[doc格式] 早孕尿HCG胶体金检测漏检原因分析

[doc] 早孕尿HCG胶体金检测漏检原因分析 早孕尿HCG胶体金检测漏检原因分析 2.1.2酚一氯仿抽提消化后液体加等体积饱和酚,充分 混匀,10000转/rain离心5min;吸取上层水相,加等体积饱和 酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),充分混匀,10000转/rain离 心5min;取上清加氯仿:异戊醇5001(24:1),10000转/rain 离心5min;取上清加1/10体积的NaAc(3mol/L),混匀,再沿管壁 缓慢加入2倍体积的预冷无水乙醇,10000转/min离心5min,弃 上清;用预冷75%乙醇洗涤,离心,弃上清,尽量将酒精吸干净, 自然晾干(或真空抽干);50IXlTE溶解(10mmol/LTris, 1mmol/LEDTA),一20?保存. 2.2高盐高EDTA溶血法1.0cm3血置于5ml离心管 中,加入适量生理盐水,浸泡10min,8000转/min离心5min, 弃上清液.沉淀中加适量含80g/LNaCI和10%EDTA的溶 液,用细无菌光滑小木棍将血块充分研磨破碎,颠倒混匀, 8000转/rain离心5min,去上清液,重复此过程2-3次至上清 液清亮.加消化液500l(含10mmol/LTris,1mmol/LEDTA, 20s/LSDS,300g/ml蛋白酶K),56?2h,其中每隔0.5h颠 倒混匀1次,然后变换温度至37过夜.消化后酚一氯仿抽提 DNA同上. 2.3DNA提取质量检测用紫外分光光度仪检测DNA 的质量和浓度,DNA浓度和纯度用g/ml血液及A260/A280 比值示. 2.4统计学方法采用SPSS12.0统计学软件对所得数据 进行统计分析,2组比较采用配对t检验,所有数据以均数?标 准差表示,显着性差异为P<O.05. 3结果与讨论 两种方法提取20例血凝块的结果有显着性差异,高盐高 EDTA溶血法提取的DNA浓度和纯度均高于低渗溶血法,结果 见表1. 表1两种方法提取DNA浓度和A260,A28O比值 通常血液基因组DNA是在抗凝血中提取,因为血液凝集 后红细胞不易破碎,从而大大影响了血液DNA的提取质量和 得率.裂解血块前人们经常先将血凝块在匀浆器中研磨以利 于下一步红细胞的破碎,本实验采用无菌光滑小木棍直接研 磨血凝块,可以免去将血凝块在匀浆器中的研磨过程,既省时 省力又可减少标本污染的机会.通过本研究两种提取方法比 较,可看出高盐高EDTA溶血法比低渗溶血法能更加有效地 提取DNA.可能是含高盐高EDTA的裂解液可处理破坏血凝 块中红细胞膜,高浓度的EDTA对凝集中起主导作用的Ca2~ 有螯合作用,进而破坏血样的凝集[2-31.总之,高盐高EDTA裂 解法是一种简便,可靠,值得推广的血凝块基因组DNA提取 方法. 参考文献 1卢圣栋.现代分子生物学实验技术【M】.第2版.中国协和医科大学出 版社.1999.677682 2商亚丽,解军,程牛亮,等.从人血凝块中提取基因组DNAIJ】.山西医 科大学,2006,37(8):881—882 3陈立,姜莉,罗阳,等.一种从人血凝块中提取基因组DNA的方法加. 细胞生物学杂志,2004,26(5):548,549 作者简介:任来峰,男,3O岁,研士,毕业于大理学院,讲师.E— mail:rlaifeng@163.com (收稿日期:2008—1l-22) 早孕尿HCG胶体金检测 漏检原因分析 田涛 (陕西中医学院第二附属医院,陕西咸阳712000) 【摘要】目的对早孕HCG胶体金快速检测漏检原因进 行分析.方法采用胶体金取晨尿测定HCG,并与放射免疫法 对比.结果350例阴性标本用放射免疫法复检出HCG30例 阳性(HCG>50mIU/m1),复检出的阳性对照胶体金重新观察 发现其中有8例因弱阳性而误判为阴性.结论温度,湿度等 环境因素,操作和判断失误是造成漏检的主要原因. 【关键词】早孕尿检胶体金漏检 胶体金免疫层析技术具有操作简单,条件要求低,不需要 特殊设备,消耗标本量少,检测速度快,检测结果较准确等优 点,利用胶体金免疫层析技术检测尿液中的HCG浓度,来确诊 妇女是否受孕,是协助临床判定妊娠的可靠指标,在临床上得 到了广泛应用.笔者在工作中发现该方法存在漏检现象,通过 对胶体金试纸条检查过的350例阴性标本,用放射免疫法复检 出30例阳性,复检出的阳性对照试纸条重新观察发现其中有 8例因弱阳性而误判为阴性,现对漏检原因进行分析如 下. 1材料与方法 1.1一般资料350例阴性标本均来自我院妇科门诊患 者,其中最大年龄4O岁,最小年龄18岁,通过胶体金检测与放 射免疫法对照存在30例阳性被判定为阴性. 1.2试剂人绒毛膜促性腺激素诊断试剂(胶体金法)试 纸条为万华普曼生物工程有限公司出品,体外放免13一HCG试 剂盒由北京福瑞生物工程公司出品. 1.3检测方法严格按试剂盒所附操作说明进行,放射 免疫13一HCG测定用全自动.y放射免疫计数器(西安凯普 FM一2000)$~定标准品,自动画出标准曲线,算出标本浓度. 基层医学论坛2009年第13卷3月中旬刊 2结果与讨论 2.1结果350例阴性标本,用放射免疫法复检出30例 阳性,复检出的阳性对照试纸条重新观察发现其中有8例因弱 阳性而误判为阴性. 2.2原理及方法学上的差异放射免疫法利用放射性核 素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原 抗体复合物的原理;金标法结合免疫学方法和色谱层析的技 术,金标试纸条虽然不再利用酶的催化作用显色,但仍然是利 用抗原抗体来检测HCG,如层析过快HCGAb1-Au还没来得 及与Ab2结合,就越过了检测线,这就可能导致漏检.层析速度 太快还会导致对照线很快就显色清晰,而这时弱阳性样品可能 还没显色,导致使用者误认为判别时间已到. 2.3标本问极端的情况下,如葡萄胎,绒癌当样品 HCG浓度超过50000mlU/ml时,可能发生钩状效应,检测线可 能会显示阴性,造成阳性漏检.另外妊娠时间较短或者有异位 妊娠(官外孕)检测标本HCG浓度偏低而不易检出,易造成阳 性漏检. 2-4环境因素的影响温度的高低影响结果的准确性, 试验温度最好大于1O?,从冰箱刚取出的试纸条则应待其恢 复至室温,然后才打开密封,可避免影响抗原抗体的扩散速度, 使反应线模糊不清,影响结果判断;另外试纸条虽然可在室温 保存,但大批暂时不用的试纸条还是应该放在4?保存,以免 抗体失效,造成漏检. 2.5操作及判断失误加样量过多或过少可能会影响标 本在试纸条上的层析,导致结果不准确,金标试纸的灵敏度低 于放射免疫法,阳性标本2rain内可检出,5ng标准品10rain 内可检出,1ng标准品30min内可检出.观察时间过短会造成 一 些HCG弱阳性标本的漏检. 2.6试纸条品质胶体金试剂品质主要在灵敏度,特异 性,稳定性方面,检测结果的好坏很大程度上依赖于免疫蛋白 在膜上固定效果的好坏,品质好的试纸条的结果应该清晰且容 易判读.试纸条最好现取现用,防止受潮,否则结果将受到影 响,易产生漏检. (收稿Et期:2008—11-o4) 布鲁杆菌病误诊1例分析 高郑霞 (绛县人民医院,山西绛县043600) 1病例资料 患者,男,65岁,既往体健,有养羊史,无排尿不畅史.半月 前自觉腰痛,腹痛,以活动时明显,口服芬必得可好转.腰椎 MRI示腰椎骨质增生,腰与骶椎间盘突出,1周前行走困难,卧 床不起.1d前寒战,发热,自觉腰,腹疼痛明显,出现排尿不畅, 排尿痛,急诊入院.病程中,无明显出汗,拟发热原因待查收入 院.人院查体:体温38.7?,意识清楚,各浅表淋巴结未触及肿 大.双肺呼吸音粗糙,未闻及l罗音,心率94次/min,腹平,软,左 中,上腹有压痛,无反跳痛,脾肋下可及,腰椎无畸形,无压,叩痛, 双侧骶髂关节处压痛,叩痛,无下肢放射痛,双下肢感觉,肌力及 生理性反射正常,病理征阴性,4字试验阴性,直腿抬高试验阴 性.实验室检查:血常规:WBC5.8×109/L,N76.2%,L18.5%,Hb 117g/L,PLT149×109/L.尿常规正常,血尿淀粉酶正常,血沉 25mm/lh,抗链”0”,类风湿因子,c反应蛋白均阴性.辅助检 验:心电图正常,B超:肝,胆,胰,肾正常,脾大(厚5.7cm,肋 下2.0cm),前列腺肥大,尿潴留.入院后给予氨苄西林抗炎, 肥皂水通便灌肠,腹痛好转,仍感腰痛,排尿痛,发热达40?, 后查布鲁杆菌试验1:200(阳性)予留置导尿,口服四环素 0.5g,4次,d,肌注链霉素0.5g,2次,d.用药第2天热退,尿管 留置5d后排除,自行排尿通畅,无疼痛,腰痛明显减轻,行走 自如. 2讨论 布鲁杆菌病是一种以发热为主要表现的动物源性传染病, 临床除发热常有多汗,关节疼痛,肝脾及淋巴结肿大,以及神经 系统和泌尿生殖系统症状,如坐骨神经,腰神经,肋间神经,三 叉神经等均可因神经根受累而疼痛,少数可发生脑膜炎,脊髓 炎. 本例患者腰,腹疼痛半个月,自觉发热1d,之前未觉发热, 未测体温,表现为神经系统和泌尿生殖系统症状,腰骶神经痛, 腹痛.结合患者有养羊史,在排除临床各种发热疾病后,高度怀 疑布鲁杆菌病,进一步做布鲁杆菌试验阳性,确诊此病.因此笔 者认为对于发热,尤其是长期发热,病因不明,用一般抗炎药物 无效,伴随症状不典型且无明显阳性体征时,应仔细询问病史, 注意流行病学特点,做全面而仔细的体格检查,以发现线索,为 诊断提供依据,减少误诊.临床上我们遇到高热不退患者,应考 虑到各种可能引起发热的疾病,而不能简单地认为是”感冒”或 尿路感染或体温升高不明显时而认为是椎间盘突出而延误患 者的诊治. (收稿日期:2008—11-26) 基层医学论坛2009年第13卷3月中旬刊