【doc】赤丹胶囊质量标准研究

【doc】赤丹胶囊质量研究 赤丹胶囊质量标准研究 ?534? ? 药物研究? 山西医药杂志2009年6月第38卷第6期上半月 Shan~MedJ,June2009,Vo1.38,No.6theFirst 赤丹胶囊质量标准研究 中国医科大学附属盛京医院(110004) 徐英宏李玉灵姜清华赵铁菅凌燕 赤丹胶囊是在赤丹丸(由赤芍,丹参,黄芩,茯苓,三棱 五味药材组成)研究基础上,经提取加工制成,具有清热解 毒,活血化瘀之功效,主治妇女慢性盆腔炎,附件炎.为控 制制剂质量,确保临床疗效,本文建立了胶囊中五味药材的 薄层色谱鉴别,并采用高效液相色谱法对胶囊中有效成分 芍药苷,丹参素钠,黄芩苷,黄芩素,汉黄芩索,汉黄芩苷,丹 参酮?A的含量进行测定,现报道如下. 1仪器与材料 Agi1ent一1100液相色谱仪(美国安捷伦公司,AgIL lent一1100系列四元泵,VWD检测器,AgilentChemstation 色谱工作站);CP225DSartorius天平(德国Sartorius公 司);AS10200B超声清洗机(天津奥德赛恩斯仪器有限公 司).赤丹胶囊(0.5mg/粒,自制,批号:20070103, 20070201,20070301),芍药苷(批号:0736—200118),丹参素 钠(批号:110855),黄芩苷(批号:0715-9909),黄芩素(批 号:l11595-200301)和丹参酮?A(批号:0766-9909)对照 品由中国药品生物制品检定所提供,汉黄芩素,汉黄芩苷由 沈阳药科大学药剂教研室提供.甲醇为色谱纯;水为重蒸 馏水;其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1薄层色谱鉴别 2.1.1丹参,三棱口]:取赤丹胶囊1O粒,倒出内容物,研 细,称取2.0g,加入甲醇约1OmL,超声30rain,放冷滤过, 作为供试品溶液.分别取丹参,三棱对照药材各0.5g,同 法制得丹参,三棱对照药材溶液.按处方比例称取除丹参 (三棱)外各药材,按工艺提取,同法分别制得丹参,三棱阴 性对照溶液.吸取上述溶液各5L,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以环己烷:乙酸乙酯(3:1)为展开剂,预饱和 15rain,展开,取出,晾干.供试品色谱中,在与丹参对照药 材相应的位置上显相同颜色(粉色)的斑点,且阴性液无干 扰.喷以1O硫酸乙醇溶液,105?烘i0min后,置紫外 灯(365rim)下检视,供试品色谱中,在与三棱对照药材相 应的位置上显相同颜色(亮绿色)荧光,且阴性液无干扰. 2.1.2赤芍[:取"2.1.1"项下供试液作为供试品溶液. 取赤芍对照药材0.5g,同法制得赤芍对照药材溶液.按处 方比例取除赤芍外各药材,按工艺提取,同法制得赤芍阴性 对照溶液.吸取上述溶液各5L,分别点于同一硅胶G薄 层板上.以氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸(40:5:15: 0.2)为展开剂,预饱和15rain,展开,取出,晾干,喷5香 草醛硫酸溶液.105?烘10min,日光灯下检视,供试品色 谱中,在与赤芍对照药材相应的位置上显相同颜色(紫色) 基金项目:辽宁省自然科学基金(20042189) 的斑点,且阴性液无干扰. 2.1.3茯苓[2]:取"2.i.1"项下供试液作为供试品溶液. 取茯苓对照药材2.0g,同法制得茯苓对照药材溶液.按处 方比例取除茯苓外各药材,按工艺提取,同法制得茯苓阴性 对照溶液.吸取上述溶液各5L,分别点于同一硅胶G薄 层板上.以氯仿;乙酸乙酯:甲酸(i0:1:0.2)为展开 剂,预饱和15rain,展开,取出,晾干,喷以1O硫酸乙醇溶 液,105?烘i0min,紫外灯(365rim)下检视,供试品色谱 中,在与茯苓对照药材相应的位置上显相同颜色的绿色斑 点,且阴性液无干扰. 2.1.4黄芩2]:取"2.1.1"项下供试液作为供试品溶液. 取黄芩对照药材0.5g,同法制得黄芩对照药材溶液.取 黄芩苷,黄芩素对照品,分别加甲醇制成每1mL含0.1mg 的溶液,作为黄芩苷,黄芩素对照品溶液.按处方比例取除 黄芩外各药材,按提取工艺,同法制得黄芩阴性对照溶液. 吸取上述溶液各5L,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲 苯:乙酸乙酯:甲醇:甲酸(10:3:2.5:2)为展开剂,预 饱和15min,展开,取出,晾干,喷以三氯化二铁乙醇溶液. 日光灯下检视,供试品色谱中,在与黄芩对照药材,黄芩苷, 黄芩素对照品色谱中相应的位置上显相同颜色的棕褐色斑 点,且阴性液无干扰. 2.2含量测定 2.2.1溶液的制备:?供试品溶液的制备:取本品1O粒, 倒出内容物,精密称取约0.5g,置于锥形瓶中,加入甲醇约 3OmL,超声处理30min,放冷,过滤到50mL量瓶中加甲 醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45m)滤过,取续滤液,即 得.?芍药苷对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的 芍药苷对照品1O.69mg,至25mL容量瓶中,加甲醇至刻 度,摇匀,制成浓度427.6ttg/mL.?赤芍阴性对照液的制 备:按处方比例,取除赤芍外各药材,按工艺制备阴性样品, 按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液.?6种成分对 照品溶液的制备:分别精密称取各对照品:丹参索钠32.7O mg,黄芩苷31.60mg,黄芩素2O.60mg,汉黄芩素25.1O mg,汉黄芩苷22.50mg和丹参酮?A10.07mg,置50mL 棕色量瓶中,加3OmL甲醇溶解,超声15rain,放冷,加甲 醇稀释至刻度,摇匀,制成浓度分别为丹参素钠654.0 "g/mL,黄芩苷632.0ttg/mL,黄芩素412.0ttg/mL,汉黄 芩素502.0g/mL,汉黄芩苷450.0~g/mL,丹参酮?A 201.40g/mL的6种对照品混合溶液.?丹参,黄芩阴性 对照溶液的制备:按处方比例,取除丹参,黄芩外各药材,按 工艺制备阴性样品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照 溶液. ?月!!!!:塑!!Fj堡 山西医药杂志2009年6月第38誊弟6 2.2.2芍药苷含量测定[3].?色谱条件与系统适应性试验t 色谱柱lZol~ucC18(250mm~4.6mm.5m)I流动相I甲醇一 水=35l65I检测波长t230rln~!流速l1.0mL/Injn,柱温t25 ?I进样量tlO.取芍药苷对照品(85.52g/n1L)脱尾因 子为1.048.理论塔板数为6168,分离度2.6l.?加样回收 率试验取已知含量的样品(批号20070103)5份,分别精密 加入芍药苷对照品溶液.依上述色谱条件测定,计算回收率. 测定结果见表1. 裹1回收率测定结果 2.2.3其他6种成分含量同时测定[3].?色谱条件与系统 适应性试验:色谱柱lZorbaxExtend-Cl8(250mm×4.6 TP-m,5m).流动相.A为甲醇,B为水(磷酸调pH=3.O). 梯度洗脱程序为:0,10min,A-B(40l60);10,15rain, A_B(60l40);15,35rain.A-B(80t20)}检测波长280 mI流速:1mL/min!柱温:25?.在上述色谱条件下,丹 参素钠,黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素,汉黄芩苷和丹参酮?A 保留时间分别为l6.1,21.0,24.5,28.2,12.6,50.1rain.与 各自相邻峰的分离度均>1.5.?干扰试验:分别取供试品 溶液,6种对照品混合液,丹参,黄芩阴性对照液,进样1O "L,按上述色谱条件检测,色谱图,结果阴性对照无于 ?535? 扰.?线性关系考察t精密量取对照品混合溶液0.25, 0.5,1.0,2.0.4.0,5.0mL置于1OmL容量瓶中.分别加人 甲醇定容至10mL,依次进样10L测定,记录色谱峰面 积.以峰面积对进样量进行线性回归r值均在0.999,1 之间.可见该方法在实验范围内线性关系良好.?精密度 试验:取一份对照品混合溶液重复进样5次.每次lOL, 记录色谱峰面积.丹参素钠,黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素,汉 黄芩苷和丹参酮?A的RSD分别为1.ooA.0.9.1.08oA, i.8,1.02.2.O%.?稳定性试验;取同一供试品溶液. 在配制后0.2,4,8,12.16h分别进样l0L.记录6种成分 的峰面积.丹参素钠,黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素,汉黄芩苷 和丹参酮?ARSD分别为1.5%,1.2%,1-I%,1.3oA, 1.O和2.3,结果表明供试品溶液在16h内稳定.?重 复性试验t取同一批号(20070103)赤丹胶囊.按上述制备方 法制备供试品溶液,进样1OL.记录峰面积.丹参素钠, 黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素,汉黄芩苷和丹参酮?ARSD分 别为2.1%,1.5%,2.0,2.2,2.1%和2.7.结果 表明该方法重复性良好.?加样回收率试验t精密称取已 知含量的样品(20070103)5份.分别精密加入定量的对照 品溶液.按样品方法测定.结果丹参素钠,黄芩苷,黄芩素, 汉黄芩素,汉黄芩苷,丹参酮?A平均加样回收率分别为 98.0,98.4%,100.4%,97.5%,99.9%,98.6%lRSD分 另?为i.7,6.60%,0.68%,1.5%,1.2oA.?样品测定t 取3批赤丹胶囊,按"2.2.1项制备供试品溶液,取对照品 溶液与供试品溶液.进样l0L,记录色谱峰面积,外标法 计算含量.结果见表2. 裹2样品测定结果 3讨论 3.1鉴别方法:用薄层色谱法分别鉴定了赤丹胶囊的5种 药材.其中丹参芍与三棱可用一种方法鉴别.省时省力.鉴 别方法斑点清晰,重现性好.专属性强.可作为该制剂的定 性鉴别方法. 3.2提取方法;丹参酮为非醌类化合物,见光受热不稳定, 所以供试品溶液制备未采用加热回流.而是采用超声萃取的 方法.并且在制备与测定过程中应注意避光,避免含量降低. 3.3含量指标:赤芍与丹参为君药.本研究选择二者的有效 成分芍药苷,丹参素钠,丹参酮IIA及黄芩中有效成分黄芩 苷,黄芩素,汉黄芩素,汉黄芩苷共7种化学成分作为含量测 定指标,与对中成药中1,2种成分的定量相比.更利于制剂 的质量控制,使其安全,有效. 3.4测定波长及流动相的选择:由于君药中有效成分芍药 苷同其他成分检测波长差异较大,所以对芍药苷含量进行 了单独测定.其他6种成分同时测定.赤丹胶囊为中药复 方制剂.方中干扰成分很多,且6种有效成分的化学性质差 异较大,曾选择不同比例的甲醇一0.1磷酸溶液,乙腈一 0.1磷酸溶液等流动相.但效果均不理想.本文采用不同 比例的甲醇与水梯度洗脱系统,能较好地将6种成分与胶 囊中其他成分分离,且能在相对短的时间内完成分析.比较 适合医院制剂快速检验的特点. 参考文献 I程世琼.张弘,徐愚聪.活骨颗粒质量标准的研究.华西药学杂 志,2001,16(1)I54—55. 2国家药典委员会.中国药典(I部).北京t化学工业出版社,2005. 3赵铁,李玉灵,阮国虎,等.HPLC法测定赤丹丸中芍药苷的 含量.中国药师,2007,10(4)l326?327. (收稿日期l2009-02-16) 作者简介:徐英宏,女.1961年5月生.副教授.中国医科大 学附属盛京医院,110004