血清HBsAg与抗—HBs同时阳性之HBV标志物分析

血清HBsAg与抗—HBs同时阳性之HBV标志物 血清HBsAg与抗—HBs同时阳性之HBV标 志物分析 454 【监测】 [文章编号)it~04--S6S5(2001)—0}54—02 中国卫生检验杂志2001年8月第11卷弟4期0Ihlme如耵1日l14~th 血清HBsAg与抗一HBs同时阳性之HBV标志物分析 刘海燕,覃巍巍,雷时美,泰剑秋 (南宁市卫生防疫站,广西530011) [中圈分类号]1151262[文献标识码]B 我国是乙型肝炎感染的高发区,病毒在亿万人群中传播乙 肝(HB)疫苗的广泛应用,被动接受乙肝免疫球蛋白(HBIG),加 强了病毒的免疫压力.另外,随着干扰素和棱苷娄抗病毒药 物的不断发展应用,耐药突变株也不断出现博位,免疫压力针 对一些病毒表位.包括可引起中和性应答的表位.病毒不断 变异以逃避宿主的免疫清除.在经常改变的病毒群体中,逐 渐选择出可继续复制的变异株变异毒株能复制,其传染性 对宿主的中和免疫不再易感,成为免疫逃避变异株….在临 床医学实践中,^们对iqBV感染的常规典型模式二对半及其 变化规律已有一定认识.变异株的出现,使得传统意义上对 HBV感染后通过以检测血清HBV基因产物(}ms,HbeAS)和 ^体对这些基因产物应答(抗一HBs,抗HBc,抗一HBe)来确定 感染状态的认识产生了一定的变化.本文应用ELISA检测技 术,在血清HM用性标本中收集到78倒抗一l-lBs同时用蛙 的标本,其HBV血清标志物显示出五种不同的组合模式.对 这些不同组合模式加以分析,使我们对HBV感染的预防控制, 诊断治疗,疫苗的开发应用和献血员的筛选在传统认识的基 础上有必要给予重新分析评价 1材料和方法 11标本采源收集1994年1月至20OO年8月本站从业人 员体检及门诊病人(其中包括已确诊为乙型肝炎的患者和无 症状HB'V感染者)血清标本HBs.~g,抗一HBs同时阳性者共78 份. 12方法慨,HBeAg,抗一}ms的{壹测用EUSA法,所用 试剂均来自上海科华实业公司,严格按照试剂操作.以 Ec一3l1型酶标仪(美国产)于波长45Ohm测定OD值,}ms, ttBeAg,抗一FIBs的结果根据以样品OD/阴性对照平均OD值 ?2.1为阳性,抗一HBe及抗一HBc结果根据样品OD值(0 105为阳性. 2结果与讨论 21血清}?&Ag,抗一HBs同时阳性的78份标本HBV标志物 检测结果,见表1. 表178份血清}Ias~,抗一HBs同时阳性HBV标志物模式 22一般认为抗一HBs是HBsAg刺激机体后产生的一种保护 性抗体,是HBV感染后呈现免疫力的标志.抗一HBs与HB&Ag 理论上不可能同时检出.但}?v是高度易变的,因其在复制 过程中需经RNA中间体的逆转录过程,RNA聚合酶和逆转录 酶缺乏校正功能;同时}?V的开放读架有重叠.同一核苷酸的 错误,可使不同编码蛋白变异.这种变异可发生在自然慢性 感染或其它免疫压力下,如接种乙肝疫苗,被动接受乙肝免疫 球蛋白和抗ttBV化学药物治疗等.一些重要的变异可引起病 毒生物学特性和发病机制改变. 23在抗一}ms与HBsAg同时阳性血清HBV的5种组台中. 以I组比俩最高(50%).目前认为f乙肝疫苗诱导的HBV变 异株,HBVS区"'决定簇126位苏氨酸被丝,异亮氨酸取代, 141位赖氮酸被谷氨酸取代,145位甘氨酸被精氨酸所取代. 输人的HBIG或HB疫苗产生的抗一HBs缺乏对变异毒株的中 和特异性,使变异株不能被抗一HBs所中和.但这种抗体可被 常规试剂捡出因而在正常抗体应昝情况下,变异毒撩仍艟 复制,疫苗产生的抗体可不干扰变异株HBsAE.两者同时在同 一 个体内存在. 有报导干扰索治疗后的慢性乙型肝炎患者一,干抗素诱 导出现前S.缺失株,同时出现相应的抗一HBs,但病毒血症仍 以原型毒株占优势,变异型的抗一HBs不能中和原型株的HB. sag二者并存. 有资料表明一HB是,个新的嗜肝病毒,}msA异一DNA 序列与}毋V有同源性.故可橙出HBsAg.但自动或被动获得 的抗一Hlts不能预胁HB感染. HBs有一个免疫优势表位a,对Fit决定簇的抗体可对所 有亚型的HBV感染提供保护性免疫.但其它亚型抗体并无交 叉保护性….因此对于不同亚型的再次感染,亦可出现抗一 HBs与HBsAg同时阳性. HBV慢性持续性感染时,病毒长期处于细胞毒的免疫压 力下,可能在体液或细胞免疫表位区发生变异_l一.变异株逐 渐累积,使病^血苑中的各毒株的按苷酸序列互有差异.同 一 个体同时存在原型毒抹和不同的变异毒株的群体.当某一 变异毒株比原型毒株在某种条件下具有选择优势时,最终发 展为稳定的感染毒株.此时原型株的抗一HBs与变异株的 I-IBsAg同时存在.因此,在"a"决定簇发生氨基酸替代,前S 缺失,HBv2,不同亚型的再次感染以及慢性乙型肝炎患者均可 导致l组模式出现. 2,4从附表看出,?,?,?及V等四中组台中?,?,?所占 此例分别为11.5%,218%,128%,除}?k外均以抗体为表 现形式.而抗一Hlte,抗一}{Bc的出现,除了前c区的点突变 导致}?不能表达而仍能合成,患者体内存在不能分泌 HBeAg的缺骼型HBV外JJ,,般认为是乙型肝炎的急性期趋 中国_『J生拉驻杂志20(31年8月第【I卷第4期.Iir瑚JoumalH阻 lIlILs~nka)1h2001^幔[1]1?.4 [文章缩号]10(M--R6g5(2001)删—ol5—皿 食用掺假猪油gI起食物中毒的质谱联机分析 林佶,昊春山 (云南省卫生防疫站检验中心昆明650032) [中田分类号】R155.58[文截标识码JB 我省昆明,个旧等地发生食用猪油中毒事件,受害者食用 了在市场上购买的猪油后,出现头晕,恶心,呕吐,腹泻等症 状,中毒者家属把剩余猪油送检验中心拉验.我们用质谱联 机(GC~MS)对中毒油样品进行了分析,确定了引起猪油中毒成 分是cI7一c的烷烃化台物.目前分析此类物质常用的方法 有化学法,气相色谱法.化学法不太准确,气相色谱法需要标 准品才能准确定性.而GC~MS不需品,通过谱库检索准 确定性,这对中毒成分快速准确的测定有很大的优势. 】材料与方法 1.1仪器和试剂FinniganTraceGC/MS色质联机,正已烷,乙 醇,氢氧化钾,分液漏斗,氨气,蒸滴水. 1.2样品处理精确称取1.CO0g中毒猪油样品,一式两份, 置于锥形瓶中,加入lml氢氧化钾溶液(3:2)及25乙醇,连 空气玲凝管回流皂化5min,后加25IId沸水,摇匀.移人分液赫 斗,加入20ral正已烷,振摇lmdn,弃去水层,再加30ml蒸滴水 振摇lmJn,弃去水层,重复两次.把正已烷移^蒸发皿挥干正 已烷,干燥称重后,定容至lml.待测. 13仪器蒂件Trace2OO0气相色谱仪条件色谱柱15mx 02.5nmRtx一5石英毛细拄.柱温采用程序升温100一l血n, 30?/miI广一28o?10mln.进样口温度260?,不分流进样.载 气流量lml/min高纯氮气恒流模式. Trae~MS质谱仪条件离子源?+离子源温度220?,传 输线温度280?,检测器电压350V,发射电流150~,k.数据采集 4.55 【监测报告】 方式,全扫描方式,采集范围10(3,550ainu溶剂延时3Omin. 2结果与讨论 2】处理好的样品,不分漉进样方式,进样1,ul,总离子流图见 图1,质谱图见图2.各成分分离较好,利用Ms定性各种成 份,井用Xcatiixu"软件进行砥积归一化处理,各成分名称,峰面 积百分台量及保留时问结果见附表.从表中可以看出c Cc?,1,c5种烷烃化合物占总面积68.92%.GC/MS测 定中毒猪油样品比化学法和气相色谱法更精确,它可以对所 钡慷的样品成分进行谱库拉索.准确的给出检出成分的分子 式,结构式,分子量等.而化学法是通过油酯皂化的原理来判 断是否吉不皂化的烷烃成分,不能给出明确的中毒成分的结 构式,分子量等信息,只能给出一些粗略的信息.随着拉验技 术水平的不断提高要求检验工作者得到明确肯定的结果. 图I中毒猪油样品的总离子流图 向恢复期,HBV复制减少但仍具有传染性,慢性乙型肝炎,HBV 携带者.而抗一HBs的并存除了上述综合因素外,临床上患者 亦出现明显的肝功能损害,并与该类病_^肝病慢性化有关J 而模式v所占比倒最小,仅为3.9%(3/78).此模式有_^认为 其为错误组台,可艟是操作或试剂原因造成的错误.应慎重解 释临床类型j但是否亦为变异株感染所致,有待进一步研 究证实. 25血清HB~标志物的一些不典型表现多与病毒变异有关 (排出试剂和技术因索影响)[71.HBV在感染者体内是群体存 在的,在感染过程中原型毒株与变异毒株,变异毒株的各个成 员间的比倒是有变动的.抗一HIk与HBsAg井存皿所出现 的不同组合,虽然可从分子生物学角度给予解释,但临床上常 规使用的乙肝两对半的临床解释和应用更加复杂化.因此己 肝的预防控制措施,献血员的筛选标准,HB疫苗效果的评价 以及疾病的预后判断不应单纯选择其中某一项或某几项指标 作为衡量标准,需结台临床表现,综台实验结果全面分析.必 要时可采用PCR法直接检铡HBVDNA. 参考文献 1骆抗先,路着乙型肝炎一基础与临床第1版北京:^民卫生出版 社.I997.5:姻一53. 2FiordalJsiCGhicttoF.C~te[naovoFet.alv'sisofthehepatitisB tints目即andir~nurJeresponseinHRsAg-an【I—HBsp瑚tIchronic t[J_J.H~p,aol1994,2O(4)}4s7 3赵世祯,赳慧玲,赵翠林.等HBv2血清模式回颐两查.临床肝胆病 杂志.1992,8(4J:188. 4刘悔燕HllsAg阳性血清HBV标志物模式分析期北民旌学院 医学版.2O0O.17(I):23—24 5章劫窭.耿民新.慢性乙型肝病患者血清抗一HBs阳性临床意义再 评竹南迎医学院,1999,I9(2):I8I—I82 6马粤健.束星宇陈蒙骐.等乙型肝炎病毒血清标车模式与分析海 南医学,I996,4:232. 1段华容.胡作为,盛国光Huv堪染非典型血清学表现与临床意义 研究进展中西医结合肝病杂志.1999,9(2):64 s骆抗先己型肝炎瘸毒变异的研究及临床意义讣怙中的闽题.中华 医学杂志.1997.77(8):565. (啦稿日期:2001一一I4)