姬松茸多糖提取方法的研究

姬松茸多糖提取方法的研究 () 福建师范大学学报 自然科学版() 14 1: 85, 89JO URNAL O F FUJ IA N TEACHERS UN IVERS ITY()NA TURAL SC IENCE 1998 α 姬松茸多糖提取方法的研究 杨梅周小兰施巧琴 () 生物工程学院 () 子实体多糖和菌丝体多糖提取的条件. 对子实体多 探讨姬松茸 摘 要A g a r icu s blaz e i M u r r ill 糖和菌丝体多糖的提取率进行比较, 得出子实体多糖提取的最佳条件为 1?10 的加水量、100?的提取温度、5的提取时间. 菌丝体提取的最佳条件为 1?30 的加水量、100?的提取温度、5的提取时 h h 间. 在相同条件下, 菌丝体提取到的多糖比子实体的多. 并研究了不同提取剂对姬松茸多糖提取的影响, 实验结果表明, 用草酸、草酸铵溶液浸提姬松茸, 可提高多糖的提取率. 关键词 姬松茸子实体多糖, 姬松茸菌丝体多糖, 提取 1 引言 姬松茸 () 是一种珍贵的食药兼用的真菌, 含有多种有效成 A g a r icu s bla z e i M u r r ill 份, 其中姬松茸子实体糖是一种宿主免疫增强剂, 具有抗病毒、 抗肿瘤、 调节免疫功能 1 , 3 和刺激干扰素形成等功能. 目前, 国外特别是日本对姬松茸的研究十分重视, 他们从 姬松茸子实体中提取多糖. 而人工栽培子实体, 生长周期长达半年之久. 采用深层发酵 培养姬松茸菌丝体, 可把生产周期缩短到半个月之内, 而且生产工艺简便, 培养易得, 生产成本大幅度下降. 我国对姬松茸研究较迟, 目前尚未见到对姬松茸子实体多糖 或菌丝体多糖研究的报道. 作者通过对姬松茸子实体多糖和菌丝体多糖提取条件的研究, 证明菌丝体多糖的提取率高于子实体. 关于姬松茸子实体多糖的抗癌性国外已经有文献 4 , 5 证明, 对于菌丝体多糖是否具有同样的药效, 需进一步验证. 若姬松茸菌丝体多糖有 相似的药效, 那么开发姬松茸菌丝体有着广泛和深远的意义. 1 材料和方法 111 材料 11111 姬松茸子实体: 由福建省食用菌开发中心提供. 烘干后粉碎, 过 40 目筛. 6 () () 11112 姬松茸菌丝体: 1母种斜面: 培养基. 2发酵培养基: 3% 玉米淀粉、PDA 2% 蔗糖、015% 酵母粉、013% , 011% ?7、1100、18.ƒ5KH 2 PO 4 M gSO 4 H 2O m g m lV B 1pH 2 ( ) 3菌丝体培养: 一级摇瓶 250三角锥形瓶, 装量 50, 接 015菌种一块. 二级摇m l m lcm 瓶 250三角锥形瓶, 装液量 50, 移 10% 液体菌种, 置旋转式摇床,转速 220 ƒ, m l m lrm in 26?培养 8 天. α 收稿日期: 1997- 09- 11. 112 方法 () 11211 提取方法: 1样品制备: 发酵结束后, 将菌丝体 经蒸馏水冲洗 数次后, 于 60? ( ) 烘干, 粉碎后过 40 目筛.2多糖提取: 取过筛的子实体或菌丝体各 1, 选用 gL g 3 ( ) 3正交表, 表头见表 1. 按表 2、表 3 中实验组合的加水量、提取温度和提取时间 提取. 提取液经离心后取上清液, 加入 4, 5 倍体积的 95% 乙醇, 过夜. 再离心去上清液, 沉淀用蒸馏水溶解, 加入 试剂, 过夜去除蛋白, 取上清液, 加入 5 倍体积 95% 乙Savge () 3测定方法: 用蒸馏水溶解多醇沉淀多糖. 再离心, 弃上清液, 所得沉淀即为多糖. 糖, 苯酚硫酸法测定. 以葡萄糖计, 721 分光光度计于 490处比色. nm 2 结果与分析 211 几种提取因素对子实体多糖和菌丝体多糖提取率的影响 3 ) ( 选用 正交表, 按表 2、表 3 中实验的加水量、提取时间、提取温度提取子实3L g 体多糖和菌丝体多糖. 每个实验各做 3 个重复, 取平均值.结果见表 2、 表 3. 3 () 表 1 3表头设计L g 代号 因素单位水平 加水量1?10?20?30A m l 11 ? 70 90 100 提取温度 B h 提取时间1 3 5 C 3 )(表 2 3 表姬松茸子实体多糖提取实验结果及计算表L g 因水 平素 实验结果()A B C m g 组 合 196 1070 1 1 1?10 1?10 2 90 3 14116 1?1021176 3 100 5 1?2014121 4 70 3 1?2017184 5 90 5 1?2010180 6 100 1 1?309112 7 70 5 1?308 90 1 10188 1?309 100 3 13104 46188 I 34129 32164 j I + ? + , jjj42185 ? 42188 41141 j = 122177 33104 45160 48172 , j 15163 11143 10188 I j I + ? + , jjj14128 14129 13180 ? j = 40192 11101 15120 16124 , jϖ4162 R3177 5136 j 从表 2 的相差计算和因子与得率的关系中可见, 各因子的最优水平组合是, A 1B 3C 3 因此确定姬松茸子实体最适提取条件为 1?10 的加水量, 100?的提取温度, 5的提取时 h 间. 从表 3 的相差计算和因子与得率的关系中可见,各因子的最优水平组合是, A 3B 3C 3 因此确定姬松茸菌丝体最适提取条件为 1?30 的加水量, 100?的提取温度, 5的提取时 h 间. 212 不同提取剂对姬松茸子实体多糖和菌丝体多糖提取的影响 采用表 2、表 3 得出的提取子实体多糖和菌丝体多糖的最佳提取条件, 以蒸馏水为对 用不同浓度的草酸溶液、 草酸铵溶液提取多糖, 结果见表 4. 照, 3 ) (表 33表姬松茸菌丝体多糖提取实验结果及计算表L g 水因 平素 ()A B C 实验结果 m g 组 合 141 670 1 1 1?10 1?10 11163 2 90 3 1?1018187 3 100 5 1?204 70 3 7172 1?205 90 5 17154 1?2013104 6 100 1 1?307 70 5 17136 1?308 90 1 14167 1?309 100 3 31195 36191 I 31149 34112 j + + , I ? jjj38130 ? 43184 51130 j = 129119 63198 63186 53177 , j 12130 1011150 137 I j I + ? + , jjj12177 1417161 110 ? j = 4614 21133 21129 17192 , jϖ9103 R10177 6156 j 表 4草酸和草酸铵提取姬松茸子实体多糖和菌丝体多糖 子实体多糖得率比较菌丝体多糖得率比较 提取剂()()()()% % % % 2107 179 3蒸馏水100 100 1% 草酸铵 2139 116 4192 130 3% 草酸铵2150 5149 121 145 6% 草酸铵2195 6161 143 174 1% 草酸3106 4177 148 126 3% 草酸163 130 3138 4193 6% 草酸3141 165 5136 142 表 4 可以看出, 用不同浓度的草酸、 草酸铵提取姬松茸子实体多糖比用蒸馏水提取 的高, 其中用草酸铵提取比蒸馏水提取高 16%, 43%. 用草酸提取比蒸馏水提取高 48% , 65% , 而 3% 草酸和 6% 草酸两种浓度之间的提取无明显差异. 从表 4 还可以看出, 用不同浓度的草酸、 草酸铵提取姬松茸菌丝体多糖比用蒸馏水 提取的高, 其中用草酸铵提取比蒸馏水提取高 30%, 73% ; 用草酸提取比蒸馏水提取高 26%, 42% , 可以看出 6% 草酸铵, 6% 草酸效果最佳. 3 结论 () 1根据正交实验筛选姬松茸子实体多糖的最佳提取条件为 1?10 加水量, 100?的 提取温度,的提取时间. 姬松茸菌丝体多糖的最佳提取条件为 1?30 加水量, 100?的5h 5的提取时间.提取温度,h () 2姬松茸子实体和菌丝体用草酸铵、草酸溶液提取, 可提高姬松茸多糖的提取率. 6 () 3据国外文献报道, 用草酸和草酸铵溶液不仅能提高姬松茸子实体多糖的提取 率, 而且使多糖的抗癌性有所提高. 本实验已证明草酸和草酸铵溶液对姬松茸菌丝体多 糖的提取率有提高作用, 而对于能否提高其抗癌性, 还有待于进一步研究. 参考文献 () 1 1994, 黄年来.巴西蘑菇值得研究推广. 中国食用菌,, 913 1: 11 黄年来. () 巴西蘑菇值得研究推广. 中国食用菌, 13 2: 8, 9 2 1994, 史刚荣. () 3 姬松茸研究的现状与展望. 江苏食用菌, 1995, 16 4: 21, 22 4 , . 2 T ak a sh i M izuno T o sh ih ik e H ag iw a raA n t itum o r A c t iv ity and som e P rop e r t ie s o f W a te rso lub le “”, . . . Po ly sacch a r ide s f rom H im em a t su tak eth e F ru it ing Bo dy o f A g a r icu s blaz e i M u r il lA g r icB io l () , 1990, 54 11: 2889, 2896C h em , . 25 T ak a sh iM izuno R yu ich i Inagak iA n t itum o r A c t iv ity and Som e P rop e r t ie s o f W a te rin so lub le H e t2 2“”, . . . ,e ro g lycan s f rom H im em a t su tak eth e F ru it ing Bo dy o f A g a r icu s blaz e i M u r il lA g r icB io lC h em () 1990, 54 11: 2897, 2905 () 杨梅. 姬松茸菌丝体深层培养及氨基酸成份分析, 中国食用菌. 1997, 16 3: 41, 43 6 Stud ie s on the Ex tra c t iion M e thod s of Po ly sa ccha r ide s f rom A g a r icu s b la ze i Y an g M e i Zhou x ia o lan Sh i Q ia oq in g ()B ioen g in ee rin g C ol log e A bstra c t In th is p ap e r, th e ex t rac t in g co n d it io n s o f A g a ricu s bla z e i f ru it in g bo dy .po ly sacch a r ide s an d m yce lium po ly sacch a r ide s f rom A g a ricu s bla z e i a re stu d ied T h ro u gh com p a r in g an a ly se s o n th e ex t rac t in g ra t io b e tw een f ru it in g bo dy po ly sacch a2 , r ide s an d m yce lium po ly sacch a r ide sw e f in d th e b e st co n d it io n s to ex t rac t f ru it in g bo dy 1 ?10 , 100? , po ly sacch a r ide s a re w ith w a te ra t an d fo r f ive ho u r sw h ile m yce lium 1?30 , 100? . po ly sacch a r ide s is w ith w a te ra t an d fo r f ive ho u r sA t th e sam e co n d i2 , . t io n sm o re po ly sacch a r ide s can b e ex t rac ted f rom m yce lium th an f ru it in g bo dyT h e ef2 fec t io n o f d iffe ren t ex t rac t in g reagen t s o n A g a r icu s bla z e i po ly sacch a r ide s is a lso repo r t2 . , edT h e re su lt s show th e ex t rac t ta t io can b e im p ro ved w ith A g a r icu s bla z e i in fu sed in .O x a lic ac id A mm o n ium O x a la te so lu t io n s , Keyword s A g a ricu s bla z e i f ru it in g bo dy po ly sacch a r ide sA g a ricu s bla z e i m yce lium , po ly sacch a r ide sex t rac t io n () 上接第 65 页 () 6 , , . . . . , D zh afa ro v E A E fend ieva Sh M Sady se d io x ideA ze rbKh imZh 1979 1: 115, 120 ()7 池乃书, 阮秀英, 张永祥. 塑料基二氧化铅电极的制造方法. 中国专利: 87104462. 2 1989 A B S The An od ic Beha v iour of M nO 2 an d PbO 2 E lec trode Prepa red by S im ultan eous E lec trodepo s it ion Zhen g X ia ohon g D a iM e im e i Chen Guron g ()D ep a rtm en t of C h em is t ry A bstra c t T h e ano d ic evo lu t io n o f o x ygen in su lp h u r ic ac id w a s in ve st iga t io n o n th e . 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