2014 细胞生物学实验第一次实验课内容(细胞膜的通透性,巨噬细胞吞噬作用的观察)

2014 细胞生物学实验第一次实验课内容(细胞膜的通透性,巨噬细胞吞噬作用的观察) 实验一 细胞膜的通透性 【实验目的】 了解物质分子质量、脂溶性、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。 【实验原理】 细胞膜在不断变化的环境中，必须保持自身的稳恒状态，才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。水分子可以自由通过细胞膜，当细胞处于低渗液环境时，水分子大量渗入到细胞内，使细胞膨胀，进而破裂，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这就是溶血现象。溶血现象可作为测量物质进人血红细胞速度的一种指标。 红细胞置于乙二醇、丙三醇(甘油)、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，乙二醇等分子进入血红细胞，使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加，继而导致水的摄入，细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子质量大小有关。分子质量大的进入细胞慢，发生溶血所需的时间也长。 非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度甚小。碳链越长，脂溶性越大。一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比，称为分配系数。 各种非电解质溶液，只要单位体积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。电解质溶液，如氯化钠与葡萄糖分子数相等时，氯化钠产生的渗透压要大得多。具有相同渗透压的某非电解质溶液与某电解质溶液浓度之比，称为等渗系数，用i来示。 i=葡萄糖的等渗摩尔浓度/氯化钠的等渗摩尔浓度 发生溶血者为低渗液，所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗摩尔浓度。 【实验仪器、和试剂】 (1) 仪器、用具:小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射器、秒表。 (2) 材料:含适量肝素的鸡血。 (3) 试剂:l mol/L乙二醇水溶液，l mol/L丙三醇水溶液，l mol/L 葡萄糖水溶液，3 mol/L甲醇，3 mol/L乙醇，3 mol/L 丙醇，1/8 mol/L、1/9 mol/L、1/10 mol/L、1/12 mol/L、1/14 mol/L葡萄糖溶液， 1/12 mol/L、1/13 mol/L、1/14 mol/L、1/16 mol/L、1/18 mol/L氯化钠溶液。 【方法与步骤】 1. 分子质量大小对细胞膜通透性的影响 (1)在编号的3支试管中，分别用吸管吸入2ml lmol/L乙二醇、lmol/L丙三醇，lmol/L葡萄糖高渗液。 (2)先后分别滴加两滴血液，用手指按住管口，倒置1次。 (3)观察溶血时间，最长延至lOmin。 (4)将实验结果列入如下所示的表格中。 溶液 相对分子质量 溶血时间 1mol/L乙二醇 62 1mol/L丙三醇 92 1mol/L葡萄糖 180 2. 脂溶性大小对细胞膜透性的影响 (1) 编号的3支试管分别加入2m1 3mol/L的甲醇、乙醇、丙醇溶液。 (2) 分别先后加入两滴血液，按住管口倒置1次。 (3) 观察溶血时间。 (4) 将实验结果记入如下所示的表格中。 溶液 相对分子质量 分配系数 溶血时间 3mol/L甲醇 32.04 0.0097 3mol/L乙醇 46.07 0.0357 3mol/L丙醇 58.0 O.156 3. 电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响 (1) 将试管编号，注明溶质名称及摩尔浓度。 (2) 按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml。 (3) 每管各加入两滴血液，按住管口，倒置一次。 (4) 室温放置15min, 观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度。 (5) 按下表记录实验结果。 (6) 计算等渗摩尔系数。 摩尔浓度 溶液 1/8 M 1/9 M 1/10 M 1/12 M 1/13 M 1/14 M 1/16 M 1/18 M 葡萄糖 NaCl 试管内液体分两层:上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血，镜检红细胞完好; 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称为不完全溶血，镜检有部分红细胞呈碎片状; 如果试管内液体变红而透明者，称为完全溶血，镜检发现细胞全部呈碎片状。 【讨论】 实验中溶血现象发生的机制是什么,对实验中观察到的现象给出合理的解释。 实验二 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验 【目的要求】 1. 掌握细胞吞噬的实验方法。 2. 了解细胞吞噬实验的研究意义。 【实验原理】 吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百分率和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。 【实验用品】 1. 器材:显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、吸管等。 2. 试剂 (1)0.85% 生理盐水; (2)阿氏(Alsever)血细胞保存液:柠檬酸钠0.89g、柠檬酸0.05g、葡萄糖2.05g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml, 溶解后用滤纸过滤，分装，8-10磅灭菌20min，置冰箱保存。 (3) 4%台盼蓝染液(用生理盐水配制)。 (4) 6%淀粉肉汤:牛肉膏0.3g、蛋白胨1.0g、氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，解热后，加入可溶性淀粉6.0g，促使溶解，再煮沸灭菌，置4?冰箱保存。使用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混匀，使呈蓝色。 3. 材料 (1) 小白鼠 (2) 1% 鸡红细胞悬液 自鸡翼下静脉取血 1ml，注入含灭菌阿氏液4ml的瓶中，混匀置于冰箱保存备用。使用时用生理盐水洗涤，离心，倾去上清，如此反复洗涤3次，最后用生理盐水配制成1%的鸡红细胞悬液。 【方法与步骤】 1. 激活腹腔巨噬细胞:实验前1-3天，每天给小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤(含台盼蓝)1 ml。 2. 注射鸡红细胞悬液:给每只注射过淀粉肉汤的小鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，轻按小鼠腹部，使悬液分散; 3. 收集腹腔液，镜检:注射鸡红细胞30min后，用颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，用吸管吸取腹腔液，滴1滴于载玻片上，加盖玻片后，即可观察。 观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较多、体积较大、圆形或不规则的细胞，其表面有许多 伪足)，胞质中有数量不等蓝色颗粒的(为吞入的含台盼蓝淀粉肉汤形似毛刺状的小突起( 成的吞噬泡)即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞(1至多个)紧贴于巨噬细胞的表面;有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入;有的巨噬细胞已吞入1 个或几个红细胞，在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡;有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。 4. 计算吞噬百分数和吞噬指数: 吞噬百分数=(100个巨噬细胞中吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞数/100)×100% 吞噬指数=100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100 【讨论】 1. 绘图在高倍镜下所观察到的处于不同吞噬阶段的巨噬细胞(包括鸡红细胞黏附于巨噬细胞表面、鸡红细胞被吞入、形成吞噬泡和吞噬泡已开始被消化分解等)，以示吞噬作用的全过程。 2. 统计其吞噬百分数和吞噬指数，分析吞噬的免疫保护作用。 文 - 汉语汉字 编辑词条 文，wen，从玄从爻。天地万物的信息产生出来的现象、纹路、轨迹，描绘出了阴阳二气在事物中的运行轨迹和原理。 故文即为符。上古之时，符文一体。 古者伏羲氏之王天下也，始画八卦，造书契，以代结绳(爻)之政，由是文籍生焉。--《尚书序》 依类象形，故谓之文。其后形声相益，即谓之字。--《说文》序》 仓颉造书，形立谓之文，声具谓之字。--《古今通论》 (1) 象形。甲骨文此字象纹理纵横交错形。"文"是汉字的一个部首。本义:花纹;纹理。 (2) 同本义 [figure;veins] 文，英语念为:text、article等，从字面意思上就可以理解为文章、文字，与古今中外的各个文学著作中出现的各种文字字形密不可分。古有甲骨文、金文、小篆等，今有宋体、楷体等，都在这一方面突出了"文"的重要性。古今中外，人们对于"文"都有自己不同的认知，从大的方面来讲，它可以用于表示一个民族的文化历史，从小的方面来说它可用于用于表示单独的一个"文"字，可用于表示一段话，也可用于人物的姓氏。 折叠编辑本段基本字义 1(事物错综所造成的纹理或形象:灿若,锦。 2.刺画花纹:,身。 3(记录语言的符号:,字。,盲。以,害辞。 4(用文字记下来以及与之有关的:,凭。,艺。,体。,典。,苑。,献(指有历史价值和参考价值的图书资料)。,采(a(文辞、文艺方面的才华;b(错杂艳丽的色彩)。 5(人类劳动成果的总结:,化。,物。 6(自然界的某些现象:天,。水,。 7(旧时指礼节仪式:虚,。繁,缛节(过多的礼节仪式)。 8(文华辞采，与“质”、“情”相对:,质彬彬。 9(温和:,火。,静。,雅。 10(指非军事的:,职。,治武功(指礼乐教化和军事功绩)。 11(指以古汉语为基础的书面语:552,言。,白间杂。 12(专指社会科学:,科。 13(掩饰:,过饰非。 14(量词，指旧时小铜钱:一,不名。 15(姓。 16( 皇帝谥号，经纬天地曰文;道德博闻曰文;慈惠爱民曰文;愍民惠礼曰文;赐民爵位曰文;勤学好问曰文;博闻多见曰文;忠信接礼曰文;能定典礼曰文;经邦定誉曰文;敏而好学曰文;施而中礼曰文;修德来远曰文;刚柔相济曰文;修治班制曰文;德美才秀曰文;万邦为宪、帝德运广曰文;坚强不暴曰文;徽柔懿恭曰文;圣谟丕显曰文;化成天下曰文;纯穆不已曰文;克嗣徽音曰文;敬直慈惠曰文;与贤同升曰文;绍修圣绪曰文;声教四讫曰文。如汉文帝。 折叠编辑本段字源字形 字源演变与字形比较 折叠编辑本段详细字义 〈名〉 1(右图是 “文”字的甲骨文图片，资料来源:徐无闻主编:《甲金篆隶大字典》，四川辞书出版社。1991年7月第一版。 “文”字的甲骨文字绘画的像一个正面的“大人”，寓意“大象有形”、“象形”;特别放大了胸部，并在胸部画了“心”，含义是“外界客体在心里面的整体影像、整体写真、整体素描、整体速写”。 许慎《说文解字》把“文”解释为“错画也”，意思是“对事物形象进行整体素描，笔画交错，相联相络，不可解构”，这与他说的独体为文、合体为字的话的意思是一致的。“说文解字”这个书名就表示了“文”只能“说”，而“字”则可“解”的意思。“文”是客观事物外在形象的速写，是人类进一步了解事物内在性质的基础，所以它是“字”的父母，“字”是“文”的孩子。“文”生“字”举例(以“哲”为例):先对人手摩画，其文为“手”;又对斧子摩画，其文为“斤”。以手、斤为父母，结合、生子，其子就是“折”(手和斤各代表父母的基因)。这个“折”就是许慎所谓的“字”。“字”从宀从子，“宀”表示“独立的房子”，子在其中，有“自立门户”的意思。故“字”还能与“文”或其他“字”结合，生出新“字”来。在本例，作为字的“折”与作为文的“口”结合，就生出了新的字“哲”。 2( 同本义 [figure;veins] 文，错画也。象交文。今字作纹。——东汉?许慎《说文》 ——春秋?左丘明《左传?昭公二十五年》。注:“青与赤谓之文，赤与白谓五章以奉五色。 之章，白与黑谓之黼，黑与青谓之黻。” 美于黼黼文章。——《荀子?非相》 茵席雕文。——《韩非子?十过》 织文鸟章，白旆央央。——《诗?小雅?六月》 斑文小鱼。——明? 刘基《诚意伯刘文成公文集》 3(又如:文驾(彩车);文斑(杂色的斑纹);文旆(有文彩的旗帜);文绣(绣有彩色花纹的丝织品;刺花图案);文织(有彩色花纹的丝织品);文鳞(鱼鳞形花纹)。 (字，文字(“文”，在先秦时期就有文字的意思，“字”，到了秦朝才有此意。分别讲，“文”4 指独体字;“字”指合体字。笼统地说，都泛指文字。) [character] 饰以篆文。——南朝宋?范晔《后汉书?张衡传》 分文析字。——东汉?班固《汉书?刘歆传》 夫文，止戈为武。——《左传?宣公十二年》 距洞数百步，有碑仆道，其文漫灭。——王安石《游褒禅山记》 文曰“天启壬戌秋日”。——明? 魏学洢《核舟记》 文曰“初平山尺”。 5(又如:甲骨文;金文;汉文;英文;文迹(文字所记载的事迹);文书爻(有关文字、文凭之类的卦象);文异(文字相异);文轨(文字和车轨);文狱(文字狱);文钱(钱。因钱有文字，故称);文状(字据，军令状);文引(通行证;路凭);文定(定婚)。 6(文章(遣造的词句叫做“文”，结构段落叫做 “章”。) [literary composition] 故说诗者不以文害辞。——《孟子?万章上》 好古文。——唐? 韩愈《师说》 属予作文以记之。——宋? 范仲淹《岳阳楼记》 能述以文。——宋? 欧阳修《醉翁亭记》 摘其诗文。——清? 纪昀《阅微草堂笔记》 7(又如:文价(文章的声誉);文魔(书呆子);文会(旧时读书人为了准备应试，在一起写文章、互相观摩的集会);文移(旧时官府文书的代称);文雄(擅长写文章的大作家);文意(文章的旨趣);文义(文章的义理);文情(文章的词句和情思);本文(所指的这篇文章);作文(写文章;学习练习所写的文章);文魁(文章魁首);文价(文章的声价);文什(文章与诗篇)。 8(美德;文德 [virtue] 圣云继之神，神乃用文治。——杜牧《感怀诗一首》 9(又如:文丈(对才高德韶的老者的敬称);文母(文德之母);文武(文德与武功);文命(文德教命);文惠(文德恩惠);文德(写文章的道德);文薄(谓文德浅薄);文昭(文德昭著)。 10.文才;才华。亦谓有文才，有才华 [literary talent] 而文采不表于后世也。——汉? 司马迁《报任安书》 11(又如:文业(才学);文英(文才出众的人);文采风流(横溢的才华与潇洒的风度);文郎(有才华的青少年);文彦(有文才德行的人);文通残锦(比喻剩下不多的才华)。 12(文献，经典;韵文 [document;classics;verse] 儒以文乱法。——《韩非子?五蠹》 言必遵修旧文而不穿凿。——《说文解字?叙》 13(辞词句。亦指文字记载 [writings;record]。如:文几(旧时书信中开头常用的套语。意为将书信呈献于几前);文倒(文句颠倒);文过其实(文辞浮夸，不切实际);文义(文辞);文辞(言词动听的辞令);文绣(辞藻华丽)。 14(自然界的某些现象 [natural phenomenon] 经纬天地曰文。——《左传?昭公二十八年》 15(又如:天文;地文;水文;文象(日月星辰变化的迹象);文曜(指日月星辰;文星);文昌(星座名)。 16(文治;文事;文职。与“武”相对。 [achievements in culture and education;civilian post] 文能取胜。——《史记?平原君虞卿列传》 文不能取胜。 文武并用。——唐? 魏征《谏太宗十思疏》 精神折冲于千里，文武为宪于万邦。――明《袁可立晋秩兵部右侍郎诰》 17(又如:文臣，文吏(文职官吏);文席(教书先生的几席);文品(文官的品阶);文帅(文职官员出任或兼领统帅);文烈(文治显赫);文员(文职吏员);文阶(文职官阶);文道(文治之道);文业(文事);文僚(文职官吏)。 18(法令条文 [articles of decree] 而刀笔吏专深文巧诋，陷人于罪。——《史记?汲黯列传》 19(又如:文劾(根据律令弹劾);文法吏(通晓法令、执法严峻的官吏);文丈(规矩;);文移(官府文书);文牓(布告;文告);文宪(礼法;法制)。 20(文言。古代散文文体之一;别于白话的古汉语书面语 [literary language]。如:半文半白;文语;文白(文言文和白话文)。 21(文教;礼节仪式 [rites] 则修文德。——《论语?季氏》 22(又如:文丈(崇尚礼文仪节);文俗(拘守礼法而安于习俗);文致(指礼乐);文貌(礼文仪节);文绪(文教礼乐之事);文仪(礼节仪式) 23(指表现形式;外表 [form;appearance]。如:文服(表面服从);文榜(告示、布告之类);文诰(诰令) 24(指鼓乐，泛指曲调 [music;tune]。如:文曲(指乐曲);文始(舞乐名) 25(谥号，谥法:勤学好问叫文 [study deligently] 何以谓之文。——《论语》 是以谓之文。 26(姓 〈动〉 1(在肌肤上刺画花纹或图案 [tatto (the skin)] 被发文身。——《礼记?王制》。注:“谓其肌，以丹青涅之。” 文绣有恒。——《礼记?月令》 2(又如:文笔匠(在人身上刺花的艺人);文身断发(古代荆楚、南越一带的习俗。身刺花纹，截短头发，以为可避水中蛟龙的伤害。后常以指落后地区的民俗);文木(刻镂以文采之木) 3(修饰;文饰 [cover up] 身将隐，焉用文之?——《左传?僖公二十三年》 饰邪说，文奸言，以枭乱天下。——《荀子?非十二子》 4(又如:文过饰非;文致(粉饰;掩饰);文冢(埋葬文稿之处) 5(装饰 [decorate] 舍其文轩。——《墨子?公输》 此犹文奸。 文车二驷。——明? 归有光《项脊轩志》 文马四百匹。——《史记?宋世家》 若将比予文木邪。——《庄子?人间世》 6(又如:文巧(文饰巧辩);文竿(以翠羽为饰之竿);文舫(装饰华丽的游艇);文饰(彩饰);文榭(饰以彩画的台榭);文舟，文艘(装饰华丽的船);文剑(装饰华丽的剑);文舆(饰以彩绘的车) 7(撰写文章 [write]。如:文匠(写文章的大家);文祸(因写文章而招来的灾祸);文雄，文杰(指文豪) 〈形〉 1(有文采，华丽。与“质”或“野”相对 [magnificent;gorgeous] 其旨远，其辞文。——《易?系辞下》 晋公子广而俭，文而有礼。——《左传?僖公二十三年》 2(又如:文巧(华丽奇巧);文朴(文华与质朴);文服(华美的衣服);文砌(华美的石阶);文 背(不文雅，粗俗);文轩(华美的车子);文质(文华与质朴) 3.柔和，不猛烈 [mild;gentle]。如:文烈(指火候温猛) 4(美，善 [fine;good]。如:文徽(华美);文鸳(即鸳鸯。以其羽毛华美，故称);文衣(华美 的服装) 5(通“紊”。紊乱的 [disordered] 惇宗将礼，称秩元祀，咸秩无文。——《书?洛诰》 天子祭天下名山大川，怀柔百神，咸秩无文。——《汉书?郊祀志上》 王者报功，以次秩之，无有文也。——庆劭《风俗通义?山泽》 〈量〉 1(用于旧时的铜钱。如:一文钱 2(用于计算纺织物 五扶为一首，五首成一文。——《后汉书》