【doc】幽门螺杆菌甲硝唑耐药与细菌定植密度的研究

【doc】幽门螺杆菌甲硝唑耐药与细菌定植密度的研究 幽门螺杆菌甲硝唑耐药与细菌定植密度的 研究 昆明医学院2004,(3):19~21 AcademicJournalofKunmingMedicalCollege CN53—1049/R i 幽门螺杆菌甲硝唑耐药与细菌定植密度的研究 虎月燕,张瑜,李桂萍,周曾芬,蒋海燕,张磊 (昆明医学院第一附属医院消化内科,昆明650032) [摘要】目的:研究H.pyhrci对甲硝唑耐药与细菌定植密度问的关系.方法:用E—test方法检测109株 H./,5,/or/菌株对甲硝唑的敏感性;胃粘膜活检标本经Warthing—Starry染色后观察评定H.pytori定植密度. 结果:109株H.py/or/菌株的甲硝唑耐药率为67.89%;H.Py/~/定植密度的不同等级在H.py/ori菌株甲硝 唑耐药率上无显着性差异.结论:H.py/~r/对甲硝唑的敏感性与细菌定植密度无关. [关键词】幽门螺杆菌;甲硝唑;耐药性;定植密度 [中图分类号]R573.6[文献标识码】A[文章编号】1003—4706(2004)03—0019—03 StudyonMetronidazoleResistanceandColonization DensityofHelicobacterPylori HUYue—yan,ZHANGYu,LIGui—ping,ZHOUZeng-fen,JIANGHai—yan.ZHANGLei (.?如毗,The1stAffdiatedHospi~ofKunming1VkdicalCollege,Kunmi7lg650032,i徽) [AbstractJObjective:Tostudytherelationshipofmetronidazoleresistanceandcolonization densitvof H.Priori.Methods:Testingmetronidazolesusceptibilitiesof109H.Pyloristrainsbytheuseo ftheED— silometertest(E— test);analyzingcolonizationdensityofH.PrioriinthegastricbiopsyspecimenSby Warthing— starrystain.Results:In109H.Prioristrains,metronidazoleresistantratewas67.89%.There WasnosignificantdifferenceinthemetronidazoleresistantrateandcolonizationdensityofH.Pylori.Con— clusion:TherewasnorelationbetweenmetronidazoleresistantrateandcolonizationdensitvofH.P,7. 【Keywords]Helicobacterpriori:Meteonidazole;Resistance;Colonizationdensity 随着抗生素在幽门螺杆菌(Helicobacter— lori,H.priori)根除治疗中的广泛应用. H.priori对抗生素耐药已成为世界性问.特别 是H.priori对甲硝唑耐药尤为突出.最近的调 查显示,对甲硝唑耐药的H.pylori菌株在全球 范围内大量出现,并呈逐年上升趋势[卜31.本研 究通过E—tset方法检测109株H.pylori菌株对 甲硝唑的敏感性和Warthing—Starry染色后观察 评定胃粘膜活检标本的H.priori定植密度.研 究H.priori对甲硝唑耐药与细菌定植密度之间 的关系. 1材料与方法 1.1H.pylori菌株来源 选取2000年8月至2001年8月因上消化道 【作者简介】虎月燕(1978-),女,硕士研究生,住院医师,主要从事消化内科临床工作 20昆明医学院第25卷 症状在云南地区就诊,接受胃镜检查,H.pylori 培养阳性的109例患者.所有患者均经胃镜和病 理检查确诊为慢性胃炎和消化性溃疡;排外有严 重心,肝,肺,肾疾病史,胃手术史者,排外4 周内服用过抗生素,质子泵抑制剂,激素及非甾 体类抗炎药,进行过根除H.pylori治疗者.其 中,男性66例,女性43例;平均年龄(42.83? 13.87)岁;慢性胃炎63例,消化性溃疡46例. 1.2H.pylori菌株培养及保存 将胃粘膜组织研碎后直接种于含选择性抗生 素添加剂和5%,10%绵羊血的哥伦比亚琼脂培 养基,在5%O2,10%c02,80%N2,5%H2 的混合气体中.相对湿度>98%,37?下培养3 -- 7d.经形态学及生化试验如尿素酶,氧化酶, 过氧化氢酶等鉴定后,保存于含脑心浸液和甘油 的冻存液中,置一80?冰箱备用. 1.3E—test药敏实验 将接种2,3d的H.,ori培养物用无菌生 理盐水洗下.根据紫外分光光度仪的OD625值, 稀释成10CFU/mL,用加样枪取100L菌液接 种于血琼脂平板(直径90mm)面,待平板表 面干燥后,将含甲硝唑的E—test试纸(浓度范 围?0.016mL,256mL)置于平板正中, 37?微需氧培养3d,读取最低抑菌浓度(MIC) 值.每次试验用标准菌株NCTC11637(MIC值 >256t~g/mL,质控范围64,256~g/mL)和 NCTC11639(MIC值:2~g/mL)作质量对照. 以MIC值?8mL判定为甲硝唑耐药. 1.4组织病理学检查 胃粘膜活检标本经10%甲醛固定,石蜡包 埋,切片,Warthing—Starry染色,根据2000年 5月中华医学会消化病学分会制定的"全国慢性 胃炎研讨会共识意见",参照中国慢性胃炎的病理 诊断标准进行H.pylori定植密度的评价.所有 病理切片均由一位不知菌株背景的病理科高级职 称医师观察评定.中国慢性胃炎H.pylori定植 密度的病理诊断标准:观察胃粘膜粘液层,表面 上皮,小凹上皮和腺管上皮表面的H.pylori,分 为无,轻度,中度,重度4级.无(0级):未见 H.pylori;轻度(1级):偶见或小于标本全长 1/3有少数H.pylori;中度(2级):H.pylori 分布超过全长1/3而未达2/3或连续性,薄而稀 疏地存在于上皮表面;重度(3级):H.pylori 成堆存在,基本分布于标本全长. 1.5统计学处理 实验数据采用SPSSforWindowsVer10.0统 计软件进行x检验,以P=0.05为检验水准. 2结果 在109株H.pylori菌株中.甲硝唑敏感株 35株,耐药株74株,耐药率为67.89%.MIC 值呈连续性分布,MICso为32mL,MIC9o为 256mL. 在109份胃粘膜标本中,H.pylori定植密度 为1级的有42份,2级的有29份,3级的有38 份.H.pylori定植密度的不同等级在H.pylori 菌株甲硝唑耐药率上无显着性差异.见表1 表1云南H.pylori菌株甲硝唑耐药率 与H.pylori定植密度比较 3讨论 H.pylori对甲硝唑耐药已成为世界性问题. 本研究表明在109株H.pylori菌株中,甲硝唑耐 药率为67.89%,属高耐药率.H.pylori是一种 难培养,生长条件要求高,生长缓慢的微需氧菌, 进行药敏试验是耗时和困难的,目前尚无统一的 检测方法.本研究采用的E—test方法是一种在 琼脂稀释法和圆盘扩散法基础上改良的,近年来 用于细菌药物敏感性检测的新技术,具有简便, 易行,精确的特点.E—test的MIC值受接种物 浓度的影响微乎其微,与琼脂稀释法具有很好的 第3期虎月燕,等.幽门螺杆菌甲硝唑耐药与细菌定植密度的研究21 相关性,目前已倾向于代替琼脂稀释法而成为检 测细菌对药物敏感性的可靠标准. 本研究采用Warthing-Starry银染进行 H.pylori定植密度的评价.Warthing.Starry染色 法是众多染色方法中染色效果最好的一种银染色 法.其优点是染色后细菌的体积增大.便于显微 镜观察,不用油镜,在高倍镜下即清晰可见,省 去用油镜观察的麻烦;另一优点是染出的颜色鲜 明,对比清楚,H.pylori被染成黑色,组织染成 黄色.在高倍镜下观察,细菌呈杆状,C形,V 形,S形等形态. H.pylori对甲硝唑耐药,主要是基因突变所 致.硝基咪唑的代谢产物能快速诱导耐药突变体 的产生;而且当存在硝基咪唑时,耐药突变体比 敏感菌株有生长优势H】.敏感菌株被逐渐杀死 后,耐药菌株则余留下来进行繁殖扩大,从数量 上由劣势变成了优势.但Wang等[5]发现, H.pylori在长期慢性感染中仍可保持抗生素敏感 菌株和耐药菌株共存而不发生耐药性在菌株之间 的广泛转化,可能是由于敏感菌株较耐药菌株具 有更强的生长优势,从而抑制了耐药菌株的生长 和耐药性的转化. 我们的研究结果显示,甲硝唑敏感菌株与耐 药菌株在细菌定植密度上并无显着性差异,说明 耐药菌株与敏感菌株相比,并没有生长的优势, 也没有生长的不利.这可能因为敏感菌株在无硝 基咪唑存在时,比耐药菌株具有更强的生长优势, 数量更多,即使硝基咪唑存在时,杀死了大量的 敏感菌株,但敏感菌株仍能在细菌定植密度上与 耐药菌株保持无差异性. [参考文献] 【1JGL~SKIY.AntimicrobialresistanceinHell— cobacterpylori:aglobaloverview[J].ActaGas. troenterolBdg,1998,61(3):357 [2]MrYAJIH,AZUMAT,ITOs.eta1.Susceptibility ofHelicobacterisolatestOmetronidazole, charithromycinandamoxiciylininvitroandindirfical treatmentinJapan[J].AlimentPham~eolTher. 1997,11(6):1131 【3]MI】I(H[AIYAI('l<】S【?.YJD'JE(J Y'el:a1.Distinctivenessof?cyp笛of/-/d~ inCEcum,IndJ].JBacterid,2O00.182(11):3219 [4]EJ,,ANDEW~DEN,JCTHUSAA,NZWET. 吼a1.Iewartide:niudmida~len答istancein/-k2/a6acter [J].AlimentPharrmcdTher,2000,14(1):7 [5]WANGWH,WANGBCY.MfI乃<H0PAI)HYAY AK.eta1.HighprevalenceofHelicobactert,yZo,'i infeetionwithdualresistancetOmetronidazoleandda- rithromycininHongKong[J].AlimentPharmacol Ther.2000,14(7):901 (20o3一l1一O5收稿)