雌激素受体在不同周龄的雌性BALB_c小鼠胸腺中的表达_cropped

雌激素受体在不同周龄的雌性BALB_c小鼠胸腺中的表达_cropped Expre ss ion of e strogen recep tor in thym u s of fem a le BAL B / c m ice a t d ifferen t a ge s W E I L an, ZHAN G J ing, SON G Q ing2kun, ZHAN G B en 2yan. D epa rtm en t of H istology and Em bryology, Pek ing U n iversity H ea lth S cience Cen ter, B eijing 100083 C orrespond ing au thor: W E I L an, Em a il: w eilanbj@ sina. com ( ) 【Summ a ry】 The exp re ssion of e strogen recep to r ER in thym u s of fem a le BALB / c m ice a t d iffe ren t age s wa s inve stiga ted. The re su lts showed tha t the exp re ssion of ER in thym u s wa s inc rea sed from 1 to 8 week s afte r b irth. ER po sitive ce lls we re thym ic ep ithe lia l ce lls and thymocyte s. ER existed no t on ly in the cytop la sm , bu t a lso in the nuc leu s. 【Key word s】 R ecep to rs, e strogen; M ice, inb red BALB / c; Thym u s gland ( )Ch in J Endocrinol M etab, 2005 , 21: 373 2374 神经内分泌系 统 和 免 疫 系 统 之 间 具 有 密 切 的 相 互 联 系 。 2. 从出生后 3周开始 ,胸腺中的 ER 阳性细胞逐渐增加 ,出 胸腺作为中枢淋巴器官 ,其分化和发育更是受到多种内分泌激 生后 7周阳性 细 胞 数 量 增 加 尤 为 明 显 , 至 出 生 后 8 周 达 到 最 素的调控 ,其中很重要的激素之一便是雌激素 。已知雌激素对 大 。阳性细胞散在分布 ,均呈现为强阳性上皮细胞 , 阳性物质 胸腺具有致萎缩 、改变胸腺细胞亚群比例 、抑制胸腺中细胞的 在大多数细胞中分布于胞质 ,在少数细胞中分布于胞核 。髓质 中的阳性细胞包括两种细胞 :一种为具胸腺细胞特点的阳性细 增殖以及致细胞凋亡等作用 ,而其最主要的作用途径便是通过 [ 1, 2 ] 胞 ,细胞中的阳性物质分布不一 ,有的分布于胞核 ,有的分布于 ( ) 胸腺中细胞上所存在的雌激素受体 ER 。多年来 ,国外关 胞质 。另一种髓质阳性细胞与皮质中所见阳性细胞一样 ,也为 于胸腺中 ER 动态变化的研究报道极少 ,国内尚无报道 。本研 呈上皮细胞特点的细胞 ,细胞中阳性物质的分布与皮质阳性细 究用免疫组织化学 ,对出生后 1,8周雌性 BALB / c胸腺中 胞相同 。 ER 的表达进行观察 。 三 、讨论 一 、材料与方法 已知正常 BALB / c小鼠的胸腺在出生后 6 周达到最大 ,从 1. 实验动物 : 1,8周龄雌性 BALB / c小鼠 。孕鼠由北京大 7周开始 ,由于已进入青春期 ,体内雌激素逐渐增多 ,胸腺开始 学医学部动物部提供 。 萎缩 ,到出生 后 8 周 , 胸 腺 萎 缩 更 加 明 显 。本 实 验 中 观 察 到 , 2. 实验方法 :迅速从胸腔取出胸腺 ,入 Bou in液固定 ,常规 BALB / c小鼠从出生后 1,8周 ,其胸腺中都有 ER 存在 ,但 1周 μ酒精脱水 ,石蜡包埋 。沿胸腺头 、尾矢状切面做 6 m 切片 ,免 疫组织化 学 SP 法 染 色 。抗 小 鼠 ER 单 克 隆 一 抗 为 美 国 N eo M a rke rs公司产品 ,二抗和 SP 均来自美国 ZYM ED 公司生产的 SP试剂盒 。对照片以 0. 01 mo l /L PB S代替一抗 。 和 2周较少 , 3 周后随周龄的增加而增加 ,并在 8 周达到最大 。 二 、结果 这与 BALB / c小鼠体内雌 激素的增加趋势是相吻合 的 。提示 1. 出生后 1周和出生后 2周 BALB / c小鼠胸腺中的 ER 阳 [ 3 ] 性细胞数量较少 ,主要分布在胸腺的皮 、髓交界处和髓质 ,皮质 雌激素确实是 ER 的 激动剂 , 并 且随着小鼠年龄的增加 , 雌 激素通过 ER 对胸腺产生了越来越明显的致萎缩作用 。 前胸中只可见极少量阳性细胞 。皮 、髓交界处和髓质中的阳性细胞 腺细胞从进入胸腺到发育分化为成熟的胸腺细胞 ,经 大部分呈胸腺细胞形态特点 ,阳性物质分布在胞质或胞核 。皮 历了复杂的过程 ,包括阳性选择和阴性选择 。阳性选择开始于 质中的极少量阳性细胞呈上皮细胞形态特点 ,阳性物质主要分 双阳性胸腺细胞 ,阴性选择发生在双阳性细胞和单阳性胸腺细 布在胞质 。 [ 4 ] 胞 。已知双阳性细胞位于皮质和髓质 ,单阳性胸腺细胞位于 [ 4, 5 ] 髓质 ,本实验显示 , ER 阳性细胞不仅存在于皮质的胸腺上 皮细胞 ,而且存在于髓质的胸腺细胞 ,提示雌激素不仅通过 ER 作用于胸腺上皮细胞 , 进而间接影响皮质胸腺细胞的分化 ,包 括阳性选择 ;而且可以直接作用于髓质的单阳性胸腺细胞 ,对 正在经历阴性选择以及已经完成了阴性选择的胸腺细胞产生 作者单位 : 100083 北京大学医学部组织学与胚胎学教研室 通讯作者 :卫兰 , Em a il: we ilanb j@ sina. com apop to sis and dysregu la ted T ce ll m a tu ration in the thym u s. Toxico logy, 本实验显示 , ER 阳性物质在胸腺上皮细胞中大多位于胞 ()2001 , 163: 49 262. 质 ,少数位于胞质或 和 胞核 ,在胸腺细胞中位于胞质或胞核 。 β 2 Hoffm an2Goe tz L , F ie tsch CL , M cCu tcheon D , e t a l. Effec t of 172这进一步证明 ER 虽然属于核受体大家族 ,但其在细胞中的分 e strad io l and vo lun ta ry exe rcise on lymp hocyte apop to sis in m ice. Physio l 布 ,却并不仅限于核内 ,会因细胞的不同以及细胞所处的状态 B ehav, 2001 , 74: 653 2658. 不同而有所差异 。如有报道在阉割并给予雌激素的大鼠胸腺 , 3 L adoc s GS, Sm ith C, N ica stro SC, e t a l. Evalua tion of the p rim ary ER 在上皮细 胞 的 胞 质 和 胞 核 中 都 存 在 ; 而 来 源 于 人 乳 腺 的 humo ra l imm une re spon se fo llow ing expo su re of m a le ra ts to 17 be ta2 MCF27细胞的 ER 当用雌激素刺激时只位于胞核 ,当不用雌激 e strad io l o r flu tam ide fo r 15 days. Toxico l Sc i, 1998 , 46: 75 282. 素刺激时则既位于胞核也位于胞质 ,因而认为 ER 并不是在所 B eno it C, M a th is D. T2lymp hocyte d iffe ren tiation and b io logy. In: Pau l 4 有时间都位于细胞内的某一个单一的部分 ,而是其分布有赖于 ( ) [ 6 ] W ed Fundam en tal Imm uno logy, 4 th ed. Ph ilade lp h ia; L ipp inco tt2 存在于类固醇靶细胞内的动态平衡条件 。这可能也是本实 R aven, 1999 , 367 2409. 验显示出的 ER 既存在于胞质又存在于胞核的主要原因 。 R itte r MA , Boyd RL. D eve lopm en t in the thym u s: it take s two to tango. 5 Imm uno l Today, 1993 , 14: 462 2469. Pa rikh J , R a jend ran KG, Su JL , e t a l. A re estrogen recep to rs 6 cytop la sm ic o r nuc leu r? Som e imm unocytochem ica l and b iochem ica l 参 考 文 献 stud ie s. J Stero id B iochem , 1987 , 27: 185 2192. ()收稿日期 : 2004 201 221 1 O ka sha Safwa t2A , R yu S, Do Y, e t a l. Evidence fo r e strad io l2induced 血小板衍化生长因子 B 在糖尿病大鼠肾皮质中的表达 隋春华 吴万龄 洪金秧 张惠新 【提要 】 本研究以半定量 R T2PCR 法测定了糖尿病及对照 W ista r大鼠肾皮质血小板衍化生长因子 B ( ) PD GF2B mRNA 水平 ,发现糖尿病大鼠为对照组 2. 5倍 ,提示 PD GF2B 在糖尿病肾病中起一定作用 。 【关键词 】 糖尿病肾病 ; 大鼠 , W ista r; 血小板衍化生长因子 in rena l cor tex of d ia be t ic ra t Expre ss ion of PD GF2B SU I Chun 2hua, W U W an2ling, HON G J in 2yang, ZHAN G H u i2x in. D epa rtm en t of Endocrinology, The N in th People′s H ospita l, S hangha i S econd M ed ica l U n iversity, S hangha i 200011 ( ) 【Summ a ry】 Exp re ssion of p la te le t2de rived grow th fac to r PD GF 2B mRNA wa s m ea su red by sem i2quan tita tive R T2PCR in rena l co rtex of d iabe tic and con tro l W ista r ra ts. The exp re ssion of PD GF2B mRNA in rena l co rtex of d iabe tic ra ts wa s 2. 5 2fo ld of no rm a l ra ts, sugge sting tha t PD GF2B seem s to p lay a ro le in d iabe tic nep h ro2 p a thy. 【Key word s】 D iabe tic nep h rop a th ie s; R a ts, W ista r; P la te le t2de rived grow th fac to r ( )Ch in J Endocrinol M etab, 2005 , 21: 374 2375 ()近年来高血糖诱导的多种细胞因子在糖尿病肾病 DN 发 2. 抽提总 RNA 与 R T2PCR 扩增 :取肾皮质 100 m g用 Trizo l ( )病机制中的作用备受重视 。血小板衍化生长因子 PD GF分 A () μ美国 Gibco 公 司 抽 提 总 RNA , 再 取 1 g 总 RNA 用 MMLV 和 B 两个亚型 ,本研究观察糖尿病大鼠肾皮质 PD GF2B 的表达 ( )Gibco公司 逆转录成 cDNA。优化 PCR 扩增条件 ,使 PCR 扩 并探讨其在 DN 中的作用 。 β 增在对数期内进行 ,每个转录产物进行 PD GF2B 及 2ac tin 扩一 、材料和方法 增 。所用引物前者为 5 ′2GA GTGCAA GACGCGTACA GA 23′及 5′2 1. 动物造模 : 22只体重 180,220 g健康雄性 W ista r大鼠 , CGA TCTTTCTCACCTGCACC23′,后者为 5 ′2CTA TCGGCAA TGA G2 取 16只用链脲佐菌素按 50 m g / kg腹腔注射 , 24 h后测得血糖 CGGTTC23′及 5 ′2CTTA GGA GTTGGGGGTGGCT23′。反 应 30 个 > 13 mmo l /L 建成糖尿病模型 ,受试期间不使用胰岛素 ,其中 1 μμβ循环数 ,分别取 PD GF2B 及 2ac tin产物 10 l及 5 l,在 1. 2% 只中途死亡 ,余 15 只作为糖尿病组 。另 6 只腹腔注射等量缓 β琼脂糖中电泳后行灰度扫描 ,以 PD GF2B /2ac tin mRNA 产物条 冲液作为阴性对照组 。每 4周测体重 、血糖 、血肌酐 ,并收集 24 带灰度的比值作为 PD GF2B mRNA 的相对表达量 。 h尿测尿蛋白与肌酐 。 8周后用 2%戊巴比妥钠 2 m l麻醉后取 肾 ,取肾皮质用生理盐水漂洗后制成匀浆 ,保存于液氮中备用 。 3. 统计学处理 :数据以 x ?s表示 ,组间比较用 t检验 。 二 、结果 1. 实验室资料的变化 :与对照组相比 ,糖尿病组大鼠血糖 、 血肌酐及 24 h尿蛋白于 4周后即有显著增高 , 8周后更高 , P < 作者单位 : 200011 上海第二医科大学附属第九人民医院内分泌科 () 0. 01 表 1 , 表 明 DN 造 模 成 功 。糖 尿 病 组 肾 皮 质 PD GF2B () ()隋春华 、吴万龄 ,中心实验室 洪金秧 、张惠新