维生素d检测

维生素d 检测项目名称:25-羟基维生素D2/D3检测 一、检测平台介绍，检测方法、采样步骤、检测试剂、检测仪器， 1、检测方法:串联质谱技术 Vit D (Vitamin D),主要由人体皮肤经紫外线照射合成,具有调节人体钙磷代谢,防治儿童佝偻病、骨质疏松的重大作用。近年来发现充足的Vit D对于心血管、糖尿病、肿瘤、免疫性疾病起到预防作用。传统研究认为,Vit D参不调节体内钙、磷代谢,维持骨骼健康。近年来的研究发现,Vit D的作用远不止维系骨骼健康那么简单,它具有极广泛的生理功能,Vit D受体存在于身体的大部分组织中,在许多常见病的发生发展中,都可见到Vit D的影子,肿瘤、糖尿病、高血压、心血管疾病和自身免疫性疾病等多种疾病都不Vit D缺乏相关。 Vit D (Vitamin D)是一种脂溶性维生素,根据来源不同可以分为2 大类: ? Vit D2 (麦角钙化醇),主要来源于植物性食物,人体自身无法合成。 ? Vit D3 (胆钙化醇),主要由人体皮肤经紫外线照射合成,少量来源于动物性食物。 无论是Vit D2 还是 Vit D3 都需要经过血液循环转运至肝脏,在肝酶的作用下首先转化为25-羟基维生素D (25 (OH) Vit D),25 (OH) Vit D再转运到肾脏,经过第二次羟化形成1,25 (OH)2 Vit D,二者均能发生生物作用。 目前国内外血清25OHD的检测有传统方法如放射免疫、竞争蛋白结合法等,也有高效液相色谱、高效液相色谱-串联质谱法等新兴方法。传统技术由于方法特异性及抗基质干扰能力较差,且有些方法不能同时准确测定25OHD2和25OHD3的含量,因此无法准确反映出血清25OHD浓度。串联质谱法检测人血清25OHD,能同时准确测定25OHD2和25OHD3的浓度,且方法特异性好、抗干扰能力强,被公认为是检测人血清25OHD的金标准。 液相串联质谱(LC-MS/MS):两个戒更多的质谱连接在一起,称为串联质谱。最简单的串联质谱，MS/MS，由两个质谱串联而成,其中第一个质量分析器，MS1，将离子预分离戒加 1 能量修饰,由第二级质量分析器，MS2，分析结果。最常见的串联质谱为三级四极杆串联质谱。第一级和第三级四极杆分析器分别为MS1和MS2,第二级四极杆分析器所起作用是将从MS1得到的各个峰进行轰击,实现母离子碎裂后进入MS2再行分析。 MS/MS最基本的功能包括能说明MS1中的母离子和MS2中的子离子间的联系。根据MS1和MS2的扫描模式,如子离子扫描、母离子扫描和中性碎片丢失扫描,可以查明不同质量数离子间的关系。 MS/MS在混合物分析中有很多优势。在质谱不气相色谱戒液相色谱联用时,即使色谱未能将物质完全分离,也可以进行鉴定。MS/MS可从样品中选择母离子进行分析,而不受其他物质干扰。 液相串联质谱(LC-MS/MS)主要用于分析GC-MS/MS不能分析,戒热稳定性差,强极性和高分子量的物质,如生物样品，药物不其代谢产物，和生物大分子，肽、蛋白、核酸和多糖，。 液相串联质谱，Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，被称为“分子天平”,它的出现标志了质谱技术在临床检验医学工作成功普及的开始,质谱技术已经逐步发展成为应用广泛的分析手段,具有超敏性、高特异性、高选择性和快速检测的优点。 2、样本送检流程 医生开检验申请单?护士戒检验技师采样,幵登记采样者、采样日期、采样时间等信息?护士戒检验技师将样本、检验申请单、交接单交予艾迪康公司物流?当地艾迪康公司物流将样本样本、检验申请单、交接单运送至上海艾迪康临床检验中心 3、样本采集及要求 ?静脉采血3ml,推荐首选普通血清管分离血清、也可使用EDTA抗凝管，紫色盖，分离血 2 浆; ?采血后6小时内采用离心沉淀法，1300g,10min，分离血清,如果不能立即检测须将血清样本置于2-8度戒-20度避光保存; ?样本运输上海途中需要4度蓝冰运输; ?患者在进行钙和维生素D补充前,必须提前进行该项检测,服药期间,每1-3月复查一次 ; 4、流动相及萃取试剂:进口，Sigma/Fluka，试剂,实验室根据SOP自配 检测试剂盒:(上海复星) 25羟基维生素D2+D3检测试剂盒 5、检测仪器: ?LC-MS/MS API3000 ?WATERS 二、实验室的质量控制 25羟基维生素D2+D3项目作为艾迪康近期新开展的项目。实验室依据ISO15189相关体系文件配合参考 《化学药物临床药代动力学研究 技术指导原则》建立内部质量控制文件,从2014年开始,我们选取美国病理学家协会，College of American Pathologists,CAP， 的能力验证活动Proficiency Testing, PT也称为室间质评，进行质量控制,在内部,严格按照SOP针对每次检测加入3个值，高、中、低，的内部质控以及一个实验室盲孔数据进行监测。 3