中药益智仁盐炙工艺的正交实验法研究-药学论文

中药益智仁盐炙工艺的正交实验法研究-药学论文 作者:李兴迎胡昌江林辉黄勤挽李兴华 【摘要】 目的优选盐炙益智仁的最佳工艺。方法采用正交设计 L9(34)，以挥发油、水浸出物和诺卡酮(nootkatone)的含量为考察 指标。结果最佳盐炙工艺为100g饮片，用2g食盐加40ml水溶解后， 与益智仁拌匀，闷润30min，在250?下炒炙8min。结论优选得到的 工艺稳定、合理、可行。 【关键词】益智仁;炮炙;正交实验 Abstract: ObjectiveTooptimizethetechnologyofprocessingRuctusAlpiniaeOxyphyllae.MethodsOrthogonaldesignL9(34) wasusedtoscreenoutthebestextractionconditionswithnaphtha,thepercentagesofwater-solublecomponentsandthecontentofNootkatoneasindexes.ResultsTheoptimalprocedurewassetasfollows:fructusalpiniaeoxyphyllaewasaddedwith2%saltandmixedhomogeneouslyat250? for8min.ConclusionThetechnologyisstable,reasonableandviable. Keywords:FructusAlpiniaeOxyphyllae;Processing; Orthogonaldesigns 益智是姜科植物益智AlpiniaoxyphyllaMiq.的干燥成熟果实。中医临 床使用益智仁主要分为生品和盐炙品，生品性温味辛，主归脾、肾经， 具有温脾止泻，摄唾涎，治疗脾寒泄泻、腹中冷痛、口多唾涎等疾病; 而盐炙品可缓其辛燥，主入肾经，以补肾缩尿涩精为主,1,，治疗肾 虚遗尿、小便频数、遗精白浊等疾病。 《中国药典》2005版?部对益智仁的炮制仅规定了盐炙法,2,，传统的炮制方法是盐水拌润后用文火炒干，缺乏对火力、火候等相关量化参数，不能保证工艺的重复性和饮片质量的稳定性。本工艺选择闷润时间、炒制时间、炒制温度这3个主要因素，采用正交实验设计L9(34)，以益智仁中的诺卡酮(Nootkatone)及水浸出物、挥发油的含量为指标，对盐炙益智仁的炮制工艺进行优选，确定盐炙益智仁的最佳炮制工艺，为益智仁饮片炮制的规范化、产业化和盐炙共性技术的研究提供了参考依据。现报道如下。 1仪器与材料 1.1仪器 日本岛津LC-l0A高效液相色谱仪(SPD-10AVP紫外检测器、SCL-6A系统控制器、TC-100恒温箱、LC2000色谱数据工作站)，KUUDOSSK250HP型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，BP211DAG电子天平(德国Sartorius)，TU-1001型紫外一可见分光光度计(北京普析科学仪器有限公司)，正德牌远红外可控温电炉(功率45,2000W)，红外测温仪(smart仪器有限公司)。 1.2试药 Nootkatone对照品(购买于AlfaAesar，批号10112423，含量大于98,)，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。 1.3药材 购于成都五块石药材市场，经本校生药教研室李敏教授鉴定确认为《中国药典》规定的姜科植物益智AlpiniaoxyphyllaMiq.的干燥成 熟果实。将益智去壳得到益智仁饮片。 2方法与结果 2.1盐炙益智仁样品的制备 按正交实验设计安排益智仁炮制实验(表1，表2)，称取益智仁饮片分别加入2%的盐(预先用药材量40%水溶解，再均匀喷洒)，闷润不同时间，然后置于设定不同温度的锅中，不停翻炒直至设定的时间，立即取出，摊放至凉，装袋备用。表1正交实验因素及水平设计(略) 2.2挥发油含量测定 照挥发油测定法《中国药典》2005年版附录XD甲法项下规定操作，以饮片形式，在筛选提取条件(加12倍量水，浸泡2h，提取8h)的基础上进行测定。结果见表2。 2.3水浸出物含量测定 按《中国药典》2005年版附录XA下热浸法进行测定。结果见表2。 2.4Nootkatone含量测定结果见表2。表2实验安排及结果(略) 2.4.1色谱条件 色谱柱为diamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)。流动相为乙腈-水(70?30);流速1.0ml/min;检测波长235nm;柱温35?。理论塔板数按nootkatone峰计算为3000以上。同时取阴性供试品溶液进样，结果表明，阴性供试品在nootkatone色谱峰位置处无相应峰出现。 对照品阴性及样品供试品的高效液相色谱图。见图1,3。 2.4.2对照品溶液的配制 精密称取对照品Nootkatone24.18mg置于25ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密移取1ml于25ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀即得浓度为0.03869mg/ml的对照品溶液。 2.4.3供试品溶液的制备 经筛选后为:精密称取盐益智仁粗粉约1g置于25ml容量瓶中，加入20ml甲醇超声提取30min，放冷后滤至25ml容量瓶中，残渣用适量甲醇洗涤，滤过，合并滤液，定容至25ml。精密量取此溶液1ml至10ml容量瓶中，加入甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜过滤,吸取续滤液进样,测定其含量。 2.4.4线性关系的考察精密量取Nootkatone对照品溶液(0.038688mg/ml)2,4,6.8,10，12μl进样，色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归，得标准曲线方程A=1E+07C-41265，r=0.9995。结果表明,在0.07738,0.46426μg范围内,线性关系良好。 2.4.5精密度实验精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样5次，Nootkatone峰面积的RSD=0.91%。结果表明，精密度良好。 2.4.6稳定性实验 取样品供试液20μl，分别于0,2,4,6,8h进样，测得样品中峰面积值的RSD=0.95%，结果表明供试品溶液在8h内稳定。 2.4.7重复性实验 按拟定的含量测定方法，对同一批样品，分别制备供试品液，测得峰面积值并计算含量，RSD=1.55%。结果表明该方法重复性良好。 2.4.8回收率实验 取已知含量的样品约0.5g，精密称定后，分别加入对照品溶液(0.9672mg/ml)按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并进样，测定含量，Nootkatone平均回收率为96.90%,RSD=1.6%(n=6)。结果见表3。 2.4.9样品含量测定取盐炙样品，按照“2.4.3”项操作,进样20μl注入液相色谱仪,按照上述条件测定,计算Nootkatone含量。 2.5结果分析 采用综合加权评分法，挥发油含量以含量较高为好，把第8号实验定为100分，宜用公式y1=100Y1/1.260;水浸出物以含量较高为好，把第3号实验定为100分，宜用公式y2=100Y2/22.456;Nootkatone的含量以含量较高为好，把第5号实验定为100分，宜用公式y3=100Y3/3.82。根据本例研究的目的，其权重系数为挥发油含量(y1)为0.3,水浸出物(Y2)为0.3,Nootkatone(y3)的含量为0.4,对3个单项相加,用公式Y=0.3y1+0.3y2+0.4y3=22.06y1+1.34y2+10.47y3求出各号的综合评分。结果见表3。表3回收率实验结果(略) 2.6方差分析见表4。表4方差分析(略) 结果表明，B因素炮制时间、C因素炮制温度对实验结果有显著影响,A因素闷润时间无明显影响,综合考虑盐炙后便于饮片干燥及成品水分含量等因数,盐炙益智仁的最佳工艺组合确定为:A1B2C2,即100g益 智仁用食盐2g加40ml水溶解,与益智仁拌匀，闷润30min在250?炒炙8min。 2.7验证实验称取同批药材3份各100g，按照优选的炮制工艺即用2g食盐加40ml水溶解后，与益智仁拌匀，闷润30min,与益智仁拌匀，闷润30min在250?下炒炙8min的条件进行重复实验。结果见表5。表5验证实验(略) 3讨论 经过研究确定盐炙益智仁的最佳工艺为:A1B2C2,即100g益智仁用食盐2g加40ml水溶解，闷润30min，在250?炒炙8min。实验其方法是稳定、合理、可行的,能适应于该饮片的工业化、规范化生产。 我们采用Nootkatone、挥发油、水浸出物的量化指标，综合评判益智仁盐炙的炮制工艺，使其火候评判客观化，克服传统单凭经验判断火候因人而异的主观性，使其方法更加科学、合理和可行。 【参考文献】 ,1,原思通.医用中药饮片学,M,.北京:人民卫生出版社,1999:437. ,2,国家药典委员会.中国药典，?部,S,.北京:化学工业出版社，2005:204.