【推荐】正常人外周血T淋巴细胞Ag-NORs表达分析

【推荐】正常人外周血T淋巴细胞Ag-NORs表达分析 正常人外周血T淋巴细胞Ag-NORs表达分 析 现代检验医学杂志2005年3月第2O卷第2期 J5,'1od1.abMed?March2005?Vo1.2O?No?2 正常人外周血T淋巴细胞Ag—NORs表达分析 周晖,江楚文z,符俊超(1.广东省人民医院检验科;2.广东省临床检验中心,广东广州 510080) 摘要:目的对正常人外周血T淋巴细胞Ag()Rs含量进行初步分析.方法将148例健 康体检者按年龄分为三组: 青年组,q-年组,老年组,利用KL型肿瘤免疫图像分析系统检测外周血T淋巴细胞 Ag—NORs含量,结果以银染核仁灰度 面积与细胞核灰度面积比值(1,S%)表示.结果T淋巴细胞Ag—NORs含量在各年 龄组内男,女比较,均无显着性差异(, >O.05).中,老年组I.S值比青年组低(P分别小于0.05,0.01),老年组又比中年组稍 低(P>0.05).I.S<6者所占比 例在中,老年组中也远高于青年组.结论外周血T淋巴细胞Ag—NORs含量存在随 年龄递减的趋势.提示人体在逐步走 向衰老的同时,T淋巴细胞的免疫活性也渐渐下降.在体检时可将T淋巴细胞Ag —NORs作为一个参考性的免疫指标.达 到预防和早期发现疾病的目的. 关键词:核仁组成区;T淋巴细胞;外周血;免疫性 中图分类号:R446.63文献标识码:A文章编号:1671—74l4(2005)02—005—02 DetectionofArgyrophilicNucleolarOrganizerRegionsof TLymohocytesinPeripheralBioodfromHealthyPersons ZHOUHui,J1ANGChu—wen,FUJun—chao(1.DepartmentofClinicalLaboratory, GuangdongProvincialPeople'sHospital,GuangdongGuangzhou510080,China; 2.ClinicalLaboratoryCenterofGuangdongProvince,GuangdongGuangzhou,510080,Chi na) Abstract:ObjectiveToinvestigateargyrophilicnucleolarorganizerregions(Ag-NORs)ofTlymphocytesinperipheral bloodfromhealthypersons.Methods148healthypersonsweredividedintothreegroups:young,middle—agedandold. Ag— NORsofTlymphocytesintheseindividualsweredetectedbyKLtumorimmuneimageanalysissystem.Theresults wereexpressedintheratioofsilxrerstainingnucleolusareatOnucleusarea(1.S).ResultsNosignificantdifferencesin Ag— NORsbetweenmenandwomeninthreegroupswerefound(P>0.05).I.Swashigherinyounggroupthaninmid— die—agedandoldgroups(P<O.05,P%0.01respectively)andwashigherinmiddle— agedgroupthaninoldgroup(,>0. 05).TherewasahigherincidenceofcasesinwhichI.Swaslessthan6inmiddle— agedandoldgroupsthanthatin younggroup.ConclusionTheimmuneactivityofTlymphocytesinperipheralbloodfromnormalpeopledecreaseswith advancingage. Keywords:nucleolusorganizerregion;T—lymphocyte;peripheralblood;immunity 随着社会经济的发展,生活水平的提高,人们例. 对自身的健康日益关注,由单位组织或个人主动进1.2试剂和仪器RPMI一1640 培养液,银染液, 行的体检越来越多.目前体检项目中,实验室检查低渗液,均为北京健尔康医疗设 备有限公司产品. 以肝肾功能,肝炎及肿瘤标志物等为主,较少涉及固定液自配.KI型肿瘤免疫图像 分析系统,北京 反映免疫功能的指标.而众所周知,在很多疾病的健尔康公司. 发生,发展中,机体的免疫状态起了非常重要的作1.3Ag—NORs检测?培养:无菌条件下取0.3 用.T淋巴细胞不仅是细胞免疫的主要效应细胞,,0.5ml抗凝血加到培养液中,37C培养72h.? 而且参与体液免疫并发挥重要的调控作用,在机体分离细胞:旋转培养瓶使上层细胞浮起后倒人离心 免疫系统中具有举足轻重的地位.而核仁形成区嗜管中,离心5rnin.弃去上清液后加入5m1低渗液, 银蛋白(argyrophilicnucleolarorganizerregions,置37'C10rain.加0.5ml固定液,混匀,离心弃上 Ag—NORs)可反映细胞增殖能力及活性.下面将对清液.加5rnl固定液并混匀,离心弃上清液,此步 正常人外周血T淋巴细胞Ag—NORs表达进行初骤重复一次.在沉淀物中加入0.3ml固定液制成 步分析.细胞悬液.?制片:将细胞悬液滴到预冷的玻片上, 1材料与方法自然晾干.?银染:水浴箱温度升至80,90C,隔 1.1研究对象健康体检者148例,年龄20,74水放铝板,将玻片放于铝板上,加银染液,盖上盖玻 Y,平均44.3y.分成三个年龄组:?青年组:40y以片,待涂片变成深黄色时取下用净水冲洗干净,自 下,男26例,女32例;?中年组:41,6OY,男23然晾干.?图像分析:将染片置显微镜下观察,用 例,女22例;?老年组:61Y以上,男2o例,女25KL型肿瘤免疫图像分析系统分析,计数3O个T ?基金项目:广东省医学科学技术研究基金项目(A2001785). 作者简介:周晖(1969一),女,副主任技师,主要从事临床免疫学研究. 6现代检验医学杂志2005年3Jj筇卷第2期JModLabMed?March2005?Vol?20?No?2 淋巴细胞银染核仁灰度面积与细胞核灰度面积比 值(I.S),该比值可反映Ag—NORs含量的高低. 1.4统计学处理数据以均值?差表示,组 间比较用f检验. 2结果 2.1所有体检者外周血T淋巴细胞Ag—NORs检 测结果见表1.各年龄组内男,女比较,均无显着性 差异(P>0.05).青,中,老年组Ag—NORs含量呈 递减趋势,中,老年组分别与青年组相比,均有显着 性差异,但中,老年组相比无显着性差异(P> 0.05) 表1各年龄组外周血T淋巴细胞Ag—NORs检测结果(j士s) 与青年组比较:*P<0.05,#尸<0.01 2.2对各年龄组外周血T淋巴细胞Ag—NORs低 活性表达的分析见表2. 表2各年龄组I.S<6%情况 3讨论在细胞间期,核糖核蛋白体基因 (rDNA)盘聚在13,14,15,21,22号染色体短臂上 的次缢痕上,称为核仁形成区.在核仁形成区有一 组相对分子量为100000的酸性非组蛋白,具有与 银离子结合的特性,可被硝酸银特异性染色,被命 名为核仁形成区嗜银蛋白(Ag—NORs).Ag—NORs 对rDNA转录生成rRNA具有调控与促进作用, 是rDNA转录活性及蛋白质合成水平的重要标 志,因此反映了细胞的增殖活性L1].最初Ag—NORs 用于研究遗传缺陷,2o世纪8o年代中期以来许多 学者将其引入肿瘤研究领域,发现肿瘤组织细胞 Ag—NORs的数目,面积在恶性肿瘤中比良性肿瘤 及正常人中要多,大,而外周血T淋巴细胞Ag— NORs含量则偏低.无论是肿瘤细胞还是外周血T 淋巴细胞的Ag—NORs,都与肿瘤的良恶性程度,分 化,转移与复发,治疗等有一定关系[z.33,而外周血 T淋巴细胞Ag—NORs含量则能反映T淋巴细胞 增殖能力及免疫活性,评价机体的免疫状态L3"].当 I.S在6,10之间时,提示免疫功能正常; I.S值为5,6时,提示免疫功能偏低:I.S 小于j时,提示免疫功能低下;大于10时.提示 免疫功能增强. 本研究中,各年龄组男,女之间外周血T淋巴 细胞Ag—NORs含量的差异无显着性(P>0.05), 说明正常人男,女间的细胞免疫功能并无差别.但 中,老年组I.s值比青年组低(P分别小于0.05, 0.01),老年组又比中年组稍低(P>0.05).I.S <6者所占比例在中,老年组中也远高于青年组. 外周血T淋巴细胞Ag—NORs含量随年龄增长而 递减的这种趋势,提示人体在逐步走向衰老的同 时,外周血T淋巴细胞的免疫活性也渐渐下降. 随着年龄的增长,人的胸腺逐步萎缩,骨髓干 细胞数减少,使T淋巴细胞生成能力和功能下降, 其产生的II一2和表达的II一2受体也相应减少.反 应性T淋巴细胞数量下降,无反应性未成熟的细 胞受刺激后不能正常分裂;Ca产生降低,肌酸磷 酸化减少,导致免疫细胞信号传导障碍;单核巨噬 细胞产生的IL一1a与T细胞产生II一2,II一3,II一6 以及淋巴细胞源性趋化因子合成减少.以上种种导 致衰老时细胞免疫功能降低,与本研究结果一致. 人体免疫力的强弱是机体排斥病原微生物,识 别和清除自身衰老残损组织细胞,杀伤和清除异常 突变细胞的重要体现,是健康的重要标志.一旦免 疫功能失调,可能导致各种疾病的发生,如:感染, 自身免疫病,恶性肿瘤等.在体检时可将T淋巴细 胞Ag—NORs作为一种参考性的免疫指标,藉此了 解机体免疫状况,在临床疾病发生前进行干预,达 到预防和早期发现疾病的目的,对今后临床医学模 式向预防医学模式的转变中具有一定的应用价值. 参考文献: [1]PichA,ChiusaL,FormiconiA.eta1.Proliferativeac— tivityisthemostsignificantpredictorofrecurrence innoninvasivepapillaryurothelialneoplasmsoflow malignantpotentialandgrade1papillarycarcinomas ofthebladder[J].Cancer,2002;95(4):784—79O. E2]LiLX,CrottyKA,PalmerAA,eta1.Argyrophilic stainingofnucleolarorganizerregioncountandmor— phometryinbenignandmalignantmelanocyticle— sions[J].Am—J—Dermatopathol,2003;25(3):19O一 197. [3]胡晓明,赵武述,丛笑,等.肿瘤病人T细胞核仁 嗜银蛋白和辅助性T细胞亚群变化[J].中华检验医 学杂志,2003;26(1):34—36. [4]孙巍,万文徽,朱军,等.以核仁形成区银染蛋白 等指标评价肿瘤患者免疫状况的研究[J].中华微生 物学和免疫学杂志,2003{23(4):27O一274. 收稿日期:2004—10—18