代肝细胞和,,,舵,细胞………………………(,, ,(, ,,,毹,细胞细胞因子检测………………………………………………((,, ,(,实时定量,,,,,,…………………………………………………………(, , ,(,,数据分析……………………………………………………………………,, ,实验结果………………………………………………………………………((,, ,(, ,,,,暴露对雄性大鼠肝脏中炎性因子的影响…………………………,, ,(, ,,,,暴露对雄性大鼠,,,鼢细胞中炎性因子的影响………………(,, ,(, ,,,,暴露下雄性大鼠肝脏的基因表达变化……………………………,, ,(, ,,(,,通过,,(,;,通路抑制,,,,,的表达……………………………一,, ,讨
论………………………………………………………………………………………………………(,, ,结
论……………………………………………………………………………………………………,,, 参考文
献……………………………………………………………………………,, 文献综述……………………………………………………………………………, , 个人简历……………………………………………………………………………,, 附蜀匙…………………………………………………………………………………………………………(,, 致
谢……………………………………………………………………………………………………………,,北京协和医学院硕士论文 中文摘要 紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的机制 和全氟壬酸对大鼠肝脏免疫毒性的研究 中文摘要, 中药紫龙金克服肿瘤细胞多药耐药性的机制 复方中药紫龙金(,,,,,舀,,,,,)是一种新型的抗癌中药,在临床上广泛应用于胃癌,结肠癌,乳腺癌等常见肿瘤的治疗,具有良好的临床抗癌疗效。多药耐药性的产生是导致化学药物治疗肿瘤失败的主要原因之一,目前已经成为临床肿瘤治疗中的主要障碍。,,与肿瘤多药耐药性的关系尚未见报道,为拓展其用途,本研究观察中药,,对于克服肿瘤多药耐药性的作用机制。 我们选择具有显著耐药性特征的两对细胞株,人乳腺癌耐药细胞,,,一,,,,,和人口腔上皮癌耐药细胞,,,,,,以及对应的敏感细胞株,,,(,、,,作为研究载体,,,,处理这两对细胞。,,,法检测,,对细胞增殖的影响,结果显示:敏感细胞和耐药细胞对,,的,,,,值相近,依次为,(,,?,(,,, ,咖,和,(,,?,(,,, ,,,,,, ,(,,?,(,,, ,,,
,,,,,,表明,,,(,,,,,和,,,,,,,和,(,,?,(,,,
,对,,均没有交叉耐药性。流式细胞仪检测细胞周期的变化,罗丹明,,,荧光以及活性氧自由基变化,结果显示,,对敏感和耐药细胞均有,期阻断作用,高浓度,,处理后罗丹明,,,荧光强度有所升高,认为其有微弱的逆转耐药性作用,,,处理后检测活性氧自由基没有变化。,,分别与多柔比星,,,和长春新碱,,,合用,可以明显地增加,,,和,,,的活性。,,,,,,,,,,,方法检测相关蛋白的变化,随着时间的增加,,,,(,,,,,中耐药蛋白,一糖蛋白和抑癌基因蛋白,,,的表达逐渐降低,同时,在高剂量下,凋亡标志蛋白,,,,出现切割。 研究表明:复方中药,,抑制耐药细胞,,,(,,,,,和,,,,,,增殖,对其没有交叉耐药性;,,,的抑制作用与阻断细胞,期,,,的合成,诱导细胞凋亡以及降低,(,,的表达有关。北京协和医学院硕上论文 中文摘要, ,,,,,,,细胞(,;)介导的全氟壬酸对大鼠肝脏免疫毒性的研究 近年来,,,,,的应用越来越广泛,自然界中野生动物及环境介质中检测到的,,,,含量也逐渐升高。对,,,,的研究较多的是肝脏毒性,生殖与发育毒性,而对,,,,的免疫毒性的研究相对较少。 ,,是肝血窦内的吞噬细胞,具有吞噬、分泌、参与免疫等功能。,,通过调节应激及代谢相关的酶积极参与肝细胞的解毒功能。本论文就是研究,,介导的,,,,对大鼠肝脏免疫毒性的机制。主要结论如下: 选择雄性,,大鼠作为研究对象,分别单独暴露,,,,组,以及同时暴露,,,,和,,抑制剂,,,,,(每隔两天注射一次),,天后,单独暴露组肝脏组织中炎性因子,,,,【、,,(,,的分泌量显著增加,而,,,,和,,,,,共同暴露组,,,,【、,,(,,的含量与对照组水平相当。同时,活体暴露后灌流法分离的,,中,,,,、,,(,,的基因表达水平也明显升高。此外,体外,,,,单独暴露,,后,,,,,【、,,(,,的分泌水平也显著性上升。 单独暴露,,,,及同时暴露,,,,和,,,,,后分离肝细胞,分析其基因表达情况。结果表明,在,,,,存在的条件下,,,的失活使得基因,,幔,的表达升高,,?下游基因,,,,,,,,,一,,,,,(,均出现相似的趋势。体外单独暴露,,,,以及,,,,分别和,,(,,、,,,,【共同暴露,结果表明单独暴露组基因,,,,,表达显著升高,其共同暴露组的表达却显
著性下降,表明,,是在,,,,的刺激下产生大量的,,(,,和,,,,,而,,(,,和,,,,,可以抑制,,,,,的表达。,,,仅与,,(,,的趋势相似,共培养的结果也证实了这一点。 转染含有,,,,,启动子的质粒,分别用,,,,【和,,(,,处理,结果显示处理组,,,,。;表达水平均下降,这说明,,,?和,,(, ,能在分子水平上抑制,,,,,【启动子的表达。转染,,(,(,质粒,分别用,,,,,,,,,,,,,,,,,【和,,(,,处理,结果表明,,,,【和,,(,,处理组的,,(,,表达显著性增加,表明,,在,,,, 的刺激下,产生,,(,,和,,,,,,,(,,和,,,,是通过刺激,,—,,通路的高表达来抑制,,,,,的表铮 庖还 滩?强浚校疲危帘旧淼囊种谱饔谩,茫危疲 牡难腔 穑叮岛停校校粒遥啊酒舳 庸沧 荆
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语 英文缩略语 英文缩写 英文全称 中文全称 ,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, 牛血清白蛋白 ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, 二甲基亚砜 ,,, ,,,,,,,;,, 多柔比星 ,,, ,,,,,,,,,,,,,, 二硫苏糖醇 ,,,,, ,,,,,,—,,,,(,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, 酶联免疫吸附试验 ,,,, ,,,, ;,,,,;,,,; ,,,,,,,, 流式细胞术分析 ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, 谷胱甘肽转移酶 ,,,, ,,,,,,,,,,,巧,,,;,,,,,,,,, 半数抑制浓度 ,, ,,,,,,,,,,, 白介素 ,, ,,,仃,, ;,, 枯否氏细胞 ,,, ,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,, 乳酸脱氢酶 ,,, ,,, ,,,,时,,,,,,,,,,, 低密度脂蛋白 ,,, ,,,, ,,,,,,,,;, ,,,,,, 肺耐药相关蛋白 ,,, ,,,,;,,,,, ,,,,,,,, 单克隆抗体 ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,;, 多药耐药性 ,,, ,,
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受到热切关注。 肿瘤细胞的多药耐药性是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物耐药的同时,对其它结构不同、作用方式不同的抗肿瘤药物也具有耐药性。,,,的生物学机制在于肿瘤细胞多次接触化疗药物后,诱导肿瘤细胞的膜结构发生改变,使药物不易进入细胞内;诱导肿瘤细胞的,,,,基因过度表达,该基因编码的蛋白质起着一种生物泵的作用,能将进入肿瘤细胞的化疗药物不断地泵出肿瘤细胞,这时只有提高药物浓度才有可能达到原来的疗效;诱导药物代谢酶的活性增加,使进入肿瘤细胞的药物失活;诱导能与药物特异性结合的蛋白质产生,阻止药物与靶作用部位结合。 其中最为主要的因素是位于细胞膜上,一糖蛋白(,—,,,;,,,,,,,,,,,,,)以及多药耐药相关蛋白(,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,)等蛋白的作用,它.