大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl

大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl 大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl 作者: 孙晓芳 韩艳梅 段斐 宋洁 寇素茹【摘要】 目的研究大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2和Bax表达的影响。方法选择Wistar大鼠50只，随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、大豆异黄酮高剂量组和大豆异黄酮低剂量组，每组10只，给药6周后处死大鼠，分离摘取阴道，常规石蜡包埋，切片进行HE染色及免疫组化凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果大豆异黄酮能使去卵巢大鼠阴道的重量增加，上皮增厚，但作用弱于雌激素。模型组、阳性药物对照组、大豆异黄酮高剂量组、大豆异黄酮低剂量组Bcl-2的灰度值分别为57.692?4.49，116.847?9.95，10 1.345?5.87，109.56?9.11。Bax分别为168.049?11.43，106.49?9.58，12 1.34?15.78，119.82?20.89。结论大豆异黄酮可促进阴道上皮Bcl-2蛋白表达，抑制Bax蛋白表达。 【关键词】 去卵巢大鼠 大豆异黄酮 阴道 Bcl-2 Bax Abstract: ObjectiveTo study the effect of soy isoflavon on the expression of Bcl-2 and Bax in the vagina of the ovariectomy rats.MethodsIn this study，50 adult female wistar rats were divided into 5 groups: sham-operated group(10 rats), model group(10 rats), estrogen group (10 rats), high dose soy isoflavon group(10 rats)and low dose soy isoflavon group(10 rats) .After 6 weeks，all rats were killed and the vagina was excised. The vaginal tissue in each group was studied with HE and immunohistochemistry. ResultsSoy isoflavon could increase the weight and the thickness of vagina，but the effect was less intensity than estrogen. The gray values of Bcl-2 in model group, estrogen group, high dose soy isoflavon group and low dose soy isoflavon group were 57.692?4.49,116.847?9.95,10 1.345?5.87,109.56?9.11,respectively. Baxes were 168.049?11.43,106.49?9.58,12 1.34?15.78,119.82?20.89,respectively.ConclusionSoy isoflavon has estrogen action. It can increase the expression of Bcl-2 and reduce the expression of Bax in vagina. Key words: Ovariectomy rats; Soy isoflavon; Vagina ; Bcl-2; Bax 女性绝经以后，由于卵巢功能停止，激素代谢紊乱，引起绝经期综合征，目前临床上多采用激素替代疗法进行治疗。但激素替代治疗可出现不规则的阴道出血，增加患子宫内膜癌及乳腺癌的潜在危险，从而使得激素替代治疗受到限制。 植物雌激素包括异黄酮、木脂体和香豆雌酚三大类，其结构与雌激素相似，为杂环多酚类化合物，能与雌激素受体结合发挥微弱的雌激素效应。而大豆异黄酮在具有雌激素作用的同时，还具有抗雌激素作用，可以减少子宫内膜癌的发生几率。有关雌激素促进Bcl-2蛋白表达的研究报道较多，但大多集中在脑缺血区,1,、子宫内膜,2,、心内神经节,3,等区，尚未见到有关影响阴道中Bcl-2和Bax蛋白表达的报道。因此本实验比较观察大豆异黄酮和雌激素对阴道凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响，以进一步探讨大豆异黄酮的作用机理，从而为临床应用提供理论依据。 1 雌二醇，北京四环制药厂出品，批号20170403。大豆异黄酮，兔抗大鼠Bcl-2和Bax抗体，羊抗小鼠二抗，DAB显色剂均为北京中山生物技术有限公司生产。 2 方法 2.1 动物及分组 Wistar雌性大鼠50只，随机分为5组，每组10只，即假手术组、模型组、阳性对照组(雌二醇组)、大豆异黄酮高剂量组和大豆异黄酮低剂量组。 2.2 造模 除假手术组外，其余各组大鼠将双侧卵巢摘除，假手术组的大鼠重复手术步骤，但不摘除卵巢。具体手术步骤为: 用 1.5%戊巴比妥(2.5 ml/kg)将大鼠腹腔麻醉，仰卧固定于手术台，取腹正中切口，切开皮及肌肉层1~ 1.5 cm，用镊子深入切口处，可拽出一发亮的脂肪团，其内可见双角管状子宫，沿子宫可找到卵巢，为深红色，将双侧卵巢摘除止血，再将牵拉出的输卵管及子宫轻轻放回腹腔，缝合腹肌和皮肤，术后肌肉注射少量青霉素。 2.3 给药方法 手术后，各组大鼠正常饮食1周，第2周开始给药，持续6周，模型组和假手术组每日生理盐水灌胃;阳性对照组，每日灌胃给予雌二醇6 g/(100 g?d);大豆异黄酮低剂量组，按所含黄酮量计算，灌胃60 mg/(100 g?d);大豆异黄酮高剂量组，灌胃300 mg/(100 g?d)。 2.4 动物取材 造模后6周，用 1.5%戊巴比妥(2.5ml/kg)将大鼠腹腔麻醉，剪开大鼠腹正中线，将阴道与周围脂肪组织完全剥离称重，新鲜组织用中性甲醛固定后制成石蜡切片，常规HE染色观察组织形态学变化。 2.5 免疫组织化学染色及定量分析免疫组织化学染色采取SABC法，石蜡切片脱蜡至水后入0.03%甲醇-H2O2室温孵育30 min，以封闭内源性过氧化物酶;分别用兔抗大鼠Bcl-2和Bax抗体(Santa cruz，1: 200)孵育切片(4?，过夜);再用生物素化的羊抗小鼠二抗孵育30 min，37?;DAB显色5~10 min。每步骤间用0.01 mol/L PBS充分洗涤，常规脱水、透明、封片，镜下观察、摄片。对照实验: 省去一抗或用正常羊血清代替一抗孵育切片,结果为阴性。 使用通用医学图像分析仪(TN-8502)，镜下观察各组染色结果，测定细胞灰度值，用OS-9数据分析软件分析相应抗体的表达量。每组取5张切片，每张切片选5个视野，其平均值为该张切片的灰度值。各组数据采用?s表示，应用SPSS 10.0分析，P0.05为有显着性差异。