上海口岸首例邮轮大规模诺如病毒感染爆发的实验室快速诊断（可编辑）

上海口岸首例邮轮大规模诺如病毒感染爆发的实验室快速诊断（可编辑） 上海口岸首例邮轮大规模诺如病毒感染爆发的实验室 快速诊断 中国国境卫生检疫杂志 年 月第 卷第 期 ., 突 发 公 共 卫 生 事 件 上海口岸首例邮轮大规模诺如病毒感染爆发 的实验室快速诊断 王家栋’ 章 琪 方 筠 田桢干 韩晓辉 沈士伟 陆 晔 阎 俊 严 刚 周 璇 卢钟山 何宇平 李 平 史 方 王桂江 林建伟 朱美霞.上海国际旅行卫生保健中心,上海 ; .上海出入境检验检疫局,上海 ; .浦江出入境检验检疫局 ,上海 摘要 目的 总结上海出入境检验检疫局快速确认口岸首例邮轮大规模诺如病毒感染疫情的成功经验,完善 口岸公共卫生突发事件应急处置体系的建设。 方法 在上海口岸,对发生疫情的邮轮通过检疫查验和流行病学调 查明确疫情性质后,通过实验室有针对性的系统检测,对邮轮上发生的群体性急性胃肠炎进行快速诊断,从而实施有 效的预防控制。 结果 通过实验室多种方法检测,确认引发急性胃肠炎的病原体为诺如病毒。 结论 对口岸 首例邮轮大规模诺如病毒感染疫情的快速准确诊断将为口岸公共卫生突发事件应急体系的建设提供宝贵经验。 关键词 国际邮轮;诺如病毒;感染;爆发;急性胃肠炎;实验室;快速诊断 中图分类号 .文献标识码 ,, ’, ,,, ,, ,,, , ,, , , . . , , ; . , , ; . , ,【】 , . ,?, . . , . . 【 】 ; ; ; ; ;;诺如病毒,原型为诺瓦克样病%是由诺如病毒感染引起的,同时估计每年至少有 毒? 。该病毒最初在年通过免 万人感染该病毒。荷兰的 项研究结果明,超 疫电镜的方法从一起非细菌性胃肠炎爆发患者的粪 过 %的胃肠炎是由诺如病毒引起的。 便中分离得到『】。近年来,随着对该病毒分子流行病学 诺如病毒感染可以在人群中呈零星散发,也可 研究的深入,不同型别的毒株被逐一发现,因此将这 以在一个较为封闭的环境中大规模爆发,如邮轮、养 一 家族的病毒统一命名为诺如病毒。诺如病毒是导致 老院、学校、军营等场所。随着国际邮轮旅游业的日 食源或水源性急性腹泻的主要病原,可引起非细菌性 益繁荣,在大型邮轮上爆发急性胃肠炎的近年来 胃肠炎爆发,被定为 类病原。该病毒的特点 呈上升趋势。 项回顾性研究表明,从 年, 是发病率高、致病剂量低和抵抗力强。该病毒具有高 发生在美国口岸有记录的邮轮急性胃肠炎暴发感染 度感染性, 个病毒颗粒就能引起感染四。美国疾 人数超过乘客数 % 的事件数量呈显著上升趋势,且 很大程度上归于诺如病毒感染。而在 年,美国 病预防控制中心的 项研究结果表明,从年全美所有的非细菌性胃肠炎爆发的病例中超过 口岸有记录的 起邮轮急性胃肠炎爆发的事件中, 基金项目:上海出入境检验检疫局科研基金项目? 中国国境卫生检疫杂志年 月第 卷第 期 ., , . 在明确病原体的 起中有 起是诺如病毒。要求对已发病的旅客和乘务人员继续进行 隔离观察。 年月 日,上海出入境检验检疫局接 到某大型邮轮报告:该船载有乘客 人,乘务 通过对 例患病旅客的现场流行病学调查发 人员 人,自 月 日从泰国曼谷起航后,船 现,船上乘客来自世界各地,都是到达泰国集中后于 上陆续发现急性胃肠炎病例。 月 ? 日出现发病月 日从曼谷乘船起航,途经新加坡、香港、台 高峰,至月 日 : 发病人数已达人 截止 北、日本冲绳,于月 日抵达上海,最终目的地为 到 月 : 符合急性胃肠炎症状的病例达 天津新港。发病旅客年龄绝大多数在 岁以上,无 人 。上海出入境检验检疫局在接到报告后立即 性别特异性。在 月 日即有 人发病,其后陆续 启动应急预案,迅速开展现场检疫查验和流行病学 有散发病例出现,发病多 集中在 月 ? 日,分别 调查,明确事件性质;实验室收到样品后立即进行急 为 人和 人。部分发病旅客的临床症状仅仅为 性胃肠炎相关病原的快速检测,在 后就初步确认 次数不等的呕吐,并无腹泻症状。发病后部分旅客未 引起这次大规模急性胃肠炎的病原为诺如病毒。这 接受任何治疗,通过 ~ 的休息即痊愈,其余旅客 是检验检疫系统首次在口岸确诊大规模诺如病毒感 在接受治疗后也在较短时间内症状消除,提示该病 染爆发疫情。现将有关情况报告如下: 原感染后有一定自限性。对发病前内的饮食情 况调查发现所食用的食品较为分散,无明显趋向性, 口岸现场检疫查验与流行病学调查 有部分旅客在未进食情况下也发病。 上海出入境检验检疫局接到报告后,立即派 实验室检测 出卫生检疫人员迅速登轮进行检验查验。检验检 疫人员首先与船方代表和船上医务人员联系,获 上海国际旅行卫生保健中心实验室于月 得了船上所有旅客与乘务人员名单以及航行相关 日下午 : 收到 份样本 其中 份为排泄物样 文件;同时,进一步获得了当时已发病的名旅 本, 份为呕吐物样本 ,随即开展对 份样本的相关 客与乘务人员名单、发病的先后次序以及每天的 病原体筛查。根据病人的临床症状以及流行病学调 发病数。通过对船上医务人员的询问以及对部分 查结果,初步判定这是一起由与腹泻相关病原体引 病人的医学排查,发现发病人员的临床症状为次 起的急性胃肠炎疫情,因此,主要进行了腹泻相关病 数不等的腹泻或呕吐,或同时出现上述 种症状, 原体的筛查。根据实验室日常科研技术储备以及口 部分病人还出现全身乏力、恶心、腹部疼痛等其它 岸公共卫生突发事件应急处置试剂的配备情况,分 症状。疾病的流行病学特征为:发病人员所居住的 别通过常规临床检验、胶体金试剂、酶联免疫吸附实 房间呈散在分布,无明显聚集性;在时间上表现为 验 、检测、细菌分离培养鉴定等方法,对 从陆续的零星偶发到大规模爆发,持续时间长达 霍乱 。群、霍乱 蚰群、 型肉毒素、 型葡萄球菌。根据发病人员的临床症状和流行病学特征, 肠毒素、轮状病毒、诺如病毒、志贺菌、副溶血弧菌、 初步判断为 起由不明病原体引起的急性胃肠炎 伤寒沙门菌、致病性大肠埃希菌、大肠埃希菌 进 爆发疫情。 行了快速筛查和进一步检测。 针对上述疫情,立即采取如下卫生检疫措施: 胶体金试剂和 快速筛查实验结果显 要求船方提供船上所有人员的健康申报情 示,在采集的 份样本中未检出霍乱弧菌、 型肉 况以及乘务人员健康证书; 毒毒素、 型葡萄球菌肠毒素以及轮状病毒。采用对船上所有重要公共场所如厕所、游泳池、 方法检测诺如病毒,在采集的 号和 号 餐厅、走道、楼梯扶手、电梯等处立即进行消毒; 水样便样本中发现诺如病毒抗原呈强阳性,提示 立即对已发病的乘务人员进行甄别,重点对 诺如病毒可能是引起此次大规模急性胃肠炎爆发 饮食相关从业人员进行检疫查验与流行病学调查; 的重要致病原。该实验结果于当晚 : 上报。同立即对发病的旅客开展现场流行病学抽样 时,我们继续开展了其余相关病原体的核酸 调查; 检测和分离培养工作。通过这 种方法又进一步 要求船上医院提供发病人员相关标本,同时 排除了志贺菌、伤寒沙门菌、副溶血弧菌、霍乱弧 对船上厨房的食物 蔬菜、水果、熟食等 、饮用水以 菌、致病性大肠埃希菌和大肠埃希菌 钾,结果见 及从业人员进行采样; 表 。? 中国国境卫生检疫杂志年 月第 卷第 期 .,, . 表 急性胃肠炎相关病原体快速筛查检测结果 粪 便 软 便????? 一 ? ~ 一 ~ 粪 便 软 便 :? :? :? :? :? :? 粪 便 水样便 一 一 一 一 一 ~粪 便 水样便 一 一 一 一 一 ~ 粪 便 稀 便 一 一 一 一 一 ~呕吐物 水 样 一 一 一 一 一 ~ 粪 便 软 便? ?一 、 一??? ???粪 便 软 便 :? :一 :一 :? :? :?粪 便 水样便 一 一 一 一 一 一粪 便 水样便 一 一 一 一 一 一粪 便 稀 便 一 一 一 一 一 一呕吐物 水 样 一 一 一 一 一 一 注:“一”阴性结果,“ ”阳性结果。 中国国境卫生检疫杂志 年 月第 卷第 期 . . 在?结果阳性的基础上,进一步对 为进一步确认诺如病毒是引起本次邮轮急性胃 肠炎爆发的病原体,我们对上述 份样本进行了诺 个产物进行测序并经 比对,发现所有的 条核酸序列都与 中诺如病毒序列同源, 如病毒的核酸检测和电镜检测。通过抽提病毒核酸、 且同源性在%~ %之间,证实从标本中扩增得?扩增诺如病毒的依赖的聚合酶 区域 ,发现不仅 号和 号样本出现诺如病 到的片段为诺如病毒。同时,上海出入境检验检疫 局食品中心从送检的邮轮厨房蔬菜混合样品、蓝 毒特异性条带,同时在 号、 号粪便标本中和 号 莓和树莓样本中通过 ?方法也检出诺如病 呕吐物标本中也检出诺如病毒核酸表 ,且分子量 毒核酸 表 ,再次证实诺如病毒是引起本次邮轮 大小与预期相符;将病毒抗原滴度较高的 号与 大规模急性胃肠炎爆发的病原体。上述实验结果 号标本经过病毒分离浓缩、负染,通过常规电镜方法 为口岸现场指挥部制定决策措施提供了技术依 在镜下也观察到相应病毒颗粒,且颗粒大小形态与 据。 文献报道一致 结果略 。 表 诺如病毒相关检测方法检测结果 空问相对狭小并且较为封闭,人员高度集中,给疫情 讨论 的发生提供了条件。 诺如病毒是引起急性病毒性胃肠炎爆发的主 腹泻标本以及贝类等水产品是 诺如病毒检 测的主要对象,目前用于检测该类病毒的方法主 要病原体之一,对公共卫生安全具有重要影响。由 要有电镜法、核酸检测和免疫学检测等方法【。。 于该病毒的高度易感性,因此常常在一些特定场 由于诺如病毒型别的多样性以及较高的突变率, 所,比如邮轮、学校等处引起大规模流行,造成大量 人群在短时间内感染,从而给社会正常生活造成影 目前还没有哪一种方法 能完全准确地检测到所 有病毒。免疫学检测主要通过检测标本中 响。邮轮作为一种特殊的交通旅行工具,一方面在 一 的抗原来确认诺如病毒。相比电镜法和核酸检测 个相对封闭环境中承载大量游客;另一方面在世 界各地不间断航行与靠泊,对病原体在轮船与陆地 方法,该方法操作简单,实用性较强,便于推广。 然而同样由于诺如病毒型别的多样性,对该方法 之间的传播与流行产生重要影响。一旦在邮轮上发 生大规模传染病疫情,势必对停靠地口岸造成重大 的应用产生了限制。等在 年首次报告 公共卫生威胁,因此对邮轮的卫生检疫查验是口岸 了对 种新上市的商品化诺如病毒 检测试 剂盒的评估结果。结果表明,与传统的 卫生检疫工作的重点。近年来,随着中国经济的日 益繁荣,在国内口岸停靠的外国邮轮的数量每年都 方法相比,和这 个品牌的试 剂盒对诺如病毒的检测灵敏度分别为 %和 呈上升趋势,在带来大量游客的同时,也带来了更%,特异性为 %和 %?。之后的 项评估 多发生输入性传染病疫情的风险。因此,有必要进 一 步加强口岸应对公共卫生突发事件的核心能力 结果虽然有提高,但灵敏度也仅在 .%. % 建设【。 和%~ . %之间。在本次实验室检测中, 首先通过上述 种诺如病毒抗原检测试剂盒的 从诺如病毒的流行病学角度来说,被病毒污染 的食物、饮用水是主要的传染源。病毒主要通过粪一 其中一种在较短时间内初步从 份标本中检出 份诺如病毒阳性;为了进一步确认该病毒,又同 口途径传播,在大规模人群聚集时,还可以通过人与 人之间的接触传播。易感人群主要为体弱多病、老人 时开展了 ?方法检测,结果在这 份标本 中, 份表现为核酸阳性,同时,进一步核酸序列 以及免疫功能低下者。通过本次疫情的流行病学调 查发现,该邮轮所载游客多为老年人,而且邮轮内部 比对的结果也证实该特异性序列属于诺如病毒;