嗜肺军团菌血清10型致军团病爆发流行并分离培养成功

嗜肺军团菌血清10型致军团病爆发流行并分离培养成功 嗜肺军团菌血清10型致军团病爆发流行并 分离培养成功 武警医学1994年第5卷第6期3l5? 易D;e) 积血,切口难以愈合.故宜采取窦内软组织切 断松解仍放回原处,只缝合皮下组织和皮肤, 可收到同样的效果 4参考文献 i许报华.P}}骨赛综合征.中华外科杂志,i981tI;i67. 2毛宾尧主编.足外科.北京:人民卫生出腹社,1992.161 ,l82. 3Wi]LLamsPL.WarwickR.Gray'sAnatomy36thed. Churi'hiULivirystone,EdinburghLondoaMelbourne andNewYo,】980.493,495. 4河北新医大学主编凡体解剖学().北京:凡民卫生 出版社,1977.3924399 5郭世墟主编.临床骨科解剖学.天津科技出版杜,i989. 951,952. 6张发惠,睬振光,郑和平,等.带血管蒂跗骨瓣转位术的 应用解剖学.中华显散外科杂志?1993.16(4)288. (I993—12--14收稿,1994一踟一10撂回,贵鳙蔡义鸿) |)f,?f7嗜肺军团菌血清10型致军团病爆发 流行并分离培养成功 武警北京总队医院传染科j7' 建平万超群'(北京100027) 摘要1992年2,3月,北京市郊某宾馆发生了一起上呼吸道感染流行.流行病学调查及细菌学 检查证明,这是一起嗜肺军团菌血清10型(Lpl0)引起的宾馆军团病爆发流行,感染 率为24.3z'A(9/ 37),患病率为l3.5l(5/37).由Lpl0引起的军团病爆发流行在世界上属首次报道,而 Lpl0分离培养 10whichculeuredissuccessfuI DengChangyin,LannYihe,FangXtngsheng,YuChannxtn,ChertJlanplagand WanChaoquntDepartmentofInfectousDisease.BeijingMunicipalCorpsHospital, ChtnesePeople'sArmedPoliceForces. Abst嗽tAnoutbreakofupperrespiratoryinfectiontookplacei? ahotelinBeij[ngfromFebruary tOMarch1992.TheepidemiologlcaiinvestigationahdbacterologlcalexaminationShowedthatitwa3an outbreakoflegionnaire'sdiseasecausedbyLegionellaPneumophilaserogroupCO(LplO).Theinfeeti-.~e ratewas24.32(9/37)andtheincideIlCewas13.51(5/37).Thisisthefirstreport0nov,tbreakof 1eionnaire'sdiseasecausedbyLpl0intheworldandthefirstreportonsuceess~uecultureOfLpl0 ch菇a. 『tKeywordsLegionellapneumophilaserogrouplOLegionnairesdiseasePolymerase —Chainreaction(PCR) 1992年3月上甸,我科发现1倒军团菌 肺炎.为了解此病的发病原因和流行规律,我 们对疲源地(北京市郊某宾馆)进行了流行病 *中国璜骑医学科学院流行病学微生物学研究所 学调查.现将调查情况报告如下. 1材料与方法 1.1调查对象宾馆共有工作人员41名, 被调查者37名,采用统一格,逐个询问,进 邛长英等:嗜肺军团菌l0型致军团病爆发流行并分离培养成功 行回顾性调查. 1.2标本采集【1)血清:静脉采血5m1 分离血清后置于4C冰箱内待检.采用微量 凝集试验(MAT).测定血清Lpl0抗体滴 度?1:32者诊断为军团蘑感染.(2)水标 本:采取该宾馆养鱼池水,供暖锅炉水,暖气 管循环水,自来水,饮水锅炉房地面水各500 m1,进行分离培养. L3培养方法将所采集的水样,严格无菌 操作.用0.22m孔径的微孔滤膜过滤浓 缩,然后将滤膜上残余物用无菌蒸馏水lm1 冲洗,并加入】m1HC1一KCI缓冲液(1.2 mo]./乙的HcI3.9ml,0.2tool,L的KCI25 ml,用1moi/L的KOH调整pH至2.2), 震荡5min后.取0.1mI接种BCYE培养基 中,35C烛缸内培养3,7d,挑选可疑菌落进 行鉴定. 2结果 2.1一般情况该宾馆位于北京市郊,2月 初开始营业.宾馆暖气管内水温50"C一 60C,工作人员有用暖气管水洗衣,洗脚,洗 脸的习惯.宾馆餐厅中有一养鱼池,养有鳗 鱼.鲤鱼和黑鱼,池中有一个加氧用的喷水装 置.池中水泡翻滚,空气中可见气雾漂浮. 2.2宾馆工作人员血清Lpl0抗体滴度分 布及发病情况被调查的37名工作人员中, 有上呼吸道症状,血清抗体滴度?l:32,符 台军团病诊断者5例.患病率为13.51'无 明显症状抗体滴度?1:32诊断为隐性感 染者4倒.5例军团病患者中1倒为肺炎型, 其余4例为庞蒂亚克型,详见表1. 2.3军团病患者的职业分布5倒军团病 患者中4侧为餐饮部服务员,l例为厨师;提 示本次军团病爆发流行与餐饮部的工作环境 有关 2.4病原菌的分离培养及鉴定(1)培养特 ?烛缸培养 性:分离物在BCYE培养基上35 表1宾馆工作人员血清Lp]0抗体 滴度的水平分布(MAT) 血清稀释倍数' 1:21:41:81:161:321:64 1113137(3)"2(2) 2.7O2.70351335.1S18.92"5.40 注:1)括号内为军团苗病患者数 72h出现灰白色,表面光滑湿润边缘整 齐,直径在1,L5mm之间的菌落,用接种 环触之有粘稠感,有弹性,易挑取,革兰氏染 色阻性.着色不显,分离初期里细杆状,经 多次f睾代后,呈长发状.有时可见细菌连接或 缠绕在一起,姬姆萨染色菌体呈红色,背景为 绿色.在血平板和不含L一半胱氨酸的培养 基上,观察10d不生长.(2)生化性状:此菌 t 株有动力,氧化酶,触酶试验阳性,尿素酶试 验阴性,明腔酶阳性,能水解淀粉和马尿酸, 不发酵葡萄糖,乳糖和果糖,一内酰胺酶阳 性.(3)血清学检查:间接免疫荧光检查:将分 离菌制成10亿/ml的凝集抗原,包放玻片, t与兔抗Lolo血滑反应,洗涤唐再加异硫氰 酸荧光素(PITC)标记羊抗兔IgG抗体做间 接免疫荧光抗体染色,结果为强阳性(卅),与 Lp1,9,Lpll~14兔抗血清呈阴性.交叉吸 收试验:将用生理盐水1:20稀释的抗Lpl0 血清和患者血清各1m1分别加入此菌及 Lp!o菌(600亿/m1)37c放置4h,然 后冰箱过夜.5000rpm离心10rain,取上清 液作玻片凝集,结果见表2(4)动物试验:此 棣话菌0,l亿/ml接种豚鼠2只,次日体温 表2BJ92100菌株交叉凝集结果(玻片凝集) 武警压学1994年第5卷第6期 升高1C,2C,竖毛,行动迟缓食欲差,第 5d全部死亡.尸检:肺部明显充血.肝,脾, 肺,肾,腹腔液中再分离阴性.(5)嗜肺军团菌 PCR和DNA杂交:冻融法制备分离此菌染 色体DNA样品.PCR扩增,用1琼脂糖凝 胶检测扩增产物.并把扩增产物与P标记的 嗜肺军团菌特异性DNA探针杂交,结果为 阳性.附罔 /一 -?附图l.叶钟特抖生】),A增 1棱醢分子量参照物(PhageDNA/EeoRI+HindIII.21 5,1.4.9t4t2.3,5,2,0.1,0.1.5.1,3,0.98,0.83,0,125】 2嗜肺军团菌第10血清型标准株(Leiden一1)阳性对照 3鱼池水分离钩BJ92100 4未加模扳DNA的阳性对照 3讨论 军团病发现至今已l0余a,全球共发生 爆发流行50余起,7O%以上由Lp1引起, 多发生于宾馆,医院.我国共有3起报道. 分别由Lpl,Ip6,LM引起,与建筑工地[3], 学校?'],医院等集体单位有关.本次北京市郊 某宾馆由Lpl0引起军团病爆发流行在国际 上属首次报遭. 我国曾多次分离出军团菌,唐英春曾 从空调系统冷却水中分离出3株Lp6,李珍 大],陈亢JIl从肺炎病人中分离出Lp1菌 株,舒泉从病人气管灌洗液中分离出1株 Lp6菌株我们采用过滤浓缩酸处理法从北 京市郊某宾馆养鱼池水中分离出1株嗜肺军 团菌,通过细菌菌落形态,生化特性,血清 学D一,动物实验和PCR扩增及DNA杂交.证 实所分离的菌株为Lp10.国内首次分离培养 成功.定名为BJ92100菌.该分离菌与患者 恢复期血清凝集呈强阳性,提示此分离菌是 本次军团病爆发流行的病原菌 调查结果显示,5例军团病患者有4例 在餐厅工作(80),另l例为厨师.说明发病 与餐厅环境有关,尤其是与餐厅养鱼池上的 喷水加氧装置有关养鱼池水被军团菌污染. 可能由喷水加氧装置产生气雾,被餐厅服务 人员吸入而感染发病. 文献报道,军团菌搓分布于冉然界,抵 抗力很强,,旦污染水源,借助空气调节装置 (空调器,超声雾化器及加氧器等)汽化,气雾 被人吸入而发病.作者强调,对空气调节装置 要定期消毒],以阻断此病的传播. 4参考文献 l武建国主编.军团菌病.南京:求南大学出版杜I990. 44,63 2WashingtonCW,llenSD,WheatLJ.…1.Legion airesDisease{Historicalperspective.ClinicMierob[o] Revi:ew.1988.1(1):60 .等.北京市郊某建筑工地一起 3万超群,陈建平,贾力敏 米克戴德军团苗府爆发流行的和步调查.中华流行病学 杂志,1990,11(5);274. 4胡倍荣t孙文献.邱方,l等.唐山市某学院一起集体嗜 肺军团菌病爆发的流行病学调查.中华流行病学杂志, 1990.11(5):278. 5唐英春,黄鸷,廖适生.从空请系统母却塔水中分离出 军团病杆菌.中华流行病学杂志t1985.6(4):193. 6李珍太,烹4柬华,冯根宝,等.自肺毙病人分离出株嗜 肺性军团杆菌中华散生物学和免痤学杂志,1984,4 (,:101.. 7阵亢JIJ陈蓉琼,杜胜芳.等.自二例肺毙病^检出嗜肺 军团茸中华流行病学杂志.1986,7{1);38. 8VanZuctTL.MeenhorstPL,Le[jhPC,etal_Charac. teristlesofanti—Leg[ona[1aantibodiesinpatientsinject edwith]egiane[]apneamophilaserogroups1.6.10.J C1Microbiol,1988,26(11){船77 9PankhurstCL,Phi[pottHowardJN.HewittJH.eta】. Theefficacyofchlorinationandflirtationinthecontrol anderadicationof[eg[oneIIaI'romdenta[chairwater systems.JHospInfect,1990.16(1)9,18. (1994—05—15收稿,1994,07—11修回.责编蔡义鸿)