氟化钠对催乳素诱发分泌影响的体外研究

氟化钠对催乳素诱发分泌影响的体外研究 j,占) 中国地方病学杂志1993年第l2卷第6期 ? 论着? 弓氟化钠对催乳素诱发分泌影响的体外研究? 中国医科大学神经内分泌研究室@谢启文R罗,. 摘要应用半侧垂体培养和脒垂体原代单层细胞培养方法观察了NaF对PRL基础分泌和TRH, VIP及metocloptamide诱发分泌的影响.结果是1,氟中毒太蔓半徊垂体TRH诱发的PRL分泌降低. 2,NaF对棘垂体细胞PRL基础分泌和TRH,VIP和metoclopramide请筮分泌均具有押制作用.提示氟 中毒时氘化物可能通过对垂体的直接作用而抑{{PRL分泌. 关键词堡墨墨!兰棘垂体原代单层细胞培养促甲状棘-囊素释放襄素至鲨丝腿 灭吐曼 氟中毒是诸多器官受累的垒身性疾病,但是有关 它对神经内分泌系统的影响,尤其是对下丘啮垂体系 统动能影响的报道甚少.有资料报道氟中毒时大鼠乳 汁分泌受到抑制.同时血清催乳索(Prolaetin?PRL)水 平降低】.但是关于氟中毒影响PRL分泌的机理并不 完全清楚.本文应用半侧垂体培养和腺垂体原代单层 细胞培养技术,观察丁NaF对PRL基础分泌和促甲状 腺激素释放激紊(TRH),血管活性肠肽(VIP)和灭吐灵 (metocIoptamide)诱发分泌的影响.求探讨氟中毒影 c同PRL分的机理. 材料与方法 一 ,氟中毒太鼠半1冀j垂体TRH诗蛊PRT分泌的 变化取氟中毒大鼠(喂饲含氟O.222mg/ml水6千 月)10只,正常大鼠10只.断头后分别摘取半侧垂体. 置于台有2ml199培养液的培养瓶中,将培养瓶放入 Dubnoff代谢震荡培养箱中.予培养lh后,弃去堵养 液,开始正式培养,共2h.正式培养的第lh实验组,对 照组培养液内不加任何处理因索.而第皆换以古有 TRH1Dng/ml的199培养液2ml分剐于第】h终束却 第2h终末抽取全部培养渣.半侧垂体培薄的条蚌是 37-C.5~co,950,震荡频率为5O次/分.上述宴验 完成后取出半倒肄.用缓冲液冲}先,吸千,秸厦. 】MHCI制成匀装.将抽取的培养液.垂津匀浆一30.C 保存.以双抗体法涮定PRL古量,太鼠PR[叔免药盘 誉垦奎星辇萼羞摹蓑鐾羲室,吉林市江南太街t..号 —— 326—— 由NIDDK提供,标准品为NIDDK--rPRL--RP--2 二.腺垂休原代单层细胞培养 1,实验方法以无菌操怍迅速摘取臁垂体,用 Hank's液瀑洗3次.剪碎至Imm小块.用含25BSA 的D—H8nk's液漂洗3次,O.25胰蛋白酶消化 25rain,再用含2.5BSA的D—Hank's液漂洗.离心 IOOD转min.6mitt.如此反复3敬.尼龙同过滤后计数 细胞,以含20小牛血清,2retool/L答氨酰胺的RP— MI—l6{O培养液将细胞浓度调至0.5×10ceil/ml并 1苔盼兰检查细胞活性在9O以上.将细胞悬液分 装入2|孔塑料细胞培养板内.每了L0.5×113%e11.1ml 置37-C,5~co培养箱内培养96h,待细晦贴壁并长成 单屡后.换无血清RPMI—lG40培养液.同时加处理围 索,培养3h后,取上清培养涟待;则PRL.PRL放免测定 方法与半侧垂体培养相同. 2,实验分组(每蛆6孔平行)-(1)空白对照纪;(2) NaF蛆,终浓度舒剐为0.002,0.O11和0022ragmI; (3)单纯TRH组,终浓度为1O—M;(4)TR,+NaF组, TRH终浓度同(3}(5)单纯v】P组,终浓度为1D-;M; (6)VIP4-Naf组vrP终洁嶷:fj';H"灵纽, 进浓度为!OMfr8)灭:li,灭HZ搀;霞 同(7) j:进({,b,8)各组中NaF终浓摩均矗-1船"g 1_ 爻驻中蜀翌鼓撂::s.纽闸燕异的矗蔷性 舟l检验法检验 结果 一 , 氯中毒太鼠半侧垂体培养时PRL分泌砷TRH的反应(1) Table1?Changes0IPRLreleasee[[1~lencyInducedbyTRHInculturedsereIpItullaryinfIu0 r0lIlra P<0?05,bVSj,dVSc, 以2h内半侧垂体PRL释放母号垂体剩余量之和 作为半侧垂体PRL的总量,并分jjIli葬每小时PRL释 放量与总量之比值,把此比值作为该垂体的释放效率 (releasoefficiency)?,分别计算各组基础状态(第lh) 和TRH诱发(第如)的PRL释放效率.结果由表】看 出对照组TRH诱发后的PRL释放效率显着升高,而 实验组贝崃见显着井高;同时实验组半侧垂体PRL总 量显着低于对照组上述结果表明氟中毒大鼠离体垂 体对TRH诱发的pRL分泌反应性降低. 二.NaF对腺垂体单层蛔胞PRL基础分泌的影响 (田1) 一 Fig—Th . einhibitionofN日FOY]PRLSecret/oninanterior pituitarycelIsInVItro(n一6) *P<0.05P<001comparedw[thcontrol 出匿】旨出.加.^NaF后腺垂体单层细胞PRL分 洱低?且其降低程复NaF浓度星一定剂量一效应 黑最,其中O.011l和0.022~n~./mlNaF均可显着降低 PRL分泌.由此可见NaF对体外培养的垂体单层细胞 PRL基础分泌具有抑制作用. 三,NaF对穰垂体蛔胞TRH,V1P和无吐曼诱发 PRL分泌的影响(田2) _ a rI广A F.2TheinhibitionofNaF日nPRLsecreIionJndacedby TRH,V1PandmetocJopramldeinanteriorpituitarycells Vitrofn一6) Ae:2controlBI::aeontrolC?ntr0l ?R}IIV1P0mt.cl0ra删de IITRHNaFIVLPNaF?舭t0clo口tamide NaF 口<001bVS,cvSb m圉2A,B,C可看出,单纯TRit,V和灭吐曼均 一一 327— 一目??. 使垂体细胞PRL分显着升高,而TRH,VIP或灭吐 灵组加NaF后其PRL水平则分别显着低于单纯 TRH,VIP和灭吐灵组,说明NaF使骧垂体细胞TRH, VIP和灭吐灵诱发的PRL分泌降低. 讨论 大量资料表明TRH,VIP和灭吐灵均可在体外刺 激腺垂体细胞PRL分1,但是迄今为止尚未见到 氟化物对垂体细胞PRL分有何影响的报告.从车实 验中雷到NaF对离体垂体细胞PRL基础分具有抑 制作用,NaF使垂体细胞TRH,VIP和灭吐灵诱发的 PRL分珏降低,说明NaF使垂体PRL细胞对上述刺激 因子的反应性降低.这与作者曾在invivo实验中观察 到氟中毒大鼠TRH诱发的PRL分降低是一致 的].研究已经证明TRH刺激PRL分的机理是通 过PRL细胞膜上的TRH受体而实现的.VIP也是通 过存在在PRL细胞膜上的相应受体而刺激PRL分泌 的叫.上述实验结提示氟可能作用于垂体PRL细胞 膜受体或受体后过程的某十环节而使PRL分泌降低. 灭吐灵在invivo实验中怍为多巴胺受体阻断剂而刺激 PRL分泌.在本实验中NaF使体外培养的垂体细胞灭 吐灵诱发的PRL分泌降低,其机制仍有待于进一步探 讨. 在半1更l垂体培养中.氟中毒大鼠半侧垂体TRH诱 发的PRL分降低.这与上述单层细胞培养的结果是 一 致的.因此,本实验结果说明氟化钠对垂体PRL分泌 具有直接抑制作用.有作者报道氟中毒时大鼠下丘脑5 HT含量及更新率均行降低.并认为上述下丘脑机能 紊乱是氟中毒时PRL分泌改变之机制].可认为氟 中毒除怍用于下丘脑外,也可能通过对垂体的直接作 用而抑制PRL分泌. (本实验所用大PRL最克药盒由美目NIDDK 提哄,谨此致谢!) 参考文献 1袁柱巷.等,氟中毒抑制太鼠泌乳的实验研究,生理学 报,1991.43(5){512,s17 2SmithMS,Efleetofpuisatllegonadotropin一"l?1nB hormoneoilreleaseofluteinizinghormoneandfoltiole--stimu- ]atinghormoneInvitrobyanteriorpituitari~fromlactating andcyclingrats,Endoctinol,1982I110l882~887 3MatsushitaN,Km0Y,Shimats~AIandlauraH,E/- cbofV1F",TRHtGABAanddopamineoRprolaeti~re]~ase fromsuperfusedratanteriorpituitarycalls,LifeSci,1983,32: 1263,1269 4RubetgtM,et^】.Stimu]ationofptolactinr~Jeascby vasoactiveintc~tinatp~ptid~.EufJPharmaeoi1978,51?319, 320 5BesserG,M.]DeJttaJaG,StuhbsWA,ChJopromazine, hainperidoi,metoclopramid~anddorapcridon~re]caseprolaetiil throughdopamineantagonismatlowco~cefltra{ionbu!para- doxioallyinh~itproJactinreleaseathighconcentrations?BrJ Pharma~ol,1980.71569,573 6馀毽侮,等.氟中毒太鼠睦哌嚷吗啡和TRF1诱发的 乳棠分泌岫变化,中国地方麝学杂志t1992,11(6)l332~334 7谢启文神经内分泌学.沈阳:辽宁科技出版杜.I990. l76,I84 8袁嘏德,荨.雌性太鼠氟中毒时下丘脑5一HT含量及 更新事的变化.氟研究堪讯,1989,3:19~21 (收稿1993—03一l9修回1993—0706) StudiesofNaFoHProlaetlnReleaseinRatinVifzo XuYimeJ,tel ChinaMedicalU11iversityNeuroendocrineResearthIabrEftoryShenyang EffectsoiNaFoHPRLreleasejfldiapersedaFItCriorpi【uitatYciswereobserved-TheresultsEthatPRL basa]reLeaseandinducedsecYetionbYTRt1.VIPandmetocLoprarnL,le~verchothredu北 dhenaddedNaFinme' umofanteriorpitnit[ireelIs?ThereactionofPRLreLeaseon丁 RI1w[seseendecreasedinclJLcuredsLpitu itarywithfluorosis.Ourresultsindicatedthatfluoridemaydireet]yaffectpituitarycellstoinhi bitPRLsecretion- Keywordsprolactin;NaFFTRl{FVTP{me~oclopralnid;a13teriorpituLtary;ce[1CUiture —— 328——