高效液相色谱法测定强麻滴鼻剂中盐酸麻黄素和泼尼松龙的含量

高效液相色谱法测定强麻滴鼻剂中盐酸麻黄素和泼尼松龙的含量 高效液相色谱法测定强麻滴鼻剂中盐酸麻 黄素和泼尼松龙的含量 山西医药杂志2006年3月第35卷箜上鱼 至第69管),透析,浓缩冻干,可作下一步理化性质测定. 2.2.4各步回收率及活性的计算:见表1. 裹1纯化过程总结果 3讨论 本研究采用一步盐析加上二步柱层析从蚯蚓匀浆中纯 化了具有体外纤溶活性的蛋白,比活和纯度均获得极大的 提高.通过实验表明,在pH8.0的缓冲液中,盐析冻干产 物在阴离子交换柱上有较好的吸附,所以选择阴离子交换 剂进行分离.用QAE-SephadexA_50的层析图谱不如 DEAE-SephadexA-50的层析图谱分离效果好,其中图1的 A2,A3峰之间的差较小,lip--者分离度不佳,所以选择用 DEAESephadex一50作离子交换凝胶,洗脱时流速宜缓慢, 上样时,离子强度要低,这样蛋白更容易被吸附,然后再用 盐梯度进行洗脱,选用粗短柱子,根据样品中所含蛋白的量 决定柱床凝胶体积.也可用琼脂糖离子交换剂,但因价格 过高,所以用了5聚糖基体的离子交换剂.考虑单用一步 离子交换不能使目标蛋白获得高纯度,图1显示A3与A2 峰有交叉,所以又选用高分辨率的S一100径尽寸排阻层析 分离,其排阻极限为1×103,1×10,如图2所示,其B2峰 为活性峰,而B1与B3峰无活性.由于S-100分辩率较高, 所以初步认定B2较纯.可用SDS-PAGE或者删,I,进行 定性,同时测其分子量,等电点等理化性质,因时间关系,鉴 定部分有待日后完成.如果纯度不定的话,考虑再用疏水 层析进一步纯化.若能对纯化出的纤溶酶进行一级结构序 列测定,并反推其DNA结构,便可用基因工程方法生产大 量的纤溶酶激活剂.由于仪器及时间限制,纤溶酶原激活 剂的诸多理化性质未作鉴定,有待进一步研究. 参考文献 1Miharal-I,SumiH,YonefaT,eta1.Anovel,fibrinolyticenzymeex— traetesdfromtheearthwormLumbricusrubellus.SpnJ,1991,41: 461-472. 2路金华,金汝成,吴应文,等.钜齿运t81(Amynthasdancatala)纤 溶酶的分离纯化及其若干性质.生物化学杂志,1988,4(2): 166—172. 3周之聪,朱洪,陈运聪,等.赤子爱胜蚯蚓(Eiseniafoelida)纤维 酶的分离纯化,生物化学与生物物理,1988,200,35-40. 4D?gnyL,WeidenbachA,Hampton,W.Lmprovedfibrinplate methodforfibrinolyticactivitymeasttrtmaants;useofbentonitepre— cipitationandagarsolidification.ChinCbimActe,1975,60:85— 89. (收稿日期:2005—11.07) 作者简介:高敬伟,女,1973年7月生,药师,中国医科大学 第一附属医院,110o01 高效液相色谱法测定强麻滴鼻剂中 盐酸麻黄素和泼尼松龙的含量 武汉大学人民医~(430060)文为曾嵘 强麻滴鼻液是我院配制的由盐酸麻黄素,泼尼松龙等 组成的复方制剂.具有收缩血管的作用,用于鼻黏膜充血, 急性鼻炎,鼻窦炎和感冒引起的鼻塞等症的治疗.其所含 的两组分均可用高效液相色谱(I_玎PI.c)法测定含量.但同 时测定此水溶性和脂溶性的两组分含量未见报道.本实验 在对多种色谱系统进行筛选的基础上,建立同时分离测定 强麻滴鼻液中两组分含量的方法,可用于制剂的质量控制. 1仪器与试药 Agilent1100型高效液相色谱仪;DAD检测器;Agilent 色谱工作站(美国Agilent公司);盐酸麻黄素对照品和泼尼 松龙对照品(中国药品生物制品检定所);强麻滴鼻液(武汉 大学人民医院药学部制剂室);甲醇(色谱纯);其余试剂均 为分析纯,水为双蒸水. 2方法与结果 2.1色谱条件 AligentZORBAXSB-Cl8(4.6rlln×250aria,5tun);流 动相:甲醇一0.05mol/L,磷酸二氢钾溶液一0.2%三乙胺 (磷酸调pH值为3.7,梯度洗脱,时间0,15min.甲醇从 50%,75%,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液从50%,25%; 流速:1.0mL/min;检测波长:256nm). 2.2溶液的制备 2.2.1对照品的制备:精密称取盐酸麻黄素对照品和泼尼 松龙对照品适量,加甲醇制成18.4g/L和0.402g/L的溶 液,作为储备液.分别精密量取5mL,置于100mL量瓶 中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液. 2.2.2供试品的制备:精密量取供试品1mL,置10mL量 瓶中,加甲醇适量,超声10min使溶解,加流动相稀释至刻 度,摇匀,即得. 2.2.3空白溶液的制备:按处方比例制成不含盐酸麻黄素 和泼尼松龙组分的空白样品.并按"2.2.2"项下方法制成 空白溶液. 2.3系统适用性试验 分别取对照品溶液,供试品溶液和空白溶液各20L, 注入液相色谱仪.两组分的理论塔板数均>3000;各组分 之间的分离度均>2;空白液色谱图中与两被测组分相同的 保留时间处无其他杂质峰. 2.4线性关系考察 分别量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL,分置于10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀.取 20止进样分析.以对照品溶液的浓度C(roa/L)对峰面积 山西医药杂志2006年3月弟—35t~;3-11/IShanxiMedJ—,March2006,Vo135,No.3 A(mv-s)进行线性回归处理,得到回归方程分别为:盐酸麻 黄素:A=85.7826C一9.9134,r=0.9999.线性范围为: l8.4,1844g;泼尼松龙:A=1804.6650C+70.095,r= 0.9944.线性范围为:0.402--4.024g. 2.5精密度试验 取对照品溶液,重复测定5次,每次20,结果两被 测组分峰面积的相对差(RSD)分别为1.3%和1.1%. 2.6重复性试验 取同批样品5份,按2.2.2项下制备供试品溶液,重复 测定,两组分含量分别为(10.31?0.11)g/L和(0.28? 0.007)g/L.. 2.7稳定性试验 吸取2.2.2项下供试品溶液.分别在制备后0,4,8, l2,l6,20,24h进样20L,连续按色谱条件项下测定5次, 其峰面积的RSD为0.7%,表明24h内基本稳定. ? 271? 2.8样品测定 分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20L,注入高效 液相色谱仪,按色谱条件项下测定,按峰面积外标一点法计 算,结果见表1. 表1样品含量测定结果g/L 2.9回收率试验 取三批已知含量样品,精密量取1nlL样品,置l0nlL 量瓶中,分别定量加入盐酸麻黄碱和泼尼松龙对照品储备 液0.5nlL,然后加入甲醇至刻度,摇匀.分别吸取对照品 溶液和上述溶液各20L,注入高效液相色谱仪,按色谱条 件项下测定,按峰面积外标一点法计算,结果见表2. 表2加样回收率试验结果(n=3) 3讨论 3.1流动相的选择:根据文献[1—4]采用甲醇一0.1mol/L 醋酸铵溶液,甲醇一不同浓度的磷酸二氢钾溶液等体系为 流动相,采用醋酸铵溶液体系,虽然盐酸麻黄素峰出峰时间 适宜,且柱效高,但泼尼松龙和防腐剂羟苯乙酯的出峰时间 均延长,且吸收较弱.而采用磷酸二氢钾溶液体系,虽三者 均可分离,但峰形不好,且柱效较低,考虑到生物碱盐酸麻 黄素的色谱分离特征,通过添jj,--乙胺扫尾剂和磷酸调节 pH值,在pH3.4,6.0范围内,pH值偏大,盐酸麻黄素的 保留时间延长,峰形拖尾,理论塔板数偏低,而当pH值低 于3.4时,所有峰的保留时间均变短,各组分之间的分离度 达不到要求.经多次试验,调pH值为3.7为宜. 采用上述流动相体系,虽然可以测定供试品的被测组 分,但理论塔板数不理想(1O00,1500左右),且有部分杂 质干扰,灵敏度不高;采用本法进行梯度洗脱,可提高柱效, 排除干扰,缩短进样时间. 3.2测定波长的选择:在所选择的溶剂下,盐酸麻黄素和 泼尼松龙的最大吸收波长分别为256nlTI和240nlTI.虽然 本品中盐酸麻黄素和泼尼松龙的含量相差较大(40:1),但 盐酸麻黄素吸收强度较弱(百分吸收系数仅为l5左右). 为提高测定灵敏度,选择盐酸麻黄素的最大吸收峰位置 =256nlTI为测定波长. 参考文献 1张润婕,王亚南.贺吉川.RP一LC法同时测定氯地滴眼液中 氯霉素与地塞米松磷酸钠的含量.解放军药学,2002,l8 (3):160. 2张丽梅,王卓.徐慧欣,等.高效液相色谱法同时测定氯霉素地 塞米松滴眼两组分的含量.中国医院药学杂志.2002.22(6): 334, 3李小燕.高效液相色谱法测定氯麻滴鼻液中二组分含量.药物 分析杂志.2002.22(5):404. 4林洁.高效液相色谱法同时测定滴鼻剂中盐酸麻黄素和氢化可 的松的含量.中国医院药学杂志.2002.22(8):474. (收稿日期:2005—09—06) 作者简介:文为,女,1968年8月生,主管药师,武汉大学人 民医院.430060 离子对色谱法测定复方曲安奈德乳膏中曲安奈德的含量 郧阳医学院附属太和医院(442000) 田华陈芳李白荣刘春霞 复方曲安奈德乳膏是本院研制的新制剂,具有抗炎,抗速,准确,为控制该制剂质量的有效方法. 过敏,收敛止痒的作用,主要用于治疗亚急性和慢性皮炎等1仪器与试药 皮肤科疾病,其中曲安奈德是方中主要有效成分之一.本曲安奈德对照品(中国药品生物制品检定所);复方曲 研究采用离子对色谱法对其进行分离测定,该法简便,快安奈德乳膏(自制,批号:050710,050812,05o915);甲醇为