弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化大鼠模型的建立

弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化大鼠模型的建立 弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化 大鼠模型的建立 中国医师杂志2O02年8月第4卷第8期843 弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化大鼠模型的建立 中南大学湘雅三医院肾内科(湖南长沙410013)张浩季龙振伍锟曹宇季迎 【摘要】目的建立弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化动物模型.对sD大白鼠行腹部旁正 中切口右肾摘除术,术后第7d,30d分别尾静脉注射阿霉素4mg/kg,3mg/kg,第70d制成模型.结果该模型临床 上表现为高度浮肿,大量蛋白尿,低蛋白血症,高脂血症及肾功能损害;病理学检查,计算机图象及免疫组织 化学染色显示,肾小球主要表现为系膜基质弥漫性中至重度增生,系膜细胞轻度增生,其中约22%的肾小球出现 节段性硬化,纤维化生长因子血小板源性生长因子一B(PDGF—B)和成纤维细胞生长因子一b(bFGF)的表达均增 加,表明肾小球正处于由增生向硬化转化的过渡阶段.结论本模型的建立为实验研究慢性肾小球疾病由系膜 增生向硬化转化的及防治创造了条件. 关键词系膜增生;肾小球硬化;肾炎;动物模型,大鼠 [中图分类号]R692.6,R一332[文献标识码]A[文章编号]1008—1372(2002}08—0843—03 EstablishmentofModelofDiffuseMesangioproliferationComplicated WithFocalSegmentallyGlomerulosclerosisModelofRat ZHANHao,J1Long—zhen,刚Kun,etaloDepartmentofNephrology,TheThirdXiangyaHospital,CentralSouthUni— Versi砂,Changsha,410013,China 【Abstract】 ObjectiveToestablishaanimalmodelfordiffusionmesangiopmliferationcomplicatingfocalsq~entally glomerulosclerosis.MethodsThemodelswereestablishedintheseventiethdaybyrepetitiveinjectionof4mg/kgand3rng/kg adriamycintotheSDratsinthe7thand30thdayafterren'lovaloftheirrightkidneys,ResultsSeriousedema,profusealbu— minutia,hypoalbuminemia,hyperlipemiaandrenalfailurewerepresented.Simultaneously,diffusemedium—orserious— gradeproliferationofmesaJ1gialmatrix,slight— gradepmli~rafionofmeSanalcells,segmentalsclerosisof22%ofglomeruli, andoverexpressionofPDGF— BandbFGFinglomemliw{~reshowedbypathologicexamination,computerizedimageanalysis andimmunohistochemistrystaining.ConclusionsThemodelsestabhshedinthetransitionstagefrommesangiopmhferationto glomerulosclerosisarehelpfultostuaymechanismsandtakemeasuresforpreventionandcureofchronicglomemlonephfitis. KeyWordsMesangioproliferation;Glomerulosderosis;Glomerulonephritis;Animalmodel,rat 慢性肾小球疾病发展,进行的原理及其有效的防 治措施是近年肾脏疾病防治战略的研究重点…1.我们 通过反复的摸索,改进,获得了一个组间差异小,稳定 性和重复性好的肾小球呈慢性进行性改变的阿霉素药 物模型,此模型为实验研究慢性肾小球疾病以何种机 制实现由系膜增生状态向硬化状态的转化,如何延缓 或阻止这一转化过程的发生创造了必要的条件. 1与方法 1?1动物Sprae—Dawley(sD)雄性大鼠20只,3个 月龄,重200—24Og,由湖南省中医研究院动物实验室 提供,自由引水进食.饲料配方:30%玉米面,30%面 粉,35%麸子,2%鱼粉,2%骨粉,1%食盐,每lOkg饲 料内加lOOg鱼肝油.适应1周后随机将大鼠分为3 组,A组:正常对照组6只.B组:单纯右肾摘除对照 组6只.C组:模型组8只. 1?2试剂与设备阿霉素系法玛西亚普强公司产品, 规格为每支lOmg;IV型胶原蛋白(Col—IV),层粘蛋白 (Lain)和细胞核增殖抗原(PCNA)单克隆抗体由福建迈 新公司提供,血小板源性生长因子一B(PDGF—B)和成 纤维细胞生长因子一b(bFGF)单克隆抗体由北京中山 公司提供;7060自动生化分析仪;Nikon光学显微镜; PII233计算机及北航第三代真彩色病理图象分析系统 软件;代谢笼. 1?3模型制作经0.5%戊巴比妥钠0.66ml/100g腹 腔内麻醉后,在无菌条件下行腹部旁正中切口右肾摘 除术,术后第7d给予阿霉素4mg/kg尾静脉注射,第 30d重复尾静脉注射阿霉素3mg/kg,第70d模型制作 完毕并处死. 1?4观察及研究指标 1?4?1临床指标(1)观察模型制作完毕时的水肿程度 并称体重;(2)模型制作完毕时取眦静脉血测定血清白 蛋白(Atb),尿素氮(BUN),肌酐(Cr),总胆固醇(Cho) 及甘油三脂(TG);(3)采用丽春红法定量测定第28,42, 56,70d时的24h尿蛋白. 1?4?2肾脏病理学检查肾脏组织经10%甲醛固 定,常规石蜡包埋,切片(3tma厚),每块蜡块切3张,分 别予HE,PAS,PASM3种染色,(1)光镜下观察肾脏病理 改变;(2)利用计算机真彩色病理图象分析系统计算肾 小球面积,系膜基质基底膜面积,肾小囊毛细血管袢面 积及球内细胞数目,采用计算机自动单盲法计数每只 大鼠l0个肾小球,取均值. 1?4?3肾小球免疫组织化学染色采用sP法.结果 分析除PCNA外均采用半定量法,按染色阴性,系膜区 极微量染色,节段性微弱染色,节段性较强或弥散性强 染色分成04级,计数每只大鼠20个肾小球内积分, 取均值;PCNA为直接计数每只大鼠20个肾小球内阳 性细胞数,取均值. 1?5统计学分析经定量或半定量处理后的结果采 用?s表示,各组间比较采用方差分析.一 2结果 2?1临床指标A,B两组均无明显水肿,C组表现为 大量腹水及阴囊水肿,体重,Alb,BUN,Cr,Cho及TG结 果见表1:24h尿蛋白定量结果见表2. s) 表1大鼠处死时体重,Alb,Cr,BUN,Cho及TG变化(?与A组比较:*F=8.62,P<0.05;**F:316.58,323.99,119.23,95.15,115.61,52.01.P<0.01 表224h尿蛋白定量(nag,?s) 与A组比较:**F=505.85,333.20,215.43,157.16.P<0.01 2?2肾脏病理学检查(1)光镜下病理改变:A组无明 显病理改变,见图1;B组除肾小管轻度浊肿外,无其它 病理改变;C组肾小球系膜细胞轻度增生.系膜基质中 至重度增多并呈弥漫性分布,约20%的肾小球伴有节 段性硬化,约2%呈球形硬化,硬化处细胞数明显减少, 可见球囊粘连,囊壁中度增厚,毛细血管袢部分闭塞, 部分代偿性扩张,间质有局灶性轻度纤维组织增生,炎 性细胞呈局灶性浸润,小管灶性扩张,蛋白管型多见, 见图2.(2)肾小球计算机图象分析结果见表3.图2C组,PAS染色(X40) 表3./~/J,球计算机图象分析(放大10×10×4.5倍,面积单位crn2,?s) 与A组比较:*F=5.04,6.11,P<0.05;**F=33.36,90.11,P<0.01 2?3肾小球免疫组织化学染色分析见图3,图4及大量蛋白尿,严重低蛋白血症,高脂血症及高度浮肿等 表4.典型肾病综合征"三高一低"的表现,同时反映肾功能 3讨论恶化程度指标的BUN,Cr均呈显着性增高,说明本模型 从临床指标上看,模型组与正常对照组比较具有的建立符合肾功能呈进行性损害的慢性./~/J,球疾病的 l 中国医师杂志2002年8月第4卷第8期845 要求. 运用HE,PAS及PASM三种染色的肾脏病理学检 查显示,模型组肾小球既存在弥漫性中至重度系膜基 质增生伴有轻度系膜细胞增生的典型增生性改变,也 存在约20%的局部节段甚至约2%整个呈球形的硬化 改变.对肾小球进一步进行的计算机图象分析结果显 示,模型组的肾小球面积较正常对照组增加,这是在肾 小囊毛细血管袢面积被明显压缩的情况下,代表了系 膜基质增生程度指标的系膜基质基底膜面积显着性增 加所致.肾小球平均细胞数基本上能够反映系膜细胞 的增生情况,模型组较正常对照组增加,增加率约 12%.以上说明模型组肾小球从整体而言主要是以代 偿性增生为主,虽然部分已有了硬化萎缩的趋势. 表4肾小球免疫组织化学半定量结果(?s) 与A组比较:**F=1o3.45,79.18,122.43,168.97,P<0.01 图3A组,Lain免疫组织化学染色(×40) Col—IV和Lain是系膜基质基底膜的两种主要成 分,均可反映系膜基质的增生程度L2J,运用它们的单克 隆抗体进行免疫组织化学染色分析显示,两者在正常 对照组主要是沿基底膜着色,系膜区着色淡且范围局 限,模型组除基底膜有深的着色外,系膜区着色较正常 对照组明显加深增宽,部分节段呈深棕色的团块状,说 明模型组系膜基质处于显着的增生状态.PCNA是反 映细胞增殖状态的一个很好的指标J,王玉等研究发 现,在增生阶段,系膜细胞处于明显的增殖状态,PC2qA 阳性着色细胞增多,一旦肾小球发生硬化,系膜细胞就 会由增殖状态向稳定状态转化,PCNA阳性着色细胞几 乎找不到J,本实验运用免疫组织化学染色发现,模型 组与对照组的肾小球系膜区内均几乎找不到阳性着色 细胞,因此,可以解释为模型组系膜细胞已由增殖状态 过渡到了稳定状态,这与系膜基质处于明显增生状态 存在一定的分离现象,我们认为这可能正体现了肾小 球由增生向硬化转化过渡的特点.对两种重要的纤维 化生长因子PDGF—B和bFGF进行免疫组织化学染色 显示,两者在模型组肾小球中的表达均明显增加,进一 步证实了模型组肾小球已启动了硬化的程序,对PDGF — B和bFGF的阻断有望延缓肾小球硬化的进程J. 本模型是在借鉴了王泰华等的方法基础上完成 的,他们所制模型为肾小球硬化模型,临床反映的是慢 性肾功能不全的晚期,此时的肾小球基本处于不可逆 图4C组,Lam免疫组织化学染色(×40) 转的广泛性硬化状态(硬化率高达85%),不能很好反 映肾小球的慢性进行性发展过程6.我们的模型制作 两次注射阿霉素剂量分别为4mg/kg,3mg/kg,时间选择 70d,此时的肾小球正处于增生状态开始向硬化状态转 化的过渡阶段,而这种转化的进行发展即意味着肾功 能的慢性进行性恶化.本模型不仅支持了局灶节段性 肾小球硬化(FSGS)可由系膜增生性肾炎(MsPGN)转化 而来[,更重要的是对开展研究肾小球由增生向硬化 转化的机制,如何阻止或延缓这一转化的进程提供了 一 个组间差异小,稳定性和重复性好的实验动物模型, 为进一步的临床防治慢性肾小球疾病创造了条件. 通过多次的预实验发现,本模型主要死因为第二 次注射阿霉素后出现的腹泻,作者认为将第一次阿霉 素剂量减少,由通常的5mg/kg减至4mg/kg能明显降 低阿霉素腹泻死亡率;其次为感染,腹部切口可以大大 降低背部切口的感染发生率,尾部感染可能与注射部 位阿霉素渗漏造起的局部缺血坏死有关;由于时间较 制作肾小球硬化模型缩短,肾衰所致死亡率大大降 低[6]. 参考文献 1AndersonS.Mechanismsofinjuryinprogressiverenaldisease[J].Exp Nephrd,1996.4suppl1:34-,4o 846Journal0fChinesel~eian,August,2002,Vol4,No8 不同浓度碘附消毒预防会阴切口感染的疗效研究 广东医学院附属福田人民医院(广东深圳518o33)彭检妹张荣生 【摘要】目的探讨进一步降低会阴切口感染率的碘附有效浓度.方法本研究设实验组为1998年6月 至20OO年8月在我院分娩行会阴侧切4760例用5%碘附消毒会阴;对照组为1996年3月至1998年5月在我院 住院分娩行会阴侧切3520例,按常规用0.5%碘附消毒会阴.结果实验组手术助产,顺产的感染率明显低于对 照组(P<0.05).结论碘附消毒效果与其浓度有关,5%碘附更有利于降低切口感染 率,值得推广. 关键词碘附;浓度;消毒;会阴切口;感染率 [中图分类号]R713.2[文献标识码]A[文章编号]1008—1372(2002)08—0846—02 EfficacyResearchforDifferentConcentrationIodophorDisinfectant AppliedtoPreventtheInfectionofPericineumIncision PENGJian—mei,ZHANGRong— sheng.TheAffiliatedFutianHospital,GuangdongMedicalCollege,Shenzhen,518033, China 【Abstract】 ObjectiveToexploreoptimaleffectivenessconcentrationofIodophor(aiodiccomplex)disinfectantinor. dertoreducefurthertheintrapartuminfecfionrateofpericineumincision.MethodsPericineumsof4760puerperantswith lateralperineotomyweresterilizedby5%Iodophordisinfectantsolution.thesepuerperantshadchild—birthinperiodfromJun 1998toAug,2OO2inourhosi~al,asexperimentalgroup.Otherhositalized3520puerperantswithlateralperineotomyduring Mar.1996toMay1998,theirpericineumsweresterilizedby0.5%Iodophordisinfectantsolution.ascontrolgroup.Results Intrapartuminfectionrateofoperation— assistedlabor,spontaneousdeliveryWaslowerintheexperimentalgroupthanthoseof controlgroup.Therewasobvisuslydifference(P<0.05).ConclusionsTheeffectiveconcentrationofIodophorsterilization iI1thepericineumincisionisrelatedwithitstheconcentration.thestudyfindingsthat5%Iodophordisinfectantsolutionisbet. terforreducingintrapartuminfectionrateofpericineumincision,soithavepopularizedvalue. Keywordslodophor;Pericineum;Infectionrate 会阴侧切术是产科助产最常见的一种小手术.近 年来由于提倡优生,侧切指征明显放宽,但侧切感染率 也随之增加,如何降低切口感染率是产科工作者应高 度重视的问题,我院就应用不同浓度碘附消毒来预防 切口感染效果进行了临床观察,现报道如下. 1临床资料 1.1一般资料取1998年6月至2000年8月在我院 分娩行会阴侧切476o例,为实验组,其中顺产为4663 例,手术助产97例(包括产钳:,吸引器,臀牵引);取 1996年3月至1998年5月在我院住院分娩行会阴侧 切3520例作对照组,其中顺产为3452例,手术助产68 例.两组产妇年龄,孕产次,孕周,胎儿体重情况大致 2BurgM,OstendorfT,MooneyA,eta1.TreatmentofexperimentalIlIt.一 p~)liferative?lel1d?ep}ui6swithn0ll—anticoagulantheparin:lherapeufie efficacyandsafety[J].LabInvest,1997,76:505—516 3HoegeJ,EngE,Young队,ela1.Heparin乳lpl竹e8s鹤ITIesangialcellpmlif- erationandmatl-ixexpansioninexperimentalmesangioliferativeglom~r.一 lonelahritis【JJ.Kidneylnt,1993,43:369—380 4王玉,邹万忠,李晓攻.肾小球肾炎中系膜细胞a一平滑肌肌动蛋白 表达与细胞表型变化的关系[J].中华肾脏病杂志,1998,14(4):206, 2】0 5张浩,季龙振,伍锟,等.低分子量肝素延缓进行性肾小球硬化的实 验研究[J].湖南医科大学,2001,26(1):7..9 6王泰华,钱家麒,张介玉.阿霉素肾病肾硬化动物模型的实验改进 [J].肾脏病与透析移植杂志,1997,6(2):191,193 7R~l/ikeG,StructuralA.AssociatedwithGlomeralarHyperfiltration.In: MitchWE,SteinJ,eta1.ThePT0llNatureofrenaldisease[M]. NewYork;Churchilllivingstonelne.1986,37 [收稿日期:200o—O1—3O]