【doc】野油菜黄单胞菌原质体分泌黄原胶的电镜观察

【doc】野油菜黄单胞菌原质体分泌黄原胶的电镜观察 野油菜黄单胞菌原质体分泌黄原胶的电镜 观察 微生物学通报2001年28(5) 野油菜黄单胞菌原生质体分泌黄原胶的电镜观察 刁虎欣粱兴杰粱凤来刘如林 (南开太学截生暂系天津300071) 接耍:经透射电镜观察首次发现野油菜黄单胞菌 (Xantt~monascampesWls)原生质体在以 蔗糖为底物的高荸营养蔽中,船台成并分泌丝状黄原胺. 关t饲:野油菜黄单胞苗原,原生质体.黄原胶 中圈分粪号:Q93文献识标码:A文章编号:0253?2654(2001)05—6018—03 STUDYONSECRETEDXANTc叫血ngsacr0e,o撼sl】bsB?e Kword:Xandmmonasca,rc,e.m~,Protopla~,t,X跚Ih柚 黄原胶(Xanthan)是野油菜黄单胞菌(Xanthomoaascampestris)合成并分泌的一种 用途十分广泛的微生物胞外多糖.研究发现,处于对数生长期的菌体细胞不合成分秘 丝状黄原胶只有终止生长的细胞才台成分秘丝状黄原胶”0.控制菌体细胞壁多糖 和黄原胶胞外多糖合成的共同的糖基载体脂是存在于细胞膜的十一聚类异戊二烯酵磷 酸脂….膜内该物质含量甚嫩时,首先用于胞壁多糖合成促使细胞生长,待细胞终止 生长后才用于黄原胶合成.最新研究表明_4J,黄原胶分子是在终止生长的菌体细胞膜 的糖基载体脂上合成的,糖基载体脂将其运往膜外,使细胞分泌丝状黄原胶.据此, 我们认为人工制备的无生长能l力的野油菜黄单胞菌原生质体,在适宜的高渗营养液中 培养,能台成并分秘丝状黄原胶.但该研究国内外尚未见报道.我们在制备原生质体 的基础上,进行了其黄原胶合成与分秘的初步探讨,本文报道其结果. 1材料与方法 1.1菌种 野油菜黄单胞菌(X.cam!aestris)N.K-01,由南开大学微生物系分离并保存. 1.2液体培彝基与培养条件 培养基:蔗糖10g,蛋白胨5g,牛肉膏3g,酵母膏1g,蒸漓水配制定容lL, i,n7.0.培养条件:250mL,锥形瓶分装50mL,8层纱布扎瓶I=l,灭菌.接种N.K-01 菌苔5环,置于220r/rain旋转摇床28?培养16h,菌体细胞处于对数 生长期,不合成分 泌黄原胶.培养至24h,合成并分泌黄原胶. 牧?日期:200鹕,国日期:20004~-30 2001年28(5)微生物学通报l9 1.3原生质体制备与高渗培养液培养 将处于对数生长期且不合成分泌黄原胶的N.K-O1菌体细胞,用0.05mol/LElYrA 和0.1%SDS处理,溶解除外壁层脂多糖,用高渗溶液悬浮菌体细胞,加入10/.~mL溶 菌酶液,30?酶解30min,溶解消化内壁层肽聚糖离心收集原生质体.将未台成分泌黄 原胶的,原生质体置于以蔗糖为底物的高渗培养液培养中,7Of/rain,28?振荡培养 72h,用透射电镜观察该原生质体是否台成分泌黄原胶. 1.4透射电镰观察 将制备的各种待观察样品,用重蒸水适当稀释,沾铜网,7.角真空喷镀钯铱台金, 或用钼酸铵负染色,用透射电镜观察. 2结果 2.1处于对数生长期曹体细胞与终止生长曹体细胞透射电镰观察结果 图I是两类不同 菌体细胞经钼酸铵负 染色透射电镜显微照 片.从图1A看到, 处于对数生长期分裂 的菌体细胞不合成分 泌丝状黄原胶;而从 图IB看到,对数生 长期后终止分裂的菌 体细胞合成分泌丝状 黄原胶. AB 图1两类不同菌体细胞钼不用于脆外多糖黄原胶的合成.只有终止生长后,糖基载 体脂才用于黄原胶合成. 野油菜黄单脆菌是G细菌,细胞壁主要由脂多糖和肽聚糖组成.先由EDTA和 SDS消化脂多糖,再用溶菌酶在适宜条件下去除肽聚糖是制备原生质的好方法. 本研究首次发现野油菜黄单脆菌原生质在蔗糖为底物的高渗培养液中继续培养,合成 并分泌黄原胶.这一发现,不仅直观地证明了Leipi.L等提出的黄原胶 分子在膜内糖基载体 脂上合成并从膜内运送到膜外的科学论断,而且证明原生质体失去合成细胞壁能力后其膜 内的糖基载体脂完全用于脆外多糖黄原胶的合成,故原生质体合成分泌黄原胶. 参考文献 [1]Suthede~1wAdvanceinmicrobia]P10,1982,l8:143—213. [2]刁虎欣,粱风束,刘如#,等.南开大学,1988,2:34—43. [3]刁虎欣,赵太簋擞生暂学杂志,1990,1o(I2):136—141 [4]Leil~L,cal盥DR,I~mKERTMJL?IBl0fBectes’iology,1993,175(9):2499—2500. 一 株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究I. 黄红英方海红刘爱民夏颍吕正兵张林普 {江苏省农业科学皖土壤肥料研究所南京2tOm4)(安徽师范大学生命科学院芜瑚241000) 摘要:从皖北盐碱地土样中分离到01i菌株,对其进行了菌种鉴定以及臆外碱性蛋白醇的初 步研究.结果表明:01I菌株符台地衣芽孢杆菌种的特征,但该苗芽孢端生,孢囊蘑太,中度 耐盐,高度耐碱,可在NaCl浓度为13%和pHI1的培养基中生长.这些特征又不同于该种几个 模式株,眉而将011菌株鉴定为地衣芽孢杆菌的一个亚ewasstadic~iResultsin,careditdlaractetscomanottto目h’chentformis,bmd‰hmknown typlcat曲面? ofBacffluslic~nlformOinspcrangeshape,spore1ocatic~toleraet姆?t0saltandb 牧稿日期:200?盯,蕾目日期:2000-09-15